Diagnóstico Genético Pré-Implantacional PGD-FISH

Diagnóstico Genético Pré-Implantacional
PGD-FISH
Manual Pré-caso
O requerimento do kit de pocedimento deverá ser solicitado no dia da coleta de oócitos da
paciente. Estocar as soluções 1 e 2 em temperatura ambiente e a solução 3 a 4°C. Se por alguma
razão o ciclo de FIV tiver que ser cancelado os mesmos são estáveis se estocados corretamente.
Para fazer o requerimento entre em contato pelo telefone 0xx11-2114-6654/ 6655.
Este kit inclui:
1-
Solução 1 (HCl 1N) e Solução 2 (Tween-20). Estes tubos serão enviados a
temperatura ambiente.
PS: Solução 1 é tóxica e corrosiva. Tenha cuidado ao manuseá-la.
2-
Solução 3 (Solução hipotônica). Este tubo será enviado a temperatura ambiente,
mas deverá ser estocado a 4°C imediatamente após a chegada.
3-
Lâmina para biópsia. Serão enviadas lâminas para fixação dos blastômeros.
Tomar cuidado para não manusear as lâminas sem luvas deixá-las estocadas
dentro do recipiente em que serão enviadas e em lugar seco.
4-
Termo de consentimento. O termo original deverá ser assinado para que o
diagnóstico possa ser realizado. O diagnóstico NÃO SERÁ REALIZADO caso o
termo não esteja assinado, SEM EXCEÇÕES.
5-
Folha de Dados da Biópsia e Fixação. É necessário relatar todas as
intercorrências durante o processo da biópsia embrionária e também as
características do ciclo (nº de embriões biopsiados, nº de blastômeros
encontrados) na folha de dados da biópsia, assim como quaiquer intercorrências
ocorridas durante a fixação dos núcleos.
6-
Checklist do embriologista, descrito abaixo.
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Checklist do Embriologista
Antes da biópsia:
1. Anote todos os dados dos pacientes envolvidos e do ciclo em questão na Folha de Dados e
tire uma cópia para que esta fique em sua clínica.
2. Faça a solução de fixação descrita no protocolo de procedimento recomendado para
biópsia.
3. Guarde o recipiente em que as lâminas foram enviadas e reutilize-o para o reenvio
da lâmina para a Genesis Genetics Brasil (GGB). Encontre uma pequena caixa de
isopor onde a mesma possa ser inserida, tomando cuidado para esta fique estável e
não se mova durante o transporte.
4. Leia os protocolos e o termo de aceitação e rejeição das lâminas. Ligue se tiver
dúvidas.
Alguns cuidados deverão ser tomados durante a fixação:
1) Verificar se no blastômero biópsiado há núcleo.
2) Verificar se a numeração enviada na lâmina corresponde à numeração do
embrião em sua clínica.
3) Verificar se não há citoplasma no núcleo. Caso haja a presença de citoplasma
sobre o núcleo, faça uma nova biópsia.
4) Marcar todas as intercorrências no relatório de biópsia.
Se o embrião não estiver no estágio correto de desenvolvimento ao terceiro dia,
rediscuta a conduta da biópsia com o médico responsável. Estes embriões
raramente produzem bons resultados moleculares, provavelmente porque
nucleases e lisosimas estão sendo liberadas pelo embrião e o DNA esta sendo
degradado. Nossa preocupação é que esta condição leve a resultados falsos de FISH.
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Após a biópsia e antes do envio:
1. O que deve ser enviado a GGB juntamente com a amostra:
a. Termo de Consentimento ORIGINAL em um envelope dentro da caixa. O
diagnóstico NÃO SERÁ REALIZADO caso o termo não esteja assinado, SEM
EXCEÇÕES. Uma CÓPIA do Termo de Consentimento para PGD deve ser
deixada em sua clínica.
b. Folha de dados da biópsia e deixe uma cópia na sua clínica.
c. Ficha de solicitação do exame
2. Tudo deverá ser correta e completamente preenchido
3. Siga as direções de armazenamento e envio da amostra. Certifique-se de que todos
os documentos necessários estão no envelope.
4. Informe-nos por telefone quando a amostra for enviada.
Como enviar a amostra - transporte:
Para o transporte da amostra, procedemos da seguinte maneira:
1) Assim que confirmada a data da biópsia (até, no máximo, um dia antes), o
embriologista responsável deverá ligar para GGB e informar a data da mesma e o
painel de sondas que será utilizado.
2) A lâmina deve ser colocada em um bórel (mesmo recipiente em que foi
encaminhada a lâmina para biópsia) e, presa no interior de uma caixa de isopor com fita
adesiva, nos espaços vazios completar com papel absorvente (esses utilizados para
enxugar as mãos). Feito isso, lacrar a caixa com fita adesiva.
