THC Flex® reagent cartridge

REF DF95A
Dimension® clinical chemistry system
Flex® reagent cartridge
Cartucho de reagente Flex® para Despiste de
Canabinóides na Urina
Fim a que se destina: O cartucho de reagente Flex® para OPI
utilizado no sistema de química clínica Dimension® fornece
reagentes para um teste de diagnóstico in vitro destinado à
determinação qualitativa e semi-quantitativa de canabinóides na urina
humana. As leituras obtidas com o método da THC são utilizadas no
diagnóstico e tratamento do consumo ou sobredosagem de
canabinóides.
O método THC fornece apenas um resultado preliminar de teste
analítico. Deve ser utilizado um método químico alternativo com
maior especificidade, de forma a obter um resultado analítico
confirmado. O método de confirmação preferido é a cromatografia
gasosa/espectrometria de massa (CG/EM). 1,2 Encontram-se
disponíveis outros métodos de confirmação química. A
consideração clínica e a avaliação profissional deverão ser
utilizadas em qualquer resultado do teste de droga de abuso,
particularmente quando são utilizados resultados positivos
preliminares.
A Marijuana é uma mistura de folhas secas e as extremidades em flor
da planta Cannabis sativa L. Os agentes que produzem os efeitos
alucinogénicos e outros efeitos biológicos da marijuana são
denominados canabinóides.
O canabinóide ∆9-tetrahidrocanabinol (∆9-THC) é o principal
ingrediente psicoactivo na marijuana e no haxixe. O composto
∆9-THC é rápida e eficientemente absorvido através da inalação ou a
partir to tracto gastrointestinal1, e é quase totalmente metabolizado
pelas enzimas1 do fígado. Os níveis máximos de plasma de ∆9-THC
ocorrem dentro de 10 minutos da inalação e aproximadamente 1 hora
após ingestão1. A excreção dos metabolitos urinários e a excreção
através das fezes inicia dentro de 72 horas após exposição1. A
concentração depende do montante total de THC absorvido, da
frequência de abuso, taxa de libertação dos tecidos gordos e da hora
da colheita da amostra em relação à utilização. Em utilizadores
crónicos, o THC pode acumular em tecido gordo mais rapidamente
do que pode ser eliminado. Esta acumulação dá origem a tempos de
detecção mais longos na análise de urina para os utilizadores
crónicos do que para utilizadores ocasionais.1
Resumo: O cartucho de reagente Flex® para THC contém os
reagentes do Emit® II Plus Syva1. O cartucho THC é utilizado no
sistema Dimension® para fornecer uma aplicação automática deste
ensaio. Baseia-se na competição para os locais de ligação dos
anticorpos entre o fármaco presente na amostra e o fármaco marcado
com a enzima glucose-6-fosfato desidrogenase (G6PDH).
Emit® é uma marca comercial registada da Syva Company - Dade Behring Inc.
San Jose, CA 95161-9013.
Princípios do procedimento: Os lotes correspondentes dos
anticorpos monoclonais reactivos ao ∆9-tetrahidrocanabinol e ao ∆9tetrahidrocanabinol marcado com a glucose-6-fosfato desidrogenase
são utilizados nesta metodologia do Syva Emit® II Plus. A sequência
da reacção é a seguinte:
Ab+ THC + THC- ———> Ab-THC + Ab-THC-G6PDH + THC-G6PDH
G6PDH
(inibida)
(activa)
THC-G6PDH
Glucose-6- + NAD+ ————> 6-fosfogluconolactona + NADH + H+
Fosfato
(activa)
(absorve a 340 nm)
Onde: Ab
THC
THC-G6PDH
= anticorpos reactivos ao ∆9-tetrahidrocannabinol
= cannabinóides
=∆9-tetrahidrocannabinol-glucose-6-fosfato
conjugado desidrogenase
A concentração da droga na amostra determina a quantidade do
conjugado THC-glucose-6-fosfato desidrogenase (THC-G6PDH) que
está ligada ao anticorpo. O conjugado não ligado catalisa a oxidação
da glucose-6-fosfato com a redução simultânea do NAD+ para NADH,
mais rapidamente do que o conjugado ligado. A velocidade de
aumento da absorvância a 340 nm devido ao aumento do NADH está
relacionada com a concentração da droga presente na amostra
através de uma função matemática.
