TÍTULO: AVALIAÇÃO MORFOLÓGICA, HISTOLÓGICA E

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TÍTULO: AVALIAÇÃO MORFOLÓGICA, HISTOLÓGICA E IMUNOHISTOQUÍMICA DA LÍNGUA DE CÃES
DISTRÓFICOS GRMD (GOLDEN RETRIEVER MUSCULAR DYSTROPHY)
CATEGORIA: EM ANDAMENTO
ÁREA: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E SAÚDE
SUBÁREA: MEDICINA VETERINÁRIA
INSTITUIÇÃO: UNIVERSIDADE CRUZEIRO DO SUL
AUTOR(ES): WANDERLEY FERREIRA SILVA JUNIOR
ORIENTADOR(ES): PAULA FRATINI, RODRIGO DA SILVA NUNES BARRETO
COLABORADOR(ES): CARLOS EDUARDO AMBRÓSIO, CNPQ, DEYSEIANY DE FÁTIMA LOPES DA
SILVA, EUDSON FERNANDES DE LIMA, MARIA ANGÉLICA MIGLINO, STÉFANIE VANESSA SANTOS,
UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO (FMVZ-USP)
Resumo
A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) caracteriza-se como uma miopatia
hereditária recessiva ligada ao cromossomo x comum em humanos, causando
progressiva degeneração muscular, como eventual fibrose e infiltração por tecido
adiposo. Ocorre pela ausência de proteína distrofina na membrana das fibras
musculares encontradas principalmente na musculatura esquelética e cardíaca.
Existem alguns modelos animais para o estudo desta doença, como o camundongo
mdx e o cão Golden Retriever (GRMD). Os cães da raça Golden Retriever afetados
pela distrofia muscular possuem características homólogas à distrofia muscular de
Duchenne que acomete humanos. A língua é um componente do sistema digestório,
composta por musculatura estriada esquelética. Os problemas de deglutição em
pacientes com DMD apresenta uma enorme dificuldade de manter o alimento na boca
por disfagia, atrofia dos músculos mastigatórios, engasgos, salivação, macroglossa
causando constantes mordidas e lesões na língua O cão Golden Retriever distrófico
pode apresentar dificuldade na capacidade de abrir os maxilares e dificuldade na
apreensão e deglutição e a língua pode ser hipertrófica. Este projeto visa avaliar
morfológica e microscopicamente vários aspectos anatômicos e histológicos que
acometem estes órgãos afetados pela doença, assim como avaliar por análise
imunohistoquímica a expressão de VEGF, Distrofina e MyoD na musculatura
esquelética da língua de cães afetados e normais. Línguas serão obtidas de cães
provenientes da colônia de cães GRMD-Brasil da FMVZ-USP. Até o presente
momento já foram feitas coletas de cães afetados e normais, feitas as mensurações
macroscópicas, inclusão, cortes e a coloração de lâminas para HE e Tricromo de
Masson, assim como análises em microscopia eletrônica de varredura.
Palavras-chave: GRMD; Distrofia Muscular; Língua.
1. INTRODUÇÃO
A distrofia muscular de Duchenne (DMD) é caracterizada como uma miopatia
hereditária recessiva ligada ao cromossomo x comum em humanos; afeta,
aproximadamente, um em cada 3.500 indivíduos do sexo masculino, causando
progressiva degeneração muscular com eventual fibrose e infiltração por tecido
adiposo (HOWELL et al., 1997).
Observa-se a ausência de proteína distrofina na membrana das fibras musculares
encontradas em uma grande variedade de tecidos, principalmente na musculatura
esquelética e cardíaca. Devido a progressão da doença, as fibras musculares são
substituídas por tecido fibroso e células adiposas. (YUGETA et al., 2006).
Os cães da raça Golden Retriever afetados pela distrofia muscular possuem
características homólogas à distrofia muscular de Duchenne que acomete humanos
quando comparados com outros modelos animais. (COOPER et al., 1988).
