Análise transcricional e estrutural do gene para metiltransferases

51º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 51º Congresso Brasileiro de Genética • 7 a 10 de setembro de 2005
Hotel Monte Real • Águas de Lindóia • São Paulo • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 85-89109-05-4
Palavras chave: Nicotiana tabacum, desenvolvimento do pistilo,
metiltransferase, expressão específica, hibridização in situ
Molfetta-Machado, JB1; De-Paoli, HC1,2; Quiapim, AC1; Faleiros, RO1; Guidugli, MC1; da Silva, I1; Angelo, PCS1; Ribeiro, DCD3;
Dornelas, MC4; Goldman, GH3; Goldman, MHS 1
1
Depto de Biologia, FFCLRP, USP, SP; 2Depto de Genética, FMRP, USP, SP; 3Depto de Ciências Farmacêuticas, FCFRP, USP, SP;
4
Centro de Energia Nuclear na Agricultura CENA, ESALQ-USP, SP.
Análise transcricional e estrutural do gene
para metiltransferases específicas
do pistilo em Nicotiana tabacum
O pistilo tem uma função dupla: a produção do gametófito feminino e o estabelecimento da interação
pólen-pistilo, que determina o sucesso ou não no crescimento do tubo polínico. O objetivo do nosso
trabalho é identificar genes preferencialmente expressos no pistilo e estabelecer suas possíveis funções na
reprodução das plantas. Partindo do “screening” diferencial de uma biblioteca de cDNA de estigmas/
estiletes de N. tabacum, foi identificado um clone de cDNA (PA3) específico de pistilo, que codifica uma
proteína com alta similaridade a metiltransferases (SAMT, BAMT E JAMT). Experimentos de northern
blot, com RNA extraído dos diferentes órgãos, revelaram 4 transcritos exclusivamente presentes no pistilo.
Os 4 transcritos são altamente expressos no ovário, enquanto que no estigma/estilete apenas 3 transcritos
se acumulam em altos níveis. Todos os transcritos apresentam um aumento da expressão durante o
desenvolvimento do pistilo em direção à antese. Para identificar os outros transcritos, foi feita uma busca
no banco de dados TOBEST (TOBacco ESTs), onde foram encontrados 14 cDNAs com seqüências em
comum ao PA3. Somente dois clones foram idênticos ao PA3 e os outros continham partes das seqüências
presentes no PA3. Isolamos também clones genômicos, contendo partes da seqüência do PA3. Após uma
análise de todas as seqüências, foi possível sugerir que os diferentes transcritos são produzidos por uma
combinação complexa de diferentes exons, provavelmente por processamento alternativo, sendo que
todos tem em comum o exon 1. Paralelamente, foi feita uma análise da localização destes transcritos pela
técnica de hibridização in situ, nos estágios 4, 7 e 10 do desenvolvimento floral, usando o cDNA PA3
(exons 1, 8 e 10) como sonda. Assim, foi detectada a presença de transcritos nos tecidos especializados
do pistilo (zona secretória do estigma e tecido transmissor do estilete), atravessados pelo tubo polínico
durante seu crescimento em direção ao ovário. Além disso, houve uma marcação mais intensa nas células
papilares, situadas na epiderme do estigma. Similarmente, visualizou-se uma marcação em parte do tecido
vascular e em todos os tecidos do óvulo, exceto na camada ao redor da célula mãe do megásporo e do saco
embrionário. Qual é a função das metiltransferases específicas do pistilo? Sabe-se que metiltransferases
produzem compostos voláteis que têm importantes funções biológicas, inclusive a atração de polinizadores
em outras espécies vegetais. Os nossos resultados sugerem um importante papel das metiltransferases
no desenvolvimento do pistilo e no processo reprodutivo em Nicotiana tabacum.
Apoio financeiro: FAPESP, CNPq e CAPES.
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