THC
Reagentes
Poçosa Forma
1
Vazio
2,3
Líquido
4
5,6
Vazio
Líquido
7
8
Vazio
Líquido
Ingrediente
Concentraçãob
∆9-tetrahidrocannabinol
Conjugadob de enzima
b
Fonte
monoclonalb
Anticorpo
reactivo ao
∆9-tetrahidrocannabinol
NAD+, G6P
b,c
Rato
Anticorpo monoclonalb
reactivo ao
∆9-tetrahidrocannabinol,
b,c
Rato
NAD+, G6P
a. Os poços são numerados consecutivamente a partir da extremidade larga do
cartucho Flex®.
b. O anticorpo e o conjugado são um par correspondente. A titulação do
anticorpo e a actividade do conjugado enzimático podem variar de lote para
lote.
c. Contém albumina de soro bovino.
Precauções: As cuvetes utilizadas contêm líquidos biológicos
humanos; manipular com o devido cuidado para evitar o contacto
com a pele ou a ingestão.
Para utilização em diagnóstico in vitro
Preparação do reagente: Todos os reagentes são líquidos e estão
prontos a serem utilizados.
Instruções para armazenamento: Armazenar entre 2 e 8 °C.
Validade: Consultar a embalagem para obter a data de validade do
cartucho de reagente não aberto. Os reagentes dos cartuchos selados
permanecerão estáveis durante 30 dias. Depois de um poço ter sido
perfurado pelo instrumento, permanecerá estável durante 2 dias.
Colheita de amostra:1,2,3 Para as amostras analisadas com o
cartucho de reagente Flex® para TCH podem ser utilizados os
procedimentos normais para a colheita de urina.
• A colheita das amostras de urina deve ser executada em recipientes
limpos, inquebráveis e estanques. Devem ser utilizadas amostras de
urina colhidas recentemente. Se não forem imediatamente analisadas,
as amostras deverão ser refrigeradas durante um período inferior a 24
horas. Se for necessário um armazenamento superior a 24 horas, as
amostras deverão ser congeladas.
• As amostras de urina colhidas recentemente não necessitam de nenhum
pré-tratamento especial.
• Poderão existir amostras que com turvação. Recomenda-se a
centrifugação dessas amostras, antes de serem analisadas.
• Não são necessários quaisquer aditivos nem conservantes.
• O ácido bórico não deve ser utilizado como um conservante.
• As amostras deverão ter um valor de pH entre 5 e 8. As amostras com
um valor de pH fora deste intervalo deverão ser ajustadas para este
intervalo através da adição de 1N de HCl ou de 1N de NaOH, antes da
análise.
• Antes da análise, as amostras deverão estar a uma temperatura de 20 a
25 °C.
• A adulteração da amostra de urina poderá originar resultados erróneos.
Se houver suspeita de adulteração, efectuar a colheita de uma amostra
recente.
• As amostras de urina humanas deverão ser manipuladas e tratadas
como se fossem potencialmente infecciosas.
Concentração dos compostos que apresentam resultados de THC
negativos com um “cutoff” de 50 ng/ml
Cada um dos seguintes compostos foi adicionado a uma amostra de
urina sem droga e forneceu resultados THC negativos com um Cutoff”
de 50 ng/ml:
Composto
Acetaminofeno
α-Acetil-N,N-dinormetadol (dinor LAAM)
I-α−Acetilmetadol (LAAM)
N-Acetilprocainamida (NAPA)
Ácido acetilsalicílico
Amitriptilina
d-Anfetamina
Concentração
1000
25
25
400
1000
1000
1000
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
Benzoylecgonina
Buprenorphina
Cafeína
Cimetidina
Clomipramina
Clonidina
Codeína
Cotinina
Ciclobenzaprina
Desipramina
Difenidramina
Doxepina
2-Etilideno-1,5-dimetil-3,3-difenilpirrolidina (EDDP)
Fluoxetina
Glutetimida
Ibuprofeno
Quetamina
Cetorolac Trometamina
Lormetazepam
LSD
Meperidina
d-Metanfetamina
Metaqualona
Morfina
Naproxeno
Nortriptilina
Oxazepam
Fenciclidina
Fenitoína
Prometazina
Propoxifeno
Ranitidina
Escopolamina
Secobarbital
Tioridazina
Tramadol
Tiramina
Zidovudina (AZT)
Zolpidem
1000
100
1000
1000
2.5
1000
500
100
28
800
1000
10
1000
500
500
1000
100
1000
1
10
1000
2
1500
1000
1000
750
300
1000
1000
1000
1000
900
500
1000
100
100
100
2
100
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
ng/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
mg/ml
µg/ml
Teste de Interferências
Cada um dos seguintes compostos foi adicionado à urina numa
concentração de +/- 25 % do “cutoff”, não produzindo uma resposta
falsa relativamente ao “cutoff” de 50 ng/ml:
Compostp
Acetona
Ácido ascórbico
Bilirrubina
Creatinina
Etanol
Gama Globulina
Glicose
Hemoglobina
Albumina de oro humano
Ácido oxálico
Cloreto de sódio
Ureia
Riboflavina
Concentração
1.0 g/dl
1.5 g/dl
0.25 mg/dl
0.5 g/dl
1.0 g/dl
0.5 g/dl
2.0 g/dl
115 mg/dl
0.5 g/dl
0.1 g/dl
6.0 g/dl
6.0 g/dl
7.5 mg/dl
Especificidade: Na tabela seguinte são apresentados os compostos
detectados por este ensaio e os níveis nos quais esses compostos
têm uma resposta aproximadamente equivalente à do “cutoff” de
50 ng/ml de (11-nor-∆9-THC-9-ácido carboxílico) canabinóides. Cada
concentração representa o nível de reactividade para o composto
referido, quando é adicionado a uma amostra de urina negativa. Se
uma amostra contém mais do que um composto detectado pelo
ensaio, pode ocorrer a combinação de concentrações inferiores às
referidas abaixo para produzir uma taxa aproximadamente equivalente
ou superior à do calibrador “cutoff”.
