Estrutura, organização e evolução da região controladora do DNA

51º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 51º Congresso Brasileiro de Genética • 7 a 10 de setembro de 2005
Hotel Monte Real • Águas de Lindóia • São Paulo • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 85-89109-05-4
[email protected], [email protected]
Palavras chaves: Zaprionus indianus, mtDNA, região controladora
Dias, AS1; Machado da Silva, N2; Valente, VLS3; Valiati, VH1
1
Laboratório de Biologia Molecular, UNISINOS, São Leopoldo/RS; 2Laboratório de Bioinformática, UNISINOS, São Leopoldo/RS.
3
Departamento de Genética, Universidade Federal do Rio Grande do sul, Porto Alegre/RS.
Estrutura, organização e evolução
da região controladora do DNA
mitocondrial de Zaprionus indianus
A região controladora (RC) é uma grande seqüência não codificante do mtDNA, objeto de numerosos estudos
funcionais em vertebrados. Em Drosophila, esta região é conhecida como rica em A+T e o aspecto funcional
descrito, até o momento, é de estar associada à origem de replicação do mtDNA. Estudos comparativos
em vertebrados e invertebrados subdividiram-na em três domínios com diferentes níveis de variabilidade,
sendo que o domínio central seria a região mais conservada. Além da variabilidade nucleotídica, também
há uma grande variabilidade no tamanho. Por exemplo, no gênero Drosophila, a espécies D. virilis possui
uma RC com 1Kb de comprimento contra os 4.6 Kb de D. melanogaster, uma das mais longas descritas para
drosofilídeos. No presente estudo o objetivo é descrever a seqüência completa da região controladora de Z.
indianus e comparando-a, filogeneticamente, com os demais drosofilídeos. Também, determinar o padrão
estrutural visando contribuir para o entendimento evolutivo da região controladora do DNA mitocondrial
(mtDNA). Um fragmento de aproximadamente 1100pb, foi amplificado com primers que anelam nas
regiões tRNA met e 12S que flanqueiam a região controladora, foi purificado e clonado no plasmídeo
pGemT-Easy vector. Dez clones foram selecionados e seqüenciados em seqüenciador automático. Uma
seqüência, com boa qualidade, de aproximadamente 1000pb foi obtida e submetida à comparação com as
seqüências depositadas no GenBank, onde constatamos que se trata da região controladora do mtDNA.
Com a obtenção, pela primeira vez da RC de Z. indianus, foram desenhados primers específicos. Um novo
sequenciamento foi realizado, confirmando os primeiros resultados. A similaridade das seqüências da RC
com os demais drosofilídeos foi entre 66 e 83%. O conteúdo de A+T, para esta espécie é de (93,6%), muito
próximo ao encontrado para as demais espécies do gênero Drosophila (90%-96%). A análise filogenética
demonstrou uma maior proximidade entre Z. indianus e D. virilis, que formaram um grupo separado dos
demais drosofilídeos. Cabe salienta que as duas pertencem a gêneros, subgêneros e grupos bem distintos
e o agrupamento é conseqüência do número restrito de espécies com sua RC disponíveis. Resultados
preliminares demonstraram que apesar de algumas espécies terem RC com tamanhos e conteúdos de A+T
similar (acima de 90%), diferiram consideravelmente entre si no que diz respeito ao número de repetições
tanto em tanden como as simétricas. Tais aspectos apontam para diferenças importantes na estruturação da
região controladora do mtDNA durante a história evolutiva dos drosofilídeos.
Suporte Financeiro: CNPq, UNISINOS.
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