Avaliação do Status Sanitário do Rebanho Suídeo do Estado do Maranhão em Relação à Peste Suína Clássica e à Leptospirose: Estudo Imunológico e de Biologia Molecular Giselle Mesquita de França Galvão1, Daniel Praseres Chaves2 1 Mestrado Profissional em Defesa Sanitária Animal – UEMA. E-mail:[email protected] Docente do Departamento de Patologia/CCA/UEMA. E-mail: [email protected] 2 Resumo: O objetivo deste trabalho é conhecer a frequência da infecção pelo vírus da Peste Suína Clássica (PSC) e verificar a ocorrência de anticorpos anti-Leptospira no Estado do Maranhão. Serão colhidas amostras de sangue e fragmentos de tonsilas em matadouros sem serviço de inspeção distribuídos no norte e oeste do Estado. O diagnóstico sorológico para Peste Suína Clássica será realizado por ensaio imunoenzimático (ELISA), utilizando-se kit comercial e através de ensaios de biologia molecular(RT-PCR). Para Leptospirose será utilizada a técnica de soroaglutinação microscópica (SAM). Dentre os resultados, espera-se a não observação da circulação viral da Peste Suína Clássica, fato que fornecerá subsídios que poderão fundamentar as políticas estaduais de erradicação dessa enfermidade. Quanto à Leptospirose, o conhecimento da sua ocorrência em suínos adultos, servirá para identificar os sorovares circulantes no rebanho suídeo maranhense, permitindo a indicação de imunógenos eficazes para o seu controle. Palavras- Chave: Diagnóstico, Leptospirose, Peste Suína Clássica, Suíno Status of health evaluation herd of swine Maranhao state in relation to classical swine fever and leptospirosis: immune study and molecular biology. Abstract: The objective of this study is to know the frequency of infection of Classical Swine Fever (CSF) and check the occurrence of anti-Leptospira antibodies in the state of Maranhao. Blood samples and tonsils fragments shall be taken without inspection service slaughterhouses distributed in the north and west of the state. The serological diagnosis of Classical Swine Fever is done by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using a commercial kit and through molecular biology assays (RT-PCR). Leptospirosis is used for the microscopic agglutination test method (SAM). Among the results, we expect the non-observance of viral circulation of Classical Swine Fever, a fact that will provide subsidies that can support state policies to eradicate this disease. As for leptospirosis, knowledge of its occurrence in adult pigs, will serve to identify the circulating serotypes in Maranhãosuida herd, allowing indication of effective immunogens for its control. Keywords: Diagnostic, Leptospirosis, Classical Swine Fever, Swine Introdução A suinocultura tem evoluído de forma constante em número de animais e em termos técnicos caminhando para uma produção alicerçada em alto nível tecnológico, segurança alimentar, preservação ambiental e bem-estar animal. Neste panorama, torna-se cada vez mais importante a produtividade dos rebanhos e como fator primordial destaca-se a sanidade, sendo que a prevenção é a maior ferramenta de atuação na suinocultura tecnificada. Impedir a entrada de agentes causadores de doenças pode ser a diferença entre o sucesso e o fracasso desta atividade, sabendo-se que a suinocultura brasileira ocupa, hoje, a quarta posição no ranking mundial de produção e exportação de carne suína, consequência de estudos e investimentos nesse setor da pecuária do país (Mapa, 2011). De acordo com o IBGE (2013), o efetivo do rebanho suíno do Estado do Maranhão é de 1.233.492\cabeças. No Brasil, em cumprimento às determinações do Programa de Erradicação da Peste Suína Clássica, os Estados livres de PSC devem proceder ao monitoramento de seus rebanhos por meio de testes sorológicos. Portanto, esta pesquisa possui grande relevância para os Estados não livres da PSC como é o caso do Maranhão, que se encontra em risco desconhecido para essa enfermidade, necessitando 1 de uma vigilância mais eficaz para o controle de ingresso e egresso de animais. A ocorrência de um foco dessa doença na região central do Maranhão, no município de Barra do Corda, no ano de 2008, com o sacrifício de 23 suínos e interdição de uma propriedade pela AGED-MA/MAPA-MA, como preconiza o Plano de Contingência da PSC, através da Instrução Normativa MAPA nº 27 de 2004, demonstrou que o agente etiológico pode estar circulando no Estado, deixando o rebanho suscetível, especialmente devido a possibilidade de circulação viral entre animais silvestres e domésticos. Dessa forma, a identificação do vírus da PSC de animais abatidos em matadouros clandestinos reveste-se de grande importância, pois poderá comprovar a existência de portadores que são verdadeiras fontes de infecção. Devido uma ação de fiscalização feita pela Agência Estadual de Defesa Agropecuária - AGED/MA junto com a Vigilância Sanitária Estadual, no ano de 2006, no município de São Luís, foi constatada alto índice de leptospirose em suínos criados extensivamente, a partir daí foi instituído a Portaria nº 398, de 07 de junho de 2006 determinando a vacinação contra leptospirose em todo o Estado, para fins de trânsito dos animais. Ressaltamos que apesar da instituição da Portaria 398/06, nenhuma ação foi realizada, para a implementação de medidas de biossegurança, afim de subsidiar informações relevantes para fundamentar um programa de controle e de erradicação desta enfermidade. As doenças que acometem os suínos comprometem de modo