COC Flex® reagent cartridge

REF DF92A
Dimension® clinical chemistry system
Flex® reagent cartridge
Cartucho de reagente Flex® para Rastreio de
Metabolito de Cocaína na Urina
Fim a que se destina: O cartucho de reagente Flex® para COC utilizado
no sistema de química clínica Dimension® fornece reagentes para um
diagnóstico in vitro destinado à determinação qualitativa e semiquantitativa da benzoilecgonina (metabolito da cocaína) na urina humana.
As leituras obtidas com o método da COC são utilizadas no diagnóstico e
tratamento do consumo ou sobredosagem de cocaína.
O método COC fornece apenas um resultado preliminar analítico. Deve
ser utilizado um método químico alternativo com maior especificidade,
de forma a obter um resultado analítico confirmado. O método de
confirmação aconcelhado é a cromatografia gasosa/espectrometria de
massa (CG/EM).1,2 Encontram-se disponíveis outros métodos de
confirmação química. A consideração clínica e a avaliação profissional
deverão ser utilizadas em qualquer resultado do teste de droga de
Abuso, particularmente quando são utilizados resultados positivos
preliminares.
A cocaína é um estimulante do sistema nervoso central, extraído da planta
coca. Com um fármaco de abuso, é auto-administrada de várias formas,
incluindo a inalação e a injecção intravenosa. A cocaína base pode ser
fumada numa forma mais frequentemente conhecida como “crack.” A
cocaína é rapidamente absorvida, especialmente quando é fumada.
Embora todas as formas sejam potencialmente viciantes, a possibilidade
do “crack” conduzir à dependência é superior, devido ao seu efeito mais
rápido e mais potente no consumidor1.
Os padrões da taxa de excreção variam com o modo de administração e
de indivíduo para indivíduo. A cocaína é metabolizada, quase na totalidade,
principalmente no fígado, ocorrendo a excreção de apenas um por cento
de cocaína não modificada na urina. A maior parte da cocaína é eliminada
como benzoilecgonina, o principal metabolito da cocaína. A cocaína
também é excretada em quantidades relativamente inferiores como éster
de metil ecgonina e ecgonina. Os metabolitos da cocaína podem ser
detectados na urina até um período de dois dias após o consumo de
cocaína. A benzoilecgonina pode ser detectada na urina num período de
quatro horas após a inalação de cocaína, permanecendo detectável em
concentrações superiores a 1000 ng/ml até 48 horas depois.1
Resumo: O cartucho de reagente Flex® para COC contém os reagentes
Emit® II Plus1. O cartucho COC é utilizado no sistema Dimension® para
fornecer uma aplicação automática deste ensaio. Baseia-se na
competição para os locais de ligação dos anticorpos entre o fármaco
presente na amostra e o fármaco marcado com a enzima glucose-6fosfato desidrogenase (G6PDH).
Emit® é uma marca registada da Syva Company - Dade Behring Inc. San
Jose, CA 95161-9013.
Princípios do procedimento: Os lotes correspondentes dos anticorpos
policlonais reactivos à benzoilecgonina e à benzoilecgonina marcada com
a glucose-6-fosfato desidrogenase são utilizados nesta metodologia Syva
Emit® II Plus. A sequência da reacção é a seguinte:
Ac+COC +
COC- ———> Ac-COC + Ac-COC-G6PDH + COCG6PDH
(inibida)
G6PDH
(activa)
COC-G6PDH
Glucose-6- + NAD+ ————> 6-fosfogluconolactona + NADH + H+
Fosfato
(activo)
(absorve a 340 nm)
Onde: Ac
COC
COC-G6PDH
=
=
=
anticorpos reactivos à benzoilecgonina
(metabolito de cocaína)
benzoilecgonina (metabolito de cocaína)
benzoilecgonina-glucose-6-fosfato
conjugado desidrogenase
A concentração do fármaco na amostra determina a quantidade do
conjugado COC-glucose-6-fosfato desidrogenase (COC-G6PDH) que está
ligada ao anticorpo. O conjugado não ligado catalisa a oxidação da
glucose-6-fosfato com a redução simultânea do NAD+ para NADH, mais
rapidamente do que o conjugado ligado. A velocidade de aumento da
absorvância a 340 nm devido ao aumento do NADH está relacionada com
a concentração do fármaco presente na amostra através de uma função
matemática.
