Bruno Oliveira de Carvalho

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UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO
PRÓ-REITORIA DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO
Programa de Pós-Graduação em Ciência, Tecnologia e Inovação
em Agropecuária - Doutorado Binacional
3º Seminário PPGCTIA UFRRJ/UNRC
UTILIZAÇÃO DE TÉCNICA INDEPENDENTE DE CULTIVO NA DETECÇÃO DE
BACTÉRIAS CAUSADORAS DE MASTITE EM AMOSTRAS DE LEITE BOVINO1
Bruno Oliveira de carvalho2
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Miliane Moreira Soares de Souza
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Irene da Silva Coelho
Mastite bovina é a enfermidade de maior importância na pecuária leiteira e
apresenta diversas causas. Dentro das mastites bacterianas, alguns de seus
agentes são de difícil cultivo, o que dificulta o diagnóstico através dos métodos
convencionais de isolamento bacteriano. Técnicas de diagnóstico bacteriano
independente de cultivo, como detecção de material genético direto da amostra de
leite, é uma alternativa que viabiliza o diagnóstico de mastite causada por esses
agentes. O objetivo do estudo foi avaliar a diversidade bacteriana em amostras de
vacas com mastite abrangendo a detecção de bactérias de difícil cultivo. Para isso,
serão selecionadas 15 vacas em lactação que apresentem mastite em pelo menos
um dos quatro tetos. Será realizada ordenha em todos os tetos, esse material será
enviado para o Laboratório onde será realizado o isolamento bacteriano e posterior
identificação fenotípica. Paralelamente ao isolamento bacteriano, as amostras serão
submetidas à extração de DNA bacteriano total e posterior amplificação pela técnica
de nested-PCR com os primers 27f e 1512r seguida de amplificação com os primers
GC-338f e 518r. Será realizada também extração do DNA bacteriano dos isolados e
posterior amplificação com os mesmos primers. O produto das respectivas
amplificações serão submetidos à eletroforerse em gel com gradiente desnaturante,
DGGE. Serão comparados os padrões de bandas gerados pelo material extraído
diretamente do leite com os das bactérias isoladas da mesma amostra, com o
objetivo de selecionar bandas exclusivas dos materiais extraídos diretamente das
amostras para posterior sequenciamento. O resultado esperado é a real dimensão
da microbiota bacteriana envolvida nas mastites com apontamento de bactérias não
detectadas pelos métodos de cultivo bacteriano.
Palavras-chave: mastite, bactéria, DGGE
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Agência de Fomento: CAPES
Doutorando PPGCTIA E-mail: [email protected] Currículo: http://lattes.cnpq.br/0463791291327123
Orientadora PPGCTIA.Currículo: http://lattes.cnpq.br/0865211214618618
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Co-orientador PPGCTIA. Currículo: http://lattes.cnpq.br/2191695584157582
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