Bula - GeneProof as

Bula
GeneProof
BK/JC Virus (BK/JC) PCR Kit
Dispositivo médico de diagnóstico in vitro
O kit foi fabricado de acordo com a Directiva Europeia 98/79/CE como sendo um dispositivo para diagnóstico médico in vitro e foi
concebido para uso profissional em laboratórios clínicos e de investigação especializados.
CONTEÚDO
REF
Versão ISIN
Versão ISEX
O padrão interno (IS) está incluido na Mistura
O padrão interno (IS) é fonecido num tubo separado
Principal (MasterMix)
Isolamento de ácidos nucleicos e controlo de inibição
BKJC/ISIN/025 BKJC/ISIN/050 BKJC/ISIN/100 BKJC/ISEX/025 BKJC/ISEX/050 BKJC/ISEX/100
25 rxn
50 rxn
100 rxn
25 rxn
50 rxn
100 rxn
MasterMix
BKJCV
1x750 µl
2x750 µl
4x750 µl
1x750 µl
2x750 µl
4x750 µl
CALIBRATOR
BKJC
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
1x200 µl
-
-
-
1x1000 µl
1x1000 µl
2x1000 µl
4
10 copy/µl
CALIBRATOR
BKJC
3
10 copy/µl
CALIBRATOR
BKJC
2
10 copy/µl
CALIBRATOR
BKJC
1
10 copy/µl
Internal Standard
BKJC
CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO E TRANSPORTE
Os kits devem ser transportados e armazenados a temperaturas entre os -85°C e os -10°C. O kit permanecerá estável pelo menos até a
data de validade impressa na embalagem, se a temperatura de armazenamento for mantida. Congelamentos e descongelamentos
repetidos dos componentes do kit podem resultar numa redução da qualidade de deteção
ESPECIFICAÇAO TÉCNICA
Sequência alvo
Especificidade
A sensibilidade (LOD)
Precisão da medição
Intervalo de medição linear
Tipos de ampostras
Unidades medidas
Controlo de Qualidade
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secção conservativa de ADN de um gene de cópia única que se sobrepõe ao limite entre o gene para
as proteínas VP1 e VP2
BK virus (BKV) e JC virus (JVC)
do BK virus atinge 0,596 cópias/µl com a probabilidade de 95%
no caso do JC virus atinge 0,528 cópias/µl com a probabilidade de 95%
para o BK virus no intervalo entre 104-101 cópias/µl a precisão da deteção é de 0,5 log;
para o JC virus no intervalo entre 104-101 cópias/µl a precisão da deteção atinge 0,5 log.
para o BK virus no intervalo entre 107-0,596 cópias/µl; para o JC virus no intervalo entre 107-0,528
cópias/µl.
sangue total em EDTA,urina, liquido cefalorraquidiano
cópias/ml
regularmente testado pela QCMD e Instand e.V. com Paineis de Avaliação Externa de Qualidade
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PRINCIPOS DO MÉTODO
O kit de PCR foi concebido para deteção e diferenciação dos vírus JC e BK através do método de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR
multiplex) em tempo real. A deteção e diferenciação do BK /JC baseiam-se no princípio da amplificação da sequência de ADN
conservativa específica que se sobrepõe ao limite entre o gene para as proteínas VP1 e VP2 e medindo o aumento na concentração do
produto de amplificação durante o processo de PCR por meio de sondas marcadas por fluorescência. A presença do vírus BK é indicada
pelo aumento de fluorescência no fluoróforo FAM, e a presença do vírus JC é indicada pelo aumento de fluorescência no fluoróforo Cy5.
Está incluído um Padrão Interno (IS) na mistura de reação controlando a possível inibição da reação de PCR (versão ISIN) ou também a
qualidade da extração de ADN (versão ISEX). É detetada amplificação positiva do Padrão interno (IS) no canal de fluorescência do
fluoróforo HEX. O kit de deteção é vantajoso devido à tecnologia “hot start ” minimizando as reações não específicas e garantindo a
máxima sensibilidade. A Master Mix pronta a usar contém uracil-ADN-glicosilase (UDG) eliminando a possível contaminação da reação
de PCR por produtos de amplificação. O kit efetua a deteção muito sensível do BK / JC em material clínico (sangue total com EDTA,
urina, líquido cefalorraquidiano). O kit foi projetado para diagnóstico in vitro e fornece deteção qualitativa e quantitativa.
Versão ISIN
O padrão Interno está incluído no tubo da Mistura Principal (MasterMix). A versão deste kit de PCR permite o controlo da inibição da
PCR.
Versão ISEX
O Padrão Interno é fornecido como um componente independente dentro da embalagem. Esta versão do kit de PCR permite tanto o
controlo da inibição da PCR como o controlo da eficiência do processo de purificação do ácido nucleico.