Composto
8-ß-11-Dihidroxi-∆9-THC
8-ß-11-Hidroxi-∆9-THC
11-Hidroxi-∆8-THC
11-Hidroxi-∆9-THC
9-Carboxi-11-nor-∆9-THC-glucuronida
Concentração
58 ng/ml
68 ng/ml
67 ng/ml
77 ng/ml
95 ng/ml
Materiais necessários:
Cartucho de reagente Flex® para THC, N° de Cat. DF95A
Syva Emit® Catálogo 9A509UL Calibrador de Nivel 0
0 ng/mL 11-nor-∆9-THC-9-COOH
Syva Emit® Catálogo 9A549UL Calibrador de Nivel 2
20 ng/mL 11-nor-∆9-THC-9-COOH
Syva Emit® Catálogo 9A569ULCalibrador de Nivel 3
50 ng/mL 11-nor-∆9-THC-9-COOH
Syva Emit® Catálogo 9A589ULCalibrador de Nivel 4
100 ng/mL 11-nor-∆9-THC-9-COOH
Procedimento: Para a execução do teste de TCH é necessário o
cartucho de reagente Flex® para THC, Nº de Catálogo DF95A. Este
teste é efectuado automaticamente no sistema de química clínica
Dimension®, depois de o método ter sido calibrado (consultar o
Material de Referência na secção Calibração, em baixo).
Passos do teste
A colheita da amostra, dispensação do reagente, agitação,
processamento e impressão dos resultados são realizados
automaticamente pelo sistema Dimension®. Para obter pormenores
sobre este processamento, consultar o manual do sistema
Dimension®.
NOTA: As cuvetes de amostra deverão ser enchidos com 1.0 ml de
amostra, controlo ou calibrador, utilizando uma pipeta
automática. Não devem ser utilizadas pipetas de distribuição
plásticas. Isto ajuda a manter uma razão superfície do copo/
volume da amostra constante, e minimiza a perda de fármaco da
amostra devido à aderência dos fármacos à superfície do copo.
Condições de teste
•
•
•
•
•
•
•
•
Volume de Amostra:
13 µl
Volume de Purga (água purificada):
10 µl
Volume do reagent 1 (anticorpo,NAD,G6P):
245 µl
Volume do reagent 2 (conjugado enzimático): 105 µl
Temperatura do teste:
37° C
Comprimento de onda:
340 e 600 nm
Tipo de leitura:
Rate
Autodilute Volume:
3 µl
(Semi-quantitative mode)
*Calibração
Quando se calibrar o método de THC, deverão ser tomadas em
consideração as seguintes informações:
Concentração “Cutoff”:
50 ng/ml
*SAMHSA - Substance Abuse Mental Health Services Administration
Material de referência
Catálogo do Calibrador de Nivel 3 9A569UL Syva Emit®
Modo qualitativo:
50 ng/ml 11-nor-∆9-THC-9-ácido carboxilico
Material de referência
Catálogo do Calibrador de Nivel 0 9A509UL Syva Emit®
Modo semi-quantitativo: 0 ng/ml 11-nor-∆9-THC-9-ácido carboxilico
Catálogo do Calibrador de Nivel 2 9A549ULSyva Emit®
20 ng/ml 11-nor-∆9-THC-9-ácido carboxilico
Catálogo do Calibrador de Nivel 3 9A569UL Syva Emit®
50 ng/ml 11-nor-∆9-THC-9-ácido carboxilico
Catálogo do Calibrador de Nivel 4 9A589UL Syva Emit®
100 ng/ml 11-nor-∆9-THC-9-ácido carboxilico
Intervalo de calibraçõ:
0-100 ng/ml
Niveis de calibração sugeridos:
Modo qualitativo:
50 ng/ml (Nivel “Cutoff”)
Validar a calibração, analisando um controlo positivo e
um controlo negativo.