2. OBJETIVOS
Avaliar morfológica e microscopicamente vários aspectos anatômicos e
histológicos que acometem estes órgãos afetados pela doença e também avaliar por
análise imunohistoquímica a expressão de VEGF, Distrofina e MyoD na musculatura
esquelética da língua de cães afetados e normais.
3. METODOLOGIA
Serão obtidas línguas de cães provenientes da colônia de cães GRMD-Brasil da
FMVZ-USP, de cães distróficos (afetados) e portadoras que forem eutanasiados ou
vierem à óbito durante o período de realização deste projeto. Também será coletada
línguas de cães normais que vierem a óbito no hospital veterinário da FMVZ –USP.
Os órgãos serão mensurados, pesados e fotodocumentados. Será realizada ainda
uma análise macroscópica detalhada das características do órgão. Após a descrição
macroscópica, as línguas serão processadas para análise histológica. Será
empregada a técnica de microscopia de luz, com o intuito de caracterizar
histologicamente as estruturas componentes do órgão. Em seguida, o material será
analisado e as características morfológicas encontradas serão fotodocumentadas.
Para a realização da análise imunohistoquímica dos cortes histológicos obtidos de
diferentes regiões do órgão, utilizaremos os anticorpos Anti-VEGF para análise da
angiogênese e anti-distrofina para analisar a ausência/presença desta nas diferentes
regiões analisadas e Myo-D para análise da musculatura.
4. DESENVOLVIMENTO
A língua é um componente do sistema digestório, composta por musculatura
estriada esquelética, possuí na superfície dorsal numerosas papilas (JUNQUEIRA;
CARNEIRO, 2013). Nos cães a língua conduz a captação de água e alimento na
deglutição e atua como controle de temperatura, tato e dor (KONIG; LIEBICK, 2012).
De acordo com Willig et al. (1994), os problemas de deglutição em pacientes com
DMD apresenta uma enorme dificuldade de manter o alimento na boca por disfagia,
atrofia dos músculos mastigatórios, engasgos, salivação, macroglossa causando
constantes mordidas e lesões na língua. O cão afetado pela distrofia muscular tem a
capacidade de mastigar o alimento, mas devido os movimentos irregulares da língua
deixa escorregar o alimento para fora, pois falta habilidade de movimentação da língua
(Bergman et al., 2002).
5. RESULTADOS PRELIMINARES
Foram feitos cortes e a coloração das lâminas para Massom e HE. Esperamos com
este estudo demonstrar anatômica e histologicamente semelhanças e diferenças
entre as línguas de cães distróficos e saudáveis, contribuindo desta forma para uma
melhor compreensão da doença.
FONTES CONSULTADAS
BERGMAN, R. L.; INZANA, K. D.; MONROE, W. E.; SHELL, L. G.; LIU, L. A.;
ENGVALL, E.; SHELTON, G. D. Dystrophin-deficient muscular dystrophy in Labrador
retriever. Journal of the American Animal Hospital Association, v. 38, p. 255- 261,
2002.
COOPER B.J. et al.The homologue of Duchenne locus is defective in X-linkedn
muscular dystrophy of dog. Nature 334:154-156, 1988.
HOWELL, J.M. et al. Use of the dog model for Duchenne muscular dystrophy in gene
therapy trials. Neuromuscular Disorders, v.7, p.325-328, 1997.
YUGETA N. et al.Cardiac involvement in Beagle-based canine X-linked muscular
dystrophy in
Japan
(CXMDJ):
Electrocardiographic,
echocardiographic,
and
morphologic studies. BMC Cardiovascular Disorders. 6:47. Doi 10.1186/1471-2261,
2006.
WILLIG, T.N. et al. Swallowing problems in neuromuscular disorders.Archives of
Physical Medicine and Rehabilitation. 75:1175-1181, 1994.
KONIG, H.E.; LIEBICK, H.G. Anatomia dos Animais Domésticos: Texto e Atlas
Colorido. 4. ed. São Paulo: Artmed, 2012. ( Reimpressão ),323,324.p
JUNQUEIRA, L.C.; CARNEIRO, J. Histologia Básica. 9. ed. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan, 1999. Editora Guanabara Koogan S.A. (12° Ed), 2013 , 281.p