TECNOLOGIA DE DETEÇÃO DE ADN MICROBIOLÓGICO
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MANUAL DO USUÁRIO
COLHEITA E ARMAZENAMENTO DA AMOSTRA
O sangue total, urina e o líquido cefalorraquidiano (CSF) são materiais relevantes para a deteção de BKV e JCV. Quando se trabalha com
urina, recomenda-se a realização de centrifugação (min. 1000 g durante 20 min) antes do isolamento do ADN através de um teste de
ácidos nucleicos (NAT), de forma a assegurar a sedimentação das células que contêm o vírus. Quando o isolamento de ADN a partir de
sangue total não é adequado para congelar as amostras; é aconselhável mantê-las à temperatura ambiente (uma amostra de sangue
periférico não-coagulado deve ser colocada em EDTA e transportada para o laboratório a 2°C-8°C no prazo de 24 horas). As amostras de
líquido cefalorraquidiano podem ser congeladas e o teste pode ser realizado através de isolamento directo do ácido nucleico.
PURIFICAÇÃO DE ÁCIDO NUCLEICO
O isolamento de ácidos nucleicos deve ser executado com kits de isolamento disponíveis no mercado e de acordo com os protocolos de
isolamento de cada material clinico especifico. O fabricante recomenda os seguintes kits de isolamento:
GeneProof PathogenFree DNA Isolation Kit
croBEE NA16 Nucleic Acid Extraction System
Quando utilizar a versão ISEX dos kits de PCR, o Padrão Interno (IS) deve ser adicionado diretamente à amostra no inicio do processo
de isolamento para que no final cada 1 µl do volume final de eluição resultante contenha 0,1 µl do Padrão Interno (IS):
Volume de eluiçao
25 µl
50 µl
100 µl
200 µl
Padrão Interno
2,5 µl
5 µl
10 µl
20 µl
CONFIGURAÇĂO DA PCR
1. Adicionar 30 µl da Mistura Principal (MasterMix) para tubos de PCR.
2. Adicionar 10 µl da amostra de ácido nucleico isolado a 10 µl de Controlo Positivo em tubos de PCR individuais. O volume final da
mistura de reação deverá ser 40 µl.
É necessário manter todos os componentes entre +2°C e +8°C durante a preparação da PCR.
3. Fechar os tubos, centrifugar brevemente, inseri-los no equipamento e deixar amplificar de acordo com o seguinte perfil de PCR.
Tenha muito cuidado ao manusear o Controlo Positivo ou o material clinico, o manuseamento incorreto pode originar contaminação e consequente
danificação dos componentes do kit ou da Mistura Principal (MasterMix)! O fabricante não se responsabiliza pelos danos causados no kit em resultado
do seu manuseamento incorreto.
PERFIL DE AMPLIFICAÇÃO
Passo
Temperatura
Tempo
Recolha de dados
Ciclos
Pausa
37 °C
2 min
1
Pausa
95 °C
10 min
1
95 °C
5s
60 °C
40 s
72 °C
20 s
PCR
FAM+HEX+Cy5
45
EQUIPAMENTOS VALIDADOS
Os kits de PCR da GeneProof foram concebidos para serem utilizados em equipamentos de tempo-real de diferentes fabricantes. Este kit
de PCR foi validado com os seguintes equipamentos:
Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System
AriaMx Real-Time PCR System
Dx/CFX96™ Real-Time PCR Detection System
LightCycler ® 480
LineGene 9600*
Mx3000P/3005P QPCR System
Rotor-Gene 3000*, Rotor-Gene Q*
SLAN® Real-Time PCR System
*A validação aplica-se aos modelos de equipamentosnos que possibilitam a deteção nos seguintes canais: FAM, HEX e Cy5.
Os kits de diagnóstico da GeneProof são continuamente validados com vários tipos de equipamentos. Por favor solicite a lista atual através
do email: [email protected].
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AVALIAÇÃO DA ANÁLISE DAS AMOSTRAS CLINICAS
Canal FAM
Canal Cy5
Canal HEX
Resultado
Interpretação
Válido
BKV positivo
Válido
JCV positivo
Válido
BKV+JCV positivo
Válido
negativo
Ct<38
Inválido
Ct>38
Inválido
AVALIAÇÃO QUANTITATIVA DA DETEÇÃO
Utilize a fórmula seguinte para calcular a concentração do virus em cópias/ml tendo em conta o volume de material que entra no
isolamento:
SC - Concentração da Amostra (copy/µL)
SC x EV
copy/ml=
IV
EV - Volume de Eluição (µl)
IV - Volume para Isolamento (ml)
Poderá utilizar a calculadora para a conversão da concentração de patógenos disponivel em www.geneproof.com para efetuar o cálculo
mais facilmente.
AVISO
As instruções de utilização válidas para cada kit espefifico estão incluidas na embalagem do mesmo ou poderão também ser solicitadas
ao fabricante no caso de um lote em particular. O kit deve ser eliminado após a utilização de acordo com os regulamentos legais e
considerando o facto de que não contém quaisquer componentes perigosos, infecciosos ou tóxicos que seriam sujeitos a regulamentos de
segurança especiais, e que os materiais de embalagem são compostos por papel e polipropileno. Caso tenha alguma dúvida, por favor
contacte o nosso Serviço de Apoio a Clientes.
atendimento ao cliente e suporte técnico
Tel.:
+420543211679
Fax:
+420516770824
email: [email protected]
Encomendas
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GeneProof a.s.
Vídeňská 119 / CZ-619 00 Brno / +420 543 211 679 / [email protected]
Versao: qBKJC_04_15_02
Válido de: 04.04.2016
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