Microbial Biology II Módulo: Protozoários

TEÓRICA 9
DOCENTES:
Prof. Helena Galvão
(responsável – componente teórico)
Prof. Margarida Reis
(componente prático)
FISIOLOGIA DO CRESCIMENTO BACTERIANO
 Na microbiologia a unidade de estudo é a população e não o indíviduo devido ao
tamanho reduzido dos microrganismos.
 Definição de crescimento microbiano: aumento ordenado de todos os
constituintes celulares » conceito de crescimento equilibrado, no qual todas as
medições de crescimento da população aumentam proporcionalmente (Ex: nº
células, biomassa, teor proteico, ADN etc). Assim, culturas em crescimento
equilibrado têm composição bioquímica constante enquanto o meio de cultivo se
mantiver favorável. Esta composição varia em resposta a alterações do meio e
fases diferentes de crescimento
 A natureza do crescimento microbiano é diferente consoante o tipo de
microrganismo/micróbio (Ex: fissão binária de bactérias, gemulação de leveduras,
divisão assimétrica nas diatomáceas, prolongamento dos filamentos/hifas nos
fungos, crescimento explosivo nos virus).
 O crescimento microbiano pode ser estudado em sistema fechado ou cultivo em
“batch” (tubos de ensaio, placas com meios sólidos), durante o qual não há
renovação do meio de cultura e a população passa por várias fases com taxas de
crescimento diferentes. Em sistema aberto (ex: quimiostatos), o meio de cultura é
continuamente renovado e a taxa de crescimento mantem-se constante.
Natureza do crescimento microbiano
Modos de crescimento em
microrganismos diferentes:
fissão binária e assimétrica
de bactérias; gemulação de
leveduras; divisão
assimétrica dediatomáceas;
prolongamento de
filamentos/hifas de fungos
Curvas & taxas de crescimento
Função logarítmica: Nt = No eµt
Taxa de crescimento: µ = ln Nt – ln No
t
Tempo de geração: tg = ln2/µ
Declive= µ
N.B. Curva generalizada de crescimento
ocorre em sistema fechado sem renovação
do meio de cultura no qual esgotam-se
nutrientes e acumulam metabolitos tóxicos
Contagem directa e indirecta
 Contagem directa:
- micróscopia contraste de fase e de inversão para enumerar de protistas
e bactérias terrestres; micróscopia de epifluorescência para enumerar
bactérias aquáticas/marinhas
- contagem electrónica (Coulter counter)
- citómetro de fluxo (Coulter counter + laser scanner)
- nefelometria (turvação medida por espectrofotómetro)
 Contagem indirecta:
- plaqueamento em meios sólidos (UFCs)
- tubos múltiplos (NMP: Nº Mais Provável)
- membranas filtrantes (UFCs)
Métodos de contagem
Amostra filtrada através
de membranas
(porosidade 0.2 ou 0.45
µm) colocadas sobre
meios sólidos selectivos
Cultura contínua (sistema aberto) - quimiostato
Renovação contínua do meio
de cultura mantendo condições
e taxa de crescimento
constantes
Nt – No = D
t
D
N constante
Factores que afectam o crescimento bacteriano
Temperatura
Curva de crescimento
assimétrica devido ao
efeito de desnaturação
proteica a temperaturas
superiores ao óptimo
Factores que afectam o crescimento bacteriano
Temperatura
N.B. bactérias
marinhas são
psicrófilas
moderadas
Bactérias hipertermófilas de fissuras hidrotermais
Fumarolas negras a temperaturas > 350 o C
Factores que afectam o crescimento bacteriano
pH e nível de oxigénio
Curvas de crescimento simétricas de bactérias
acidófilas, neutrófilas ou alcalinófilas
Crescimento de bactérias inoculadas
com picadas em profundidade em
agarose
N.B. Gradiente de O2 determina zona
de crescimento
Factores que afectam o crescimento bacteriano
Salinidade
Classe
fisiológica
Espécie
representativa
Tolerância à
concentração de
NaCl ( g mL-1 )
Bactérias não-halófilas, halófilas moderadas e
extremas.
N.B. Bactérias marinhas são halófilas
moderadas