relevante a produtividade e esse comprometimento se manifesta sob a forma de sérios prejuízos, tanto econômicos quanto relacionados à saúde pública, pois algumas dessas doenças são zoonoses. Uma vez introduzido em uma criação, o agente infeccioso poderá disseminar-se com maior ou menor facilidade, dependendo do potencial dos susceptíveis e das condições predisponentes (Borges et al,2011).A Peste Suína Clássica trata-se de uma enfermidade de notificação obrigatória para Organização Mundial de Saúde Animal (OIE), pois apresenta alta morbidade e mortalidade, o que repercute em significativas consequências ao bem-estar animal, prejuízos socioeconômicos, sanitários e ambientais, é caracterizada por uma grande variedade de sinais clínicos e lesões com predominância do tipo hemorrágico. (Oliveira et al, 2014). Segundo Figueiredo et al(2013), a leptospirose em suínos é mundialmente reconhecida como uma importante causa de prejuízos econômicos devido às perdas reprodutivas. As leptospiras colonizam múltiplos órgãos, incluindo os da reprodução, provocando lesões que culminam com abortamentos, natimortalidade e neonatos debilitados. A gravidade da doença a inseriu no Programa Nacional de Sanidade Suídea, segundo o qual granjas de reprodutores suídeos devem apresentar estado livre ou controlado para a infecção.Portanto, a realização desta pesquisa avaliará o status sanitário do rebanho suídeo do Estado do Maranhão em relação à Peste Suína Clássica e à Leptospirose e tem como objetivos gerais conhecer a frequência da infecção pelo vírus da Peste Suína Clássica (PSC), através do diagnóstico sorológico e de biologia molecular, em matadouros sem inspeção de São Luís e Imperatriz, verificar a ocorrência de anticorpos anti-Leptospiraspp em suínos, identificar os sorovares de maior prevalência nas criações e traçar o perfil das proteínas séricas, através de eletroforese em gel de poliacrilamida dos suínos abatidos no Estado do Maranhão suspeitos de PSC. Material e Métodos Este projeto de pesquisa será realizado a partir de amostras obtidas em matadouros clandestinos localizados em duas regiões distintas representadas por São Luís que fica localizada ao norte do Estado e Imperatriz que fica ao oeste, sendo que os animais terão procedência de vários municípios. Antes da colheita das amostras, os responsáveis pelos animais, denominados de marchantes, serão consultados através de questionário a respeito da origem dos animais e conhecimento do status sanitário dos mesmos. Como os animais são criados extensivamente e transportados agrupados a rastreabilidade será realizada de acordo com o município, o nome do proprietário e o nome da propriedade dados esses colhidos durante a aplicabilidade do questionário. Serão colhidas 300 amostras de sangue e 100 fragmentos de tonsilas, órgão de eleição para detecção do vírus da PSC, sendo 30 nos matadouros de Imperatriz e 70 nos matadouros de São Luís, no qual serão congelados e enviados para o Laboratório de referência LANAGRO\PE em Recife, para realização do RT-PCR. Os suínos serão selecionados aleatoriamente entre machos e fêmeas independentemente da raça, com idade de abate (acima de sete meses) e não vacinados contra PSC e Leptospirose. A coleta será feita na hora da sangria, retirando-se 10mL de sangue de cada suíno. Após retração do coágulo, as amostras serão centrifugadas a 900g durante 5min para separação do soro sanguíneo. Este será transferido para frascos de polietileno (eppendorf), acondicionados em caixas isotérmicas, com gelo reciclável e enviados para o laboratório de imunodiagnóstico da Universidade Estadual do Maranhão, em São Luís – Maranhão, onde serão realizados os testes sorológicos (ELISA e SAM). Os mesmos serão congelados até o momento da realização dos exames. 2 Resultados Esperados Espera-se com este projeto de pesquisa: Fornecer subsídios para fundamentar políticas estaduais de controle e/ou erradicação da Peste Suína Clássica e Leptospirose no Estado do Maranhão. Fornecer dados científicos aos órgãos de defesa sanitária animal que fundamente a melhoria do status sanitário do rebanho suídeo do Estado do Maranhão. Conhecer os riscos da Peste Suína Clássica e da Leptospirose no rebanho suídeo no Estado do Maranhão. Publicação de artigos científicos abordando sobre a PSC e Leptospirose, e sobre o perfil protéico dos suínos no momento do abate. Literaturacitada BORGES, S.R.T;SOUZA, L.C.D; SILVA, R.C.D; ALMEIDA, E.D. Avaliação dos níveis de biosseguridade das granjas de reprodutores suínos certificadas do estado de São Paulo, Brasil. Veterinária e Zootecnia,Botucatu, v.18, n.3, p. 417-431, set.2011. IBGE. Instituto Brasileiro de geografia e Estatística. Disponível em <http://www.ibge.gov.br/estadosat/temas.php?sigla=ma&tema=pecuaria2013> Acesso em 19 agost. 2015. FIGUEIREDO, I.L; ALVES, L.C.A; SILVA, R.M; OLIVEIRA, S.S.A.Leptospirose suína uma importante causa de falhas e perdas reprodutivas. Rev. Bras. Reprod. Animal, Belo Horizonte, v.37, n.4, p.344-353, out./dez. 2013. MAPA.Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento. Disponívelem:<http://www.agricultura.gov.br/portal/page/portal/ Internet-MAPA/paginainicial/animal/especies/ suinos>. 2011. Acesso em: 17 agost. 2015. OLIVEIRA, L.G.de; OLIVEIRA, M.E.F; GATTO,I.R.H; ALMEIDA, H.M.de S; SAMARA, S.I. Peste Suína Clássica: Caracterização da enfermidade e ações de controle e erradicação adotadas no Brasil, Vet. e Zootec. v.21, n.3, p.343-358.set.2014. 3