COC
Reagentes
Poçosa Forma
1
2,3
Vazio
Líquido
4
5,6
Vazio
Líquido
7
8
Ingrediente
Concentraçãob
Enzima benzoilecgonina
conjugadob
b
Fonte
policlonalb
Anticorpo
reactivo à benzoilecgonina
NAD+, G6P
b,c
Ovelha
Vazio
Líquido
Anticorpo policlonalb
reactivo à benzoilecgonina,
b,c
Ovelha
NAD+, G6P
a. Os poços são numerados consecutivamente a partir da extremidade larga do
cartucho Flex®.
b. O anticorpo e o conjugado são um par correspondente. O título do anticorpo
e a actividade do conjugado enzimático podem variar de lote para lote.
c. Contém albumina de soro bovino.
Precauções: As cuvetes utilizadas contêm fluidos corporais humanos;
manipular com o cuidado adequado para evitar o contacto com a pele ou
a ingestão.
Para utilizar no diagnóstico in vitro
Preparação do reagente: Todos os reagentes são líquidos e estão prontos
a serem utilizados.
Instruções para armazenamento: Armazenar entre 2 e 8 °C.
Validade: Consultar a embalagem para obter a data de validade do
cartucho de reagente não aberto individual. Os reagentes dos cartuchos
selados permanecerão estáveis durante 30 dias. Depois de um poço ter
sido perfurado pelo instrumento, permanecerá estável durante 2 dias.
Colheita de amostra:1,2,3 Para as amostras analisadas com o cartucho de
reagente Flex® para COC podem ser utilizados os procedimentos normais
para a colheita de urina.
• A colheita das amostras de urina deve ser executada em recipientes
limpos, inquebráveis e estanques. Devem ser utilizadas amostras de
urina colhidas recentemente. Se não forem imediatamente analisadas, as
amostras deverão ser refrigeradas durante um período inferior a 24
horas. Se for necessário um armazenamento superior a 24 horas, as
amostras deverão ser congeladas.
• As amostras de urina colhidas recentemente não necessitam de nenhum
pré-tratamento especial.
• Poderão existir amostras que exibam turvação. Recomenda-se a
centrifugação dessas amostras, antes de serem analisadas.
• Não são necessários quaisquer aditivos nem conservantes.
• O ácido bórico não deve ser utilizado como um conservante.
• As amostras deverão ter um valor de pH entre 5 e 8. As amostras com
um valor de pH fora deste intervalo deverão ser ajustadas para este
intervalo através da adição de 1N de HCl ou de 1N de NaOH, antes da
análise.
• Antes da análise, as amostras deverão estar a uma temperatura de 20 a
25 °C.
• A adulteração da amostra de urina poderá originar resultados erróneos.
Se houver suspeita de adulteração, efectue a colheita de uma amostra
recente.
• As amostras de urina humanas deverão ser manipuladas e tratadas
como se fossem potencialmente infecciosas.
Concentração dos compostos que apresentam resultados COC
negativos com um “cutoff” de 300 ng/m
Cada um dos seguintes compostos foi adicionado a urina sem fármaco e
forneceu resultados COC negativos com um Cutoff” de 300 ng/m
Composto
Acetaminofeno
α-Acetil-N,N-dinormetadol (dinor LAAM)
I-α-Acetilmetadol (LAAM)
N-Acetilprocainamida (NAPA)
Ácido acetilsalicílico
Amitriptilina
Buprenorfina
Cafeína
Cimetidina
Clomipramina
Concentração
1000 µg/ml
25 µg/ml
25 µg/ml
400 µg/ml
1000 µg/ml
1000 µg/ml
100 µg/ml
1000 µg/ml
1000 µg/ml
2.5 µg/ml
Clonidina
Codeína
Cotinina
Ciclobenzaprina
Desipramina
Dextrometorfano
Difenidramina
Doxepina
2-Etilideno-1,5-dimetil-3,3-difenilpirrolidina (EDDP)
Fluoxetina
Glutetimida
Ibuprofeno
Quetamina
Cetorolac Trometamina
Lormetazepam
LSD
Meperidina
Metadona
Metaqualona
Morfina
Naproxeno
Nortriptilina
Oxazepam
Fenciclidina
Fenitoína
Prometazina
Propoxifeno
Ranitidina
Escopolamina
Secobarbital
11-nor-∆9-THC-9-COOH
Tioridazina
Tramadol
Tiramina
Zidovudina (AZT)
Zolpidem
1000
500
100
28
800
1000
1000
10
1000
500
500
1000
100
1000
1
10
1000
1000
1500
1000
1000
750
300
1000
1000
1000
1
900
500
1000
0.2
100
100
100
2
100
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
ng/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
µg/ml
mg/ml
µg/ml
Teste de Interferências
Cada um dos seguintes compostos foi adicionado à urina numa
concentração de +/- 25 % do “cutoff”, não produzindo uma falsa resposta
relativamente ao “cutoff” de 300 ng/ml:
Composto
Acetona
Ácido ascórbico
Bilirrubina
Creatinina
Etanol
Gama Globulina
Glicose
Hemoglobina
Albumina de soro humano
Ácido oxálico
Cloreto de Sódio
Ureia
Riboflavina
Concentração
0.5 g/dl
1.5 g/dl
0.25 mg/dl
0.5 g/dl
0.5 g/dl
0.5 g/dl
2.0 g/dl
115 mg/dl
0.5 g/dl
0.1 g/dl
6.0 g/dl
6.0 g/dl
7.5 mg/dl
Especificidade: Na tabela seguinte são apresentados os compostos
detectados por este ensaio e os níveis nos quais os compostos têm uma
resposta aproximadamente equivalente à do “cutoff” de 300 ng/ml de
benzoilecgonina (metabolito da cocaína). Cada concentração representa o
nível de reactividade para o composto referido, quando é adicionado a uma
amostra de urina negativa. Se uma amostra contém mais do que um
composto detectado pelo ensaio, pode ocorrer a combinação de
concentrações inferiores às referidas em baixo para produzir uma taxa
aproximadamente equivalente ou superior à do calibrador “cutoff”.
