Tipagem molecular de Staphyloccocus aureus responsáveis por

51º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 51º Congresso Brasileiro de Genética • 7 a 10 de setembro de 2005
Hotel Monte Real • Águas de Lindóia • São Paulo • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 85-89109-05-4
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Palavras-chave: S. aureus, coagulase, RAPD
Silva, WM; 1Santos, FGB; 1Freitas, MFL; 1Luz, IS; 1Silveira-Filho, V; 1Almeida, FL; 2Sena, MJ; 2Mota, RA; 1Leal-Balbino, TC
Departamento de Microbiologia, Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães, Fiocruz, Recife-PE. Departamento de Medicina Veterinária,
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Universidade Federal Rural de Pernambuco, Recife-PE.
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Tipagem molecular de Staphyloccocus aureus
responsáveis por casos de mastite bovina
no Estado de Pernambuco através da PCRRFLP do gene da coagulase e RAPD-PCR
A mastite bovina, inflamação da glândula mamária, constitui-se no principal problema de ordem infecciosa
de bovinos produtores de leite, sendo o S. aureus considerado o principal patógeno. O S. aureus se destaca
como responsável por intoxicações alimentares, assumindo, relevância para a Saúde Pública, diante do risco
de sua veiculação ao homem através do leite e derivados contaminados. Existe uma heterogeneidade genética
nas populações naturais de S. aureus de origem bovina e humana. Diante disto, sistemas apropriados de
tipagem são necessários para determinar a estrutura genética dos isolados. A tipagem molecular permite
estabelecer a relação dos isolados epidemiologicamente relacionados quando coletados durante um surto
baseado na análise do DNA, sendo de importância para compreender e controlar a dispersão de uma doença
na comunidade e hospitais. Existem diferentes métodos para tipagem, porém, nem todos apresentam a
mesma capacidade discriminatória. A análise do gene da coagulase (coa) através da PCR é um dos critérios
utilizados para identificação de S. aureus, baseado no polimorfismo do gene, que é composto de seqüências
repetitivas de 81pb organizadas em tandem. A digestão do produto da PCR com a enzima AluI torna
possível discriminar os S. aureus pelo polimorfismo no comprimento de restrição (PCR-RFLP). A técnica do
RAPD-PCR, uma variação da PCR, usa um único iniciador direcionado a seqüências aleatórias do genoma
da bactéria. Dessa forma, esse estudo visa determinar feno e genotipicamente os S. aureus responsáveis por
casos de mastite na região Agreste de Pernambuco. O DNA genômico foi obtido para os ensaios de PCR
utilizando 10µg de lisostafina e 50µg de proteinase K para lise celular. Foram analisadas 732 amostras
de leite mastítico e isolados 25 S. aureus em propriedades de São Bento do Una, 13 em Caetés e sete em
Correntes. Demonstrando que a presença de S. aureus responsáveis por casos de mastite na região Agreste de
Pernambuco foi freqüente. Para tipagem molecular foram utilizadas as técnicas de PCR-RFLP do gene coa
e o RAPD-PCR. A análise do gene coa dos 47 S. aureus produziu dois fragmentos de tamanhos diferentes
(P1=750pb, P2=1000pb) permitindo agrupá-los em dois perfis genotípicos. Após a clivagem com a enzima
AluI foram obtidos três coagulotipos, aumentando o poder discriminatório da técnica. Um total de 22 perfis
foi obtido entre os 44 S. aureus analisados através do RAPD-PCR usando dois iniciadores. As amplificações
resultaram de três a vinte bandas com tamanhos entre 180 a >2000pb. Em conclusão, a tipagem molecular
dos S. aureus pelo PCR-RFLP do gene da coagulase foi mais eficiente que o RAPD-PCR que se mostrou
inconclusiva para um número maior de cepas e não reprodutível. O PCR-RFLP do gene coa, demonstrou
ser uma ferramenta útil e de fácil interpretação para aplicação em estudos epidemiológicos de S. aureus.
Apoio financeiro: Banco do Nordeste, CNPq/FACEPE.
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