Modo semi-quantitativo: 0,20,50 (Nivel “Cutoff”), e 100 ng/ml
Validar a calibração, analisando um controlo positivo e
um controlo negativo.
Coeficientes iniciais:
Modo semi-quantitativo: C0: 100.0
C1: 124.0
C2: -3.6
C3: 98.0
C4: 0.5
Esquema de calibração:
Modo qualitativo:
Nivel “Cutoff” (50 ng/ml) em triplicado
Modo semi-quantitativo: Niveis 0,20,50,and 100 ng/ml em duplicado
Frequência da calibração: Cada lote novo de cartucho de reagente. Cada 30 dias
para qualquer lote individual.
Intervalo do ensaio
Modo semi-quantitativo: 15-85 ng/ml
Controlo de qualidade
Pelo menos uma vez em cada dia de utilização, analisar um controlo
positivo e um controlo negativo relativamente à concentração “cutoff”,
utilizando um material de controlo adequado à base de urina. Se os
resultados caírem fora dos limites aceitáveis do laboratório, seguir o
procedimento da resolução de problemas apresentado no manual do
sistema Dimension®. Pode existir uma avaria do sistema se for
observada a seguinte precisão de 5 testes:
Concentração
Desvio Padrão % CV
50 ng/ml 11-nor-∆9-THC-9-ácido carboxilico > 4.5 ng/mL
9.0
9
2.4
50 ng/ml 11-nor-∆ -THC-9-ácido carboxilico > 24 QUAL
(Unidades QUAL normalizadas)
Resultados:
Modo qualitativo: Os resultados obtidos numa análise de THC podem
ser referidos qualitativamente como negativos ou positivos,
relativamente ao “cutoff” de 50 ng/ml para THC. Os resultados
positivos indicam que, provavelmente, a amostra contém
canabinóides. Os resultados negativos indicam que a amostra não
contém canabinóides ou que os canabinóides estão presentes em
concentrações inferiores ao nível “cutoff” de 50 ng/ml.
Modo semi-quantitativo: Os resultados de uma análise de THC podem
ser referidos semi-quantitativamente com um resultado expresso
numa concentração com unidade numérica (ng/ml) seguido por uma
designação negativa ou positiva. O resultado da concentração em
ng/ml representa, aproximadamente, a concentração cumulativa das
drogas detectadas pela análise de THC. O resultado numérico pode ser
utilizado para a semi-quantificação da amostra, para a monitorização
com precisão e para a calibração. Os resultados semi-quantitativos em
ng/ml são equivalentes à concentração da droga apenas quando a
amostra é um padrão contendo 0 a 100 ng/ml de 11-nor-∆9-THC-9ácido carboxílico puro.
Os resultados de THC superiores ou iguais a 50 ng/ml devem ser
referidos como positivos. Os resultados de THC inferiores a 50 ng/ml
devem ser referidos como negativos. Os resultados inferiores ao
“cutoff” numérico indicam que não existem barbitúricos na amostra ou
que os canabinóides estão presentes em concentrações inferiores ao
nível “cutoff” de 50 ng/ml.
Limitaçãoes do procedimento:
• Resultados NEGATIVOS para amostras com concentrações abaixo do
intervalo do ensaio podem ser acompanhadas por uma mensagem
“intervalo do ensaio” ou “abaixo do intervalo do ensaio”. Estes
resultados devem ser registados como NEGATIVOS.
• Resultados POSITIVOS para amostras com concentrações acima do
intervalo do ensaio podem ser acompanhadas por uma mensagem
“intervalo do ensaio” ou “acima do intervalo do ensaio”. Estes
resultados devem ser registados como POSITIVOS.
• Um resultado positivo do ensaio indica a provável presença de
canabinóides, mas não indica nem mede o nível de intoxicação.
• A presença de canabinóides na urina é apenas uma indicação da
exposição recente aos canabinóides ou do consumo de canabinóides.