Composto
Cocaína
Ecgonina
Concentração
64 µg/ml
28 µg/ml
NOTA: Deverá encher os copos de amostra com 1.0 ml de amostra,
controlo ou calibrador utilizando uma pipeta automática. Não devem
ser utilizadas pipetas de distribuição plásticas. Isto ajuda a manter
uma razão superfície do copo/volume da amostra constante, e
minimiza a perda de fármaco da amostra devido à aderência dos
fármacos à superfície do copo.
Condições de teste
•
•
•
•
•
•
•
•
Volume de Amostra:
Volume de Purga (água purificada):
Volume do reagente 1 (anticorpo,NAD,G6P):
Volume do reagente 2 (conjugado enzimático):
Temperatura do teste:
Comprimento de onda:
Tipo de medição:
Volume de auto-diluição:
(Modo semi-quantitativo)
12 µl
10 µl
245 µl
120 µl
37 °C
340 e 600 nm
Taxa
2 ml
Calibração
Quando calibrar o método da COC, deverão ser tomadas em consideração
as seguintes informações:
Concentração “Cutoff”*: 300 ng/ml
*SAMHSA – Administração dos Serviços de Abuso de Substâncias Saúde
Mental
Material de referência
Modo qualitativo:
Calibrador de Nível 3 Syva Emit® Catálogo
9A569UL
300 ng/ml de benzoilecgonina
Material de referência
Calibrador de Nível 0 Syva Emit® Catálogo
9A509UL
Modo semi-quantitativo: 0 ng/ml de benzoilecgonina
Calibrador de Nível 2 Syva Emit® Catálogo
9A549UL
150 ng/ml de benzoilecgonina
Calibrador de Nível 3 Syva Emit® Catálogo
9A569UL
300 ng/ml de benzoilecgonina
Calibrador de Nível 4 Syva Emit® Catálogo
9A589UL
500 ng/ml de benzoilecgonina
Calibrador de Nível 5 Syva Emit® Catálogo
9A609UL
1000 ng/ml de benzoilecgonina
Intervalo de calibração:
0 a 1000 ng/ml
Níveis de calibração sugeridos:
Modo qualitativo
300 ng/ml (Nível “Cutoff”)
Validar a calibração, analisando um controlo
positivo e um controlo negativo.
Modo semi-quantitativo: 0,150,300 (Nível “Cutoff”),500 e 1000 ng/ml
Validar a calibração, analisando um controlo
positivo e um controlo negativo.
Coeficientes iniciais:
Modo semi-quantitativo: C0:
C1:
C2:
C3:
C4:
Esquema de calibração:
Modo qualitativo:
97.7
128.3
-0.8
215.5
0.5
Nível “Cutoff” (300 ng/ml) em triplicado
Modo semi-quantitativo: Níveis 0,150,300,500 e1000 ng/ml em duplicado
Frequência da calibração: Cada lote novo de cartucho de reagente. Cada 30
dias para qualquer lote.
