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Checklist do Embriologista
Antes da biópsia:
• Anote todos os dados dos pacientes envolvidos na Ficha de solicitação de DPI.
• Faça a solução de fixação descrita no protocolo de procedimento recomendado para biópsia.
• Guarde o recipiente em que as lâminas foram enviadas e reutilize-o para o reenvio da lâmina para
a Genesis Genetics Brasil. Encontre uma pequena caixa de isopor onde a mesma possa ser inserida,
tomando cuidado para esta fique estável e não se mova durante o transporte.
• Descreva em um papel o conteúdo desta caixa.
• Contrate um serviço de entrega rápida para que a caixa seja levada até a Genesis Genetics
Brasil. É importante lembrar que o resultado para o DPI FISH de 5 cromossomos sairá na manhã do
dia seguinte a biópsia caso a lâmina com a fixação seja entregue até às 15 horas do dia da biópsia.
Para o DPI FISH de 9 cromossomos é necessário que a lâmina seja entregue até às 9 horas do dia da
bióspia para que o resultado saia na manhã do dia seguinte. Invariavelmente, caso a lâmina chegue
após os horários estabelecidos, os resultados sairão com 24 horas de atraso, ou seja, no dia 5 do
desenvolvimento do embrião.
• Leia termo de aceitação e rejeição das lâminas. Ligue se tiver dúvidas.
Alguns cuidados deverão ser tomados durante a fixação:
1- Verificar se no blastômero biópsiado há núcleo.
2- Verificar se a numeração enviada na lâmina corresponde a numeração do embrião em sua clínica.
3- Verificar se não há citoplasma no núcleo. Caso haja a presença de citoplasma sobre o núcleo, faça
uma nova biópsia se puder ser feito.
4- Marcar todas as intercorrências no relatório de biópsia.
Se o embrião não estiver no estágio correto de desenvolvimento ao terceiro dia, rediscuta a
conduta da biópsia com o médico responsável.
Estes embriões raramente produzem bons resultados moleculares,provavelmente porque nucleases
e lisosimas estão sendo liberadas pelo embrião e o DNA esta sendo degradado. Nossa preocupação
é que esta condição leve a resultados falsos de FISH.
Após a biópsia e antes do envio:
• Inclua o Termo de Consentimento ORIGINAL, Ficha de solicitação de exame de DPI e Folha de
dados da biópsia em um envelope dentro da caixa. O diagnóstico NÃO SERÁ REALIZADO caso um
desses
documentos não estejam devidamente preenchidos e assinado (no caso do termo de consentimento),
SEM EXCEÇÕES.
• Inclua uma CÓPIA do Termo de Consentimento para DPI de sua clínica.
• Inclua a folha de dados da biópsia e deixe uma cópia na sua clínica.
• Siga as direções de armazenamento e envio da amostra. Certifique-se de que todos os
documentos necessários estão no envelope.
• Informe-nos por telefone quando enviar a amostra.
Após o envio:
• A biópsia é realizada na manhã do dia 3 de desenvolvimento embrionário. É importante lembrar
que o resultado para o DPI FISH de 5 cromossomos sairá na manhã do dia seguinte a biópsia caso a
lâmina com a fixação seja entregue até às 15 horas do dia da biópsia.Para o DPI FISH de 9
cromossomos é necessário que a lâmina seja entregue até às 9 horas do dia da bióspia para que o
resultado saia na manhã do dia seguinte. Invariavelmente, caso a lâmina chegue após os horários
estabelecidos, os resultados sairão com 24 horas de atraso, ou seja, no dia 5 do desenvolvimentodo
embrião.
Procedimento recomendado para biópsia
1- A lâmina guia deverá ser colocada sob a lâmina de fixação e utilizada para marcar com caneta
diamante ou de tungstênio a região em que deverão ser fixados os blastômeros. Lembramos que
haverá duas regiões possíveis uma quadrada e uma circular em que poderão ser fixados até 4 e 8
blastômeros respectivamente.
2- Para evitar que haja citoplasma sobre o núcleo proceda da seguinte maneira:
No máximo 1 hora antes da realização da biópsia, faça uma solução 3:1 (solução 1: solução 2) com
0,5% da solução 3 (por exemplo: 15,ml de metanol, 0, 5 ml de ácido acético e 10 ìl da solução 3). Esta
solução deve ser feita tomando cuidado para que os recipientes estejam sempre bem fechados, por
causa da evaporação. É necessário agitar bem o frasco em que ela for colocada e deixá-lo no freezer
até o momento do uso. Mesmo durante a fixação dos blastômeros é necessário que a solução
continue gelada (deixe-a em recipiente gelado, com bolsas de gelo).
3- Os blastômeros deverão ser fixados na lâmina da seguinte maneira:
Para caso de até 8 blastômeros utilisar a região circular:
1
2
3
4
5
6
7
8
Para caso de até 4 blastômeros utilisar a região quadrada:
1
2
3
4
O procedimento de fixaçao consiste em:
1- Retirar o blastômero selecionado da solução hipotônica e colocá-lo, com o mínimo de meio
possível, sobre a lâmina.
2- Marcar, utilizando caneta de diamante ou tungstênio, com um pequeno círculo o local onde este
blastômero foi colocado, indicando qual o número de referência dele ( ex: 1, 2, 3...).
PS: sempre faça o círculo com caneta de diamante ou tungstênio o número
correspondente ao blastômero ANTES de iniciar a fixação, para que o núcleo não se “perca” na
lâmina.
3- Pingar uma gota da solução fixadora sobre o núcleo e, com o auxílio da lupa, verficar o momento
em o núcleo começa a aparecer novamente, após a solução secar. Imediatamente antes que seque,
pingar mais uma gota da solução fixadora.
4- Em microscópio de fase, verificar se o núcleo foi fixado
5- Caso tenha sido fixado, passe para o próximo blastômero e repita o procedimento.
6- Caso o núcleo não seja visualisado, considere reobpsiar o embrião.
7- Ao término da fixação de todos os blastômeros coloque a lâmina dentro de um porta-lâminas, para
que a mesma não corra o perigo de ser danificada.
8- Lembre-se de identificar a lâmina com o nome e sobrenome da paciente e data da biópsia.É
NECESSÁRIO QUE O NOME DA PACIENTE NA LÂMINA SEJA O MESMO NOME DE
IDENTIFICAÇÃO NOS DOCUMENTOS ENTREGUES.
9- Lembre-se de anotar todas as intercorrências do processo de fixação na Folha de Dados de
Biópsia e Fixação.