3) O meio de transporte deverá ser discutido e decido conjuntamente com a GGB. Para
isto, entre em contato com os profissionais da GGB (11 2114 6654 ou 11 2114 6655)
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4) Os seguintes documentos deverão ser enviados junto com a amostra preenchidos
completa e corretamente, e assinados (quando necessário):
a. Ficha de solicitação de exame;
b. Folha de dados da biópsia e fixação;
c. Termo de consetimento do paciente.
5) O resultado do exame será enviado para e-mail indicado na ficha de solicitação na
manhã do dia 5 do desenvolvimento embrionário.
RESULTADOS:
1. Para Clínicas de São Paulo (capital):
A biópsia é realizada na manhã do dia 3 de desenvolvimento embrionário. É
importante lembrar que o resultado para o PGD FISH de 5 cromossomos sairá na
manhã do dia seguinte a biópsia caso a lâmina com a fixação seja entregue até às
15 horas do dia da biópsia. Para os PGDs FISH de 7, 9 e 11 cromossomos é
necessário que a lâmina seja entregue até às 9 horas do dia da bióspia para que o
resultado saia na manhã do dia seguinte. Invariavelmente, caso a lâmina chegue
após os horários estabelecidos, os resultados sairão com 24 horas de atraso, ou
seja, no dia 5 do desenvolvimento do embrião.
2. Para clínicas fora de São Paulo:
O Resultado sairá no dia 5 do desenvolvimento embrionário devido ao
transporte.
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Procedimento recomendado para biópsia
1. Para evitar que haja citoplasma sobre o núcleo proceda da seguinte maneira:
a. No máximo 1 hora antes da realização da biópsia, faça uma solução de difusão
0,01N HCl (100µl solução 1 + 10ml H2O ultra-pura) com 1% da solução 2 (10ml
HCl 0,01N + 100µl solução 2). Esta solução deve ser feita tomando cuidado para
que os recipientes estejam sempre bem fechados, por causa da evaporação. É
necessário agitar bem o frasco em que ela for colocada.
2. Os blastômeros deverão ser fixados na lâmina da seguinte maneira:
1
O procedimento de fixaçao consiste em:
1- Transferir o blastômero biopsiado para uma gota com a Solução 3 (Hipotônica), onde
deve permanecer de 1 a 2 minutos.
2- Marcar no lado oposto da lâmina, utilizando lápis de diamante ou tungstênio, com um
pequeno círculo, o local onde este blastômero será colocado, indicando qual o número
de referência dele ( ex: 1, 2, 3...). PS: sempre faça o círculo com caneta de diamante ou
tungstênio o número correspondente ao blastômero ANTES de iniciar a fixação, para
que o núcleo não se “perca” na lâmina.
3- Colocar uma gota (3-4µl) de solução de difusão (0,01N HCl/ 1% Tween-20) sobre o
círculo feito na lâmina. Em seguida, transferir o blastômero da solução hipotônica, com
o mínimo de líquido possível, para a gota na lâmina.
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4- A transferência dos blastômeros para a solução de difusão deve ser realizada com
análise simultânea em microscópio de fase. Se não possuir microscópio de fase,
sugerimos a aquisição de um, pois será muito importante nessa etapa.
5- Verificar se houve rompimento do citoplasma e extrusão do núcleo. Caso a solução
esteja a ponto de secar e o núcleo ainda não tenha sido observado, adicionar mais 2µl
da solução de difusão (0,01N HCl/ 1% Tween-20).
6- Quando o núcleo estiver fixado, passe para o próximo blastômero e repita o
procedimento.
7- Caso o núcleo não seja visualizado, considere rebiopsiar o embrião.
8- As lâminas devem permanecer em temperatura ambiente por 1 hora até que a amostra
esteja completamente seca.
9- As lâminas completamente secas devem ser acondicionadas dentro de um portalâminas, para que as mesmas não corram risco de serem danificadas.
10- Lembre-se de identificar a lâmina (a lápis grafite) com o nome e sobrenome da paciente
e data da biópsia. É NECESSÁRIO QUE O NOME DA PACIENTE NA LÂMINA SEJA O
MESMO NOME DE IDENTIFICAÇÃO NOS DOCUMENTOS ENTREGUES.
11- Lembre-se de anotar todas as intercorrências do processo de fixação na Folha de Dados
da Fixação.
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Folha de Dados de Biópsia e Fixação
Nome da paciente: _________________________________________
Nome do marido: __________________________________________
Data da biópsia: _______________
N° do blastômero
número de células no momento da biópsia
Ex: 1
8 células
qualidade do embrião
*
*Referência da qualidade embrionária seguida: __________________________________________
N° do blastômero
núcleo visto no momento da
Núcleo foi visto na
observações
retirada do blastômero? S/N
fixação? S/N
Ex:1
N
S
biopsiada
segunda
célula
EX:2
S
S
biópsia fácil
Outras observações:
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