Intervalo do ensaio
Modo semi-quantitativo: 35 a 900 ng/ml
Materiais necessários:
Cartucho de reagente Flex® para COC, Nº. de Cat. DF92A
Calibrador de Nível 0 Syva Emit® Catálogo 9A509UL
0 ng/ml benzoilecgonina
Calibrador de Nível 2 Syva Emit® Catálogo 9A549UL 150 ng/ml benzoilecgonina
Calibrador de Nível 3 Syva Emit® Catálogo 9A569UL 300 ng/ml benzoilecgonina
Calibrador de Nível 4 Syva Emit® Catálogo 9A589UL 500 ng/ml benzoilecgonina
Calibrador de Nível 5 Syva Emit® Catálogo 9A609UL1000 ng/ml benzoilecgonina
Procedimento: Para a execução do teste da COC é necessário o cartucho
de reagente Flex® para a COC, Nº de Catálogo DF92A. Este teste é
efectuado automaticamente no sistema de química clínica Dimension®,
depois de o método ter sido calibrado (consultar o Material de Referência
na secção Calibração, em baixo).
Passos do teste
A recolha da amostra, administração do reagente, mistura, processamento
e impressão dos resultados são realizados automaticamente pelo sistema
Dimension®. Para obter pormenores sobre este processamento, consulte
o manual do sistema Dimension®.
Controlo de qualidade
Pelo menos uma vez em cada dia de utilização, analise um controlo
positivo e um controlo negativo relativamente à concentração “cutoff”,
utilizando um material de controlo à base de urina adequado. Se os
resultados caírem fora dos limites aceitáveis do laboratório, siga o
procedimento da resolução de problemas apresentado no manual do
sistema Dimension®. Pode existir uma avaria do sistema se for observada
a seguinte precisão de 5 testes:
Concentração
Desvio Padrão
% CV
300 ng/ml de benzoilecgonina
> 50 ng/ml
16.7
300 ng/ml de benzoilecgonina
> 20 QUAL
2.0
(Unidades QUAL normalizadas)
Resumo dos resultados dos doentes
Resultados:
Modo qualitativo: Os resultados obtidos numa análise de COC podem ser
referidos qualitativamente como negativos ou positivos, relativamente ao
“cutoff” de 300 ng/ml para COC. Os resultados positivos indicam que,
provavelmente, a amostra contém benzoilecgonina (metabolito da cocaína).
Os resultados negativos indicam que a amostra não contém
benzoilecgonina (metabolito da cocaína) ou que a benzoilecgonina está
presente em concentrações inferiores ao nível “cutoff” de 300 ng/ml.
Modo semi-quantitativo: Os resultados de uma análise de COC podem ser
referidos semi-quantitativamente com um resultado expresso numa
concentração com unidade numérica (ng/ml) seguido por uma designação
negativa ou positiva. O resultado da concentração em ng/ml representa,
aproximadamente, a concentração cumulativa dos fármacos detectados
pela análise de COC. O resultado numérico pode ser utilizado para a semiquantificação da amostra, para a monitorização com precisão e para a
calibração. Os resultados semi-quantitativos em ng/ml são equivalentes à
concentração do fármaco apenas quando a amostra é um padrão contendo
0 a 1000 ng/ml de benzoilecgonina pura.
Os resultados de COC superiores ou iguais a 300 ng/ml devem ser
referidos como positivos. Os resultados de COC inferiores a 300 ng/ml
devem ser referidos como negativos. Os resultados inferiores ao “cutoff”
numérico indicam que não existe benzoilecgonina (metabolito da cocaína)
na amostra ou que a benzoilecgonina está presente em concentrações
inferiores ao nível “cutoff” de 300 ng/ml.
Limitações do procedimento:
• Resultados NEGATIVOS para amostras com concentrações abaixo do
intervalo do ensaio podem ser acompanhadas por uma mensagem “intervalo
do ensaio” ou “abaixo do intervalo do ensaio”. Estes resultados devem ser
registados como NEGATIVOS.
• Resultados POSITIVOS para amostras com concentrações acima do intervalo
do ensaio podem ser acompanhadas por uma mensagem “intervalo do
ensaio” ou “acima do intervalo do ensaio”. Estes resultados devem ser
registados como POSITIVOS.
• Um resultado positivo do ensaio indica a provável presença de
benzoilecgonina (metabolito da cocaína) mas não indica nem mede o nível de
intoxicação.
• A presença de benzoilecgonina (metabolito da cocaína) na urina é apenas uma
indicação da exposição recente à cocaína ou do consumo de cocaína.
• Os efeitos psicológicos e fisiológicos da benzoilecgonina (metabolito da
cocaína) não estão necessariamente relacionados com a concentração
urinária.
• Um resultado de COC positivo indica a provável presença do fármaco e dos
seus metabolitos. O método COC não consegue quantificar a concentração
dos componentes individuais.
• A interpretação dos resultados deve considerar que as concentrações de urina
variam muito com a ingestão de líquidos e com outras variáveis biológicas.