• Os efeitos psicológicos e fisiológicos dos canabinóides não estão
necessariamente relacionados com a concentração urinária.
• Um resultado de THC positivo indica a provável presença da droga e dos
seus metabolitos. O método THC não consegue quantificar totalmente a
concentração dos componentes individuais.
• A interpretação dos resultados deve considerar que as concentrações de
urina variam muito com a ingestão de líquidos e com outras variáveis
biológicas.
• Auto-diluição (AD): Esta característica encontra-se apenas disponível
para as amostras testadas no modo semi-quantitativo. Consultar o
manual do sistema Dimension®.
• Existe a possibilidade de outras substâncias e/ou outros factores não
referidos em cima poderem interferir com o teste e produzirem
resultados falsos, por exemplo erros técnicos ou de procedimento.
• O sistema de emissão de relatórios do instrumento contém mensagens
de erro para prevenir o operador de avarias específicas. Qualquer
relatório que contenha tais mensagens de erro deve ser retido para
seguimento. Consultar o manual do sistema Dimension®.
Características específicas de desempenhoc
Reprodutibilidaded
Material
Nível 1 do Controlo
(37.5 ng/ml)
Controlo “Cutoff”
(50 ng/ml)
Nível 2 do Controlo
(62.5 ng/ml)
Média
Intra-ensaio
Total
ng/ml Desvio Padrão % CV Desvio Padrão % CV
41.7
0.7
1.8
2.3
Resumo dos resultados dos doentes
Foram testadas 203 amostras de urina nativas com o cartucho Flex®
para THC no sistema Dimension® (“cutoff” de 50 ng/ml) e com o
método THC no Sistema Abbott AxSYM® (“cutoff” de 50 ng/ml). As
amostras com resultados positivos em qualquer método foram
analisadas por CG/EM.
Sistema Abbott AxSYM®
(“Cutoff” de 50 ng/ml)
+
THC Flex® Reagent
Cartridge on the
Dimension® clinical
chemistry system
(Cutoff 50 ng/ml)
–
+
67
0
–
**2
134
GC/MS
(“Cutoff” 15 ng/ml)
+
THC Flex® Reagent
Cartridge on the
Dimension® clinical
chemistry system
(Cutoff 50 ng/ml)
–
+
67
0
–
**6
44
Amostras com resultados discrepantes (ng/ml):
Dimension® RxL
AxSYM®
**44
**41
**38
**40
**39
**32
GC/MS (11-nor-∆9-THC-9-(ácido carboxilico)
57
60
36
30
49
38
21
33
16
25
18
18
Especificidade analítica
Consultar a secção “Concentração de compostos que apresentam
resultados de THC negativos com um “Cutoff” de 50 ng/ml”.
Sensibilidade analítica
A sensibilidade do método THC é de 15 ng/ml, valor que representa a
menor concentração de THC que pode ser distinguida do zero. Esta
sensibilidade é definida como a concentração dois desvios padrão
acima do Calibrador de Nível 0 Emit® 0,0 ng/ml (n=20).
*Bibliografia:
1. Emit® II Plus Cannabinoid Assay Package Insert Sheet, 2000.
2. Hawks, RL, Chiang, CN, Urine testing for drugs of abuse, NIDA Research
Monograph 73, U.S. Government Printing Office, Washington, DC
20402,1986:24-29.
3. Burtis CA, Ashwood ER. TietzTextbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders
Co., Philadelphia, PA 1999,Third edition pp 39–41 (Biological Hazards),
pp 1191-1193 (Drugs of Abuse).
4. Baselt RC, Cravey RH. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man. 4th
ed. Chemical Toxicology Institute; Foster City, California,1995:450.
Dimension® e Flex® são marcas registadas da Dade Behring Inc., no
Gabinete de Patentes e Marcas Registadas dos E.U., na Alemanha e em
muitos outros países.
* As secções revistas são anotadas com um asterisco.
5.6
53.4
1.0
1.9
3.3
6.3
72.9
1.0
1.4
4.4
6.1
c. Todos os testes de características de desempenho foram efectuados após a
realização das verificações normalmente recomendadas do controlo de
qualidade do equipamento (consultar o manual do sistema Dimension®).
d. Os controlos foram analisados em duplicado durante 20 dias. Os coeficientes
de variação intra-ensaio e os coeficientes totais (%CV) foram calculados
através do método da análise da variância, de acordo com a Norma EP5-A do
Comité Nacional de Padrões Laboratoriais Clínicos (National Committee of
Clinical Laboratory Standards) (NCCLS) (Fevereiro de 1999).
0800-170417
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