Os adipócitos: como funcionam as células que acumulam gordura?

Grupo:
Alexandra Gonçalves, Joana
Salgado, Patrícia Marques, Vera
Cortez e Cláudia Cavadas
 Ana Rita Alter
 Mónica Ferreira
Introdução
Adipócitos: são células que armazenam lípidos e
regulam a temperatura corporal.
Os adipócitos brancos, quando
totalmente desenvolvidos, ou seja,
maduros, armazenam gordura
numa única e grande gota lipídica
que ocupa o centro da célula. A
função destes adipócitos é:
•fornecer proteção mecânica,
suavizando o impacto de choques,
•isolante térmico
•segregar hormonas.
Os adipócitos castanhos têm
como principal característica
regular a produção de calor e
consequentemente a
temperatura corporal. Ao
contrário do adipócito branco,
o adipócito castanho é menor,
possui várias gotículas de
triglicerídeos de diferentes
tamanhos, citoplasma
relativamente abundante e
numerosas mitocôndrias.
Pré-adipócito
capacidade de
proliferar
Adipócito
maduro
capacidade
de acumular
gotas
lipídicas
Objetivo
Testar fármacos, tais como Ehna;
Analisar a acumulação de lípidos nos
adipócitos;
Estudar os níveis de PPARgama nos
adipócitos.
Tipos de culturas de
células
Culturas primárias
Linhas celulares (3T3-L1)
Culturas primárias
Culturas feitas diretamente a partir de tecidos
animais (incluindo humanos) e vegetais. Tem um
tempo de vida e proliferação limitados.
Linhas celulares
Células que foram retiradas de tecidos animais, e
que foram modificadas de modo a poderem
proliferar indefinidamente.
Materiais e métodos
Técnicas laboratoriais para o estudo da
diferenciação dos pré-adipócitos em adipócitos.
Cultura celular
Oil red
Imunocitoquímica
Western blotting
Extração proteica;
Determinação da proteína (Método do BCA)
Western blot
Cultura celular
1. Passagem de células
2. Proliferação de pré-adipócitos
3. Diferenciação dos adipócitos
1. Passagem de células
Objetivo: Manter as células vivas
Promover a separação das células;
Reduzir o número de células em cada poço;
Impedir o stress celular e diferenciação;
Oil red
O oil red é um corante que quando adicionado
às culturas de células de adipócitos nos vai
ajudar a identificar quais as que já se encontram
diferenciadas, pois este corante vai tingir de
vermelho os lípidos que se encontrarem nas
células.
3T3-L1 não diferenciadas
3T3-L1 diferenciadas
Imunocitoquímica
Western Blotting
1. Extração proteica
2. Determinação da proteína (método BCA)
3. Western blot
1. Extração proteica
Aspirar
o meio
Tampão
RIPA
Raspar células e
juntar os 3 poços
da mesma
condição
2. Determinação da proteína
Método BCA
É utilizado como forma de comparação das
amostras com a curva padrão de uma proteína
conhecida, a Albumina (BSA)
Padrao Quantificação de proteina
0,45
0,40
0,35
Abs
0,30
0,25
0,20
y = 0,0728x + 0,1089
R² = 0,9881
0,15
0,10
0,05
0,00
0
1
2
Proteina
3
4
5
3. Western Blot
Resultado 1: aprendemos a pipetar!
Padrao Quantificação de proteina
0,45
Nota 20!!
0,40
0,35
Abs
0,30
0,25
0,20
y = 0,0728x + 0,1089
R² = 0,9881
0,15
0,10
0,05
0,00
0
0,5
1
1,5
2
Proteina
2,5
3
3,5
4
4,5
Resultado 2: sabemos tirar fotografias
Agora a sério!!!!
Resultado 3: uns utilizam a balança, nós utilizamos
oil red!!!
O que aprendemos
O fármaco é eficaz se:
A quantidade de proteína PPARgama
diminuir com a adição do fármaco.
A acumulação de lípidos nos adipócitos
diminuir.
Nota: Estas condições não são suficientes para
testar a eficácia de um fármaco.
O chocolate encolhe-te a roupa, o ehna
alarga-a!!! Faz a tua escolha!!