Foram testadas 192 amostras de urina nativas com o cartucho Flex®
para COC no sistema Dimension® (“cutoff” de 300 ng/ml) e com o
método da COC no Sistema Abbott AxSYM® (“cutoff” de 300 ng/ml).
As amostras com resultados positivos em qualquer método foram
analisadas por CG/EM.
Sistema Abbott AxSYM®
(“Cutoff” de 300 ng/ml)
+
Cartucho de reagente
Flex® para COC no
sistema de química
clínica Dimension®
(“Cutoff” de 300 ng/ml)
–
+
52
0
–
0
140
CG/EM
(“Cutoff” de 150 ng/ml)
+
Cartucho de reagente
Flex® para COC no
sistema de química
clínica Dimension®
(“Cutoff” de 300 ng/ml)
–
+
52
0
–
0
42
Especificidade analítica
Consultar a secção “Concentração dos Compostos Que Apresentam
Resultados COC Negativos num “Cutoff” de 300 ng/ml”.
Sensibilidade analítica
A sensibilidade do método COC é de 35 ng/ml, valor que representa a
menor concentração de COC que pode ser distinguida do zero. Esta
sensibilidade é definida como a concentração dois desvios padrão acima do
Calibrador de Nível 0 Emit® 0.0 ng/dl (n=20).
Bibliografia:
1. Emit® II Plus Cocaine Metabolite Assay Package Insert Sheet, 2000.
2. Hawks, RL, Chiang, CN, Urine testing for drugs of abuse, NIDA Research
Monograph 73, U.S. Government Printing Office, Washington, DC
20402,1986:24-29.
3. Burtis CA, Ashwood ER. TietzTextbook of Clinical Chemistry, W.B.
Saunders Co., Philadelphia, PA 1999,Third edition pp 39–41 (Biological
Hazards), pp 1191-1193 (Drugs of Abuse).
4. Baselt RC, Cravey RH. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man.
4th ed. Chemical Toxicology Institute; Foster City, California,1995:450.
Dimension® e Flex® são marcas registadas da Dade Behring Inc., no
Departamento de Patentes e Marcas Registadas dos E.U., na Alemanha e
muitos outros países.
* As secções revistas são anotadas com um asterisco.
• Auto-diluição (AD): Esta característica encontra-se apenas disponível para as
amostras testadas no modo semi-quantitativo. Consultar o manual do
sistema Dimension®.
• Existe a possibilidade de outras substâncias e/ou outros factores não
referidos em cima poderem interferir com o teste e produzirem resultados
falsos, por exemplo erros técnicos ou de procedimento.
Características específicas de desempenhod
Reprodutibilidadee
Material
Média
ng/ml
Chave dos Símbolos
Fabricado por
EU REP
IVD
LOT
Intra-ensaio
Total
Desvio Padrão % CV Desvio Padrão % CV
Nível 1 do Controlo
248
18
7.4
27
10.9
(225 ng/ml)
Controlo “Cutoff”
309
31
10.2
37
12.1
(300 ng/ml)
Nível 2 do Controlo
384
45
11.8
46
12.0
(375 ng/ml)
d. Todos os testes de características de desempenho foram efectuados após a
realização das verificações normalmente recomendadas do controlo da
qualidade do equipamento (consultar o manual do sistema Dimension®).
e. Os controlos foram analisados em duplicado durante 20 dias. Os
coeficientes intra-ensaio e os coeficientes totais (%CV) foram calculados
através do método da análise da variância, de acordo com a Norma EP5-A do
Comité Nacional de Padrões Laboratoriais Clínicos (National Committee of
Clinical Laboratory Standards) (NCCLS) (Fevereiro de 1999).
Representante Autorizado
Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro
Código do Lote
A data em “Utilizar antes de” encontra-se no
formato ano-mês-dia (AAAA-MM-DD)
EXP
YYYY-MM-DD
8° C
2° C
Limitação da Temperatura
Marca CE
REF Número de Catálogo
Consulte as Instruções de Utilização
2000-09-12 PT
0800-170417
SAC - Serviço de Atendimento ao Cliente
sac/[email protected]
Importado e distribuído por
DADE BEHRING LTDA .
Dade Behring Inc.
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CNPJ: 00.897.408/0001-08
Resp. Téc.: Nanci A. Trindade
CRF - SP: 7.297
2001-07 C PN717092.101-PT
• O sistema de emissão de relatórios do instrumento contém mensagens de
erro para prevenir o operador de avarias específicas. Qualquer relatório que
contenha tais mensagens de erro deve ser retido para seguimento. Consultar
o manual do sistema Dimension®.