Técnicas de coloração histológicas para avaliar da reação
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Técnicas de coloração histológicas para avaliar da reação de Incompatibilidade sexual em cacaueiro Logomarca Autores: Marcos Ramos da Silva1, Kaleandra Sena2, Uilson Vanderlei Lopes3 1 Bolsista IC ; Centro de Pesquisa do Cacau (CEPEC/CEPLAC), Rod. Ilhéus-Itabuna, Km 22, 45600-970 ; [email protected] ; (73) 3215 2554, Itabuna, BA. 2 Pesquisadora; Centro de Pesquisas do Cacau (CEPEC/CEPLAC), Rod. Ilhéus-Itabuna, km 22, 45600-970, Itabuna, BA. 3 Pesquisador; Centro de Pesquisas do Cacau (CEPEC/CEPLAC), Rod. Ilhéus-Itabuna, km 22, 45600-970, Itabuna, BA. INTRODUÇÃO A incompatibilidade sexual é uma barreira na produção de cacau, devendo sofrer seleção negativa em programas de melhoramento. Métodos histológicos, baseados na fusão de núcleos gaméticos eliminam algumas deficiências apresentadas pelos métodos atuais de campo. Porém, para uso, os métodos histológicos precisam ser otimizados, particularmente quanto aos métodos de coloração. Assim, o presente estudo visa identificar métodos de coloração adequados à avaliação da incompatibilidade pelo método histológico. MATERIAL e MÉTODOS Para identificar um método avaliação da reação de incompatibilidade, realizou-se o estudo comparativo entre os corantes Azul de toluidina, Hematoxilina férrica, Pianezze e Reativo Schiff. Vinte ovários de cacau foram processados para análise em microscopia de luz. Na comparação dos métodos foi considerada a habilidade de diferenciação dos núcleos gaméticos, a preservação das células e dos componentes protéicos. As amostras foram caracterizadas em Baixa, Média ou Alta habilidade de diferenciação ou preservação. RESULTADOS E DISCUSSÃO O ácido periódico-Schiff, bem como o Pianeze IIIb, apresentaram resultados satisfatórios para avaliar a fusão do núcleos. Diferente das outras técnicas (Figuras 1A e 1B), as duas técnicas reagiram com os componentes do núcleo, apresentando o nucléolo com estrutura arredondada e coloração mais intensa (Figuras 1C e 1D). Ambas as técnicas permitem a observação de detalhes das células embriogênicas. Contudo, a técnica de PianezeIIIb se destaca por sua baixa complexidade e melhor aplicabilidade em laboratório (Tabela 1). Tabela 1. Resultados da aplicação de quatro métodos de coloração em cortes histológicos de ovários de cacaueiro, em relação à diferenciação dos núcleos, à preservação dos tecidos e dos componentes protéicos, à complexidade da aplicação da técnica e o tempo de preparo. Técnica de coloração Diferenciação Diferenciação Visualização Complexidad Tempo de dos núcleos dos nucléolos tecidos do e da técnica preparação gaméticos saco embrionário Baixa 30 dias Hematoxilina férrica Média Baixa Média Baixa 20 min. Azul de toluidina Baixa Baixa Baixa Ácido periódicoAlta Alta Média Média 24 horas Schiff Alta Média 20 min. Alta Baixa Pianeze IIIb Figura 1. Micrografias do saco embrionário de T. cacao utilizando diferentes métodos de coloração histológica para caracterização da reação de incompatibilidade sexual: Métodos de coloração com hematoxilina férrica (A) e Azul de Toluidina, (B) reagindo somente na diferenciação do núcleo; Métodos de coloração com Ac. Periódico Reagente-Schiff (C) e Pianeze IIIb (D) reagindo na diferenciação do núcleo e nucléolo (setas). n= núcleo. 1000x CONCLUSÕES A técnica de coloração PianezeIIIb é mais fácil e rápido de ser produzido, além de destacar os órgãos de interesse, sendo, portanto, o mais indicado em programas de seleção de genótipos autocompatíveis.
