Sequenciamento de DNA Sequenciamento de DNA
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24/08/2009 Sequenciamento de DNA Sequenciamento de DNA • determinação da sequência de nucleotídeos do DNA/cDNA – método enzimático de Sanger (terminação de cadeia com didesoxirribonucleosídeos) – método de Maxam e Gilbert (degradação química do DNA) 1 24/08/2009 Sequenciamento de DNA • Método de Sanger ddATP, dCTP, dTTP, dGTP + ddATP, ddCTP, ddTTP, ddGTP • ddNTPs não apresentam 3’OH – impede a adição do nucleotídeo posterior – 32P ou 35S Sequenciamento de DNA 2 24/08/2009 Sequenciamento de DNA • Método de Maxam e Gilbert – degradação química do DNA – clivagem da molécula de DNA em combinações específicas de nucleotídeos Sequenciamento de DNA • Métodos manuais 3 24/08/2009 Sequenciamento de DNA • Sequenciamento automático de DNA Sequenciamento de DNA • déc. 80: – substituição das técnicas de radioatividade por marcadores fluorescentes (fluoróforos) • ddNTPs marcados com fluoróforos diferentes 4 24/08/2009 Sequenciamento de DNA • déc. 90: – sequenciamento por capilaridade • capilares preenchidos por gel • sistema de detenção de fluorescência confocal excitada por laser Sequenciamento de DNA • Sequenciamento automático de DNA 5 24/08/2009 Sequenciamento de DNA • Sequenciamento automático de DNA C A G T 6
