NOVA MUTAÇÃO PATOGÊNICA

NOVA MUTAÇÃO PATOGÊNICA CARACTERIZADA EM PACIENTE COM IMUNODEFICIÊNCIA COMBINADA
GRAVE LIGADO AO X (XSCID).
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Autores
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Guilherme de Macêdo Oliveira , Valéria Regina de Moura Castro , Júlio Cesar da Paixão , Paula de
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Oliveira Lauria , Sandra Maria Epifanio Bastos Pinto , Juan Clinton Llerena Junior
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Instituição IFF - Fiocruz - Instituto Fernandes Figueira (Av Rui Barbosa 716, Flamengo/RJ)
Resumo
OBJETIVOS
Implementar a tecnologia de sequenciamento do gene IL-2Rgamma com objetivo de caracterizar o perfil de mutações
e delinear o aconselhamento genético de duas famílias provenientes do Instituto Nacional Fernandes Figueira –
Fiocruz/RJ cujos casos índices apresentavam critérios de infecção de repetição atípica e baixa contagem de linfócitos
T.
MÉTODOS
Critérios de Inclusão: Pacientes com suspeita clínica ou com diagnóstico confirmado de imunodeficiência combinada
grave ligado ao X atendidos no IFF. Aspectos Éticos: Este trabalho foi submetido ao Comitê de Ética do IFF/Fiocruz e
à Plataforma Brasil sob cadastro: 27583314.4 0000.5269. Os pacientes foram investigados após colheita de material
biológico, cadastrado e analisado mediante assinatura prévia do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido.
Extração de DNA, PCR e Sequenciamento: Para extração de DNA das células em cultura foi utilizado o kit Gentra
Puregene Cell kit, da Qiagen, de acordo com as recomendações do fabricante. O DNA proveniente de alíquota de
sangue periférico foi extraído pelo método de Salting Out (Miller et al., 1988). Para cada reação de amplificação foi
utilizado 200ng de DNA; oligonucleotídeo iniciador específico para cada segmento, TaqDNA polimerase, MgCl2,
desoxiribonucleotídeo específico, tampão e H2O. O PCR consistiu de uma etapa inicial de desnaturação e ciclos
específicos padronizados para cada fragmento. Os oligonucleotídeos iniciadores utilizados nesta técnica estão
descritos na literatura (Julie et al., 2000 e Puck et al.,1997) e as condições para a realização da mesma foram
padronizadas no Laboratório de Biologia Molecular Aplicada com posterior sequenciamento pelo método Sanger
através da Rede de Plataforma Tecnológica / FIOCRUZ.
RESULTADOS
Probando, masculino, a termo, sem intercorrência neonatal, filho único de casal não consanguíneo. Com 8 meses de
vida foi admitido com quadro de febre (39ºC) de origem indeterminada, atraso do desenvolvimento motor, perda
ponderal desde os 5 meses de vida, episódios prévios de pneumonia, diarreia e vômitos. Exames laboratoriais
evidenciaram redução global das imunoglobulinas e leucócitos. Evoluiu com quadro grave de pneumonia e iniciou
antibioticoterapia de amplo espectro para microrganismos multirresistentes e administração de imunoglobulinas. A
contagem de linfócitos demonstrou um perfil T(-)B(low)NK(-). A análise do sequenciamento evidenciou uma
microdeleção de 3 bases na posição 5978 (exon 3), configurando uma perfil g.5978-5980 del TTG.
CONCLUSÃO
Foi encontrado uma microdeleção de 3 bases no exon 3 não levando à mudança do quadro de leitura (frameshift),
porém o efeito deletério desta última alteração leva a uma deleção de valina que pode estar relacionado com a
mudança importante na conformação ou estabilidade do IL-2Rgama. Além disto, não foi observada a mutação na
mãe do probando, caracterizando uma mutação de novo, permitindo ao aconselhamento genético estabelecer risco
de herança análogo ao da população para os pais.
Palavras-chaves: XSCID, IL-2Rgamma, Sequenciamento, Imunodeficiência Primária, Aconselhamento Genético
Agência de Fomento: Financiamento próprio IFF-Fiocruz