título do resumo

MARCADORES DE ESTRESSE OXIDATIVO EM MODELO DE SÍNDROME
METABÓLICA INDUZIDA POR FRUTOSE EM RATOS TRATADOS COM
MICROCÁPSULA DE QUERCETINA
Ana Paula Michelin (Bolsista CNPq), Luciana Higachi, Décio Sabbatini Barbosa
e-mail: [email protected]
Universidade Estadual de Londrina/Departamento de Patologia, Análises
Clínicas e Toxicológicas
Ciências da Saúde - Farmácia
Palavras-chave: frutose; estresse oxidativo; microcápsula de quercetina
Resumo
O aumento no número de indivíduos obesos e o consequente desenvolvimento
da síndrome metabólica (SM) são problemas de saúde pública cada vez mais
significativos. Comorbidades junto à obesidade são relacionadas com a
mudança do estado redox e com aumento do estresse oxidativo no tecido
adiposo. O consumo de flavonoides, como a quercetina (QT), tem potencial em
atenuar a inflamação do tecido adiposo e a resistência à insulina em modelos
experimentais de SM. Porém, sua utilização terapêutica é limitada devido a sua
natureza hidrofóbica e instabilidade em meio fisiológico. Por isso, utilizam-se
sistemas de micropartículas para melhorar a estabilidade do fármaco bem
como sua biodisponibilidade. O objetivo deste trabalho foi verificar se existe
uma potencialização dos efeitos benéficos da QT na forma microencapsulada
(MCQT). As dosagens bioquímicas foram realizadas por metodologia
automatizada enquanto que a capacidade antioxidante total (TRAP) foi avaliada
por quimiluminescência. Os produtos avançados de oxidação proteica (AOPP)
e subprodutos do óxido nítrico (NOx) foram realizados por espectrofotometria.
Nesse estudo, não houve diferença significativa nos biomarcadores colesterol
total, triacilgliceróis e LDL entre os grupos. Já o HDL encontrou-se
significativamente diminuído no grupo ração frutose, tween 80 e QT livre em
relação ao grupo ração padrão (GRP). Além disso, observou-se diferença
significativa da glicose no grupo GRP comparado a todos os outros grupos.
Não houve diferença significativa nos parâmetros TRAP, AOPP e NOx entre
todos os grupos. Portanto, não foi possível observar a eficácia da QT e MCQT
nos parâmetros citados acima.
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Introdução e objetivo
A síndrome metabólica (SM) caracteriza-se pela obesidade abdominal,
hipertrigliceridemia, diminuição do HDL-colesterol, pressão arterial elevada e
hiperglicemia de jejum. A SM é considerada um fator de risco para doenças
vasculares e, portanto, em função de sua relevância clínica tornam-se
importantes estudos sobre a mesma (KOTANI et al., 2015).
Comorbidades junto à obesidade são relacionadas com a mudança do
estado redox e com aumento do estresse oxidativo (EO) no tecido adiposo. O
EO nos adipócitos desempenha um papel central no Diabetes Mellitus tipo 2
(DM2) e resistência à insulina (RI). Portanto, a terapia antioxidante pode ser
uma estratégia útil para a DM2 e outros estados de insulino-resistência (GAO
et al., 2015).
A quercetina (QT), (3,3',4',5,7-pentahidroxiflavona) é um flavonoide
geralmente encontrado em legumes, frutas e folhas. A QT possui elevada
atividade antioxidante. Entretanto a utilização deste polifenol no campo
farmacêutico é limitada devido a sua natureza hidrofóbica e instabilidade no
meio fisiológico (BAGAD; KHAN, 2015). Sistemas de micropartículas são
utilizados para melhorar o perfil de liberação, assim como a biodisponibilidade
de drogas orais (LAMA; GAMBARI, 2014).
O objetivo deste estudo foi verificar se existe uma potencialização dos
efeitos benéficos da QT na forma microencapsulada em um modelo animal
(ratos) de indução de SM através do uso de frutose.
Procedimentos metodológicos
O estudo foi realizado com 60 ratos da linhagem Wistar, machos, com peso de
150g (+/-25g). Os animais foram mantidos em gaiolas individuais de polietileno,
à temperatura de 22 ± 1°C e em ciclo claro/escuro de 12/12 horas, com água e
alimento ad libitum. Os animais foram divididos em 6 grupos experimentais,
com pelo menos 10 animais em cada: Grupo 1 – animais recebendo ração
padrão para roedores (NUVILAB®) e salina por gavage, (GRP); Grupo 2 –
animais recebendo ração de frutose e salina por gavage, (GRFR); Grupo 3 –
animais recebendo ração de frutose e tratados com Tween 80 - 20% (veículo
da quercetina) por gavage, (GTW); Grupo 4 – animais recebendo ração de
frutose e tratados com quercetina livre por gavage na dose de 100mg/kg/dia,
(GQTL); Grupo 5 – Animais recebendo ração de frutose tratados com
microcápsula inerte por gavage, (GMCI); Grupo 6 – animais recebendo ração
de frutose, tratados com microcápsulas de quercetina por gavage na dose de
100mg/kg/dia (GMCQT).
Para a indução da SM, foi fornecida aos animais uma ração preparada
com 66% de frutose durante 9 semanas. Concomitante a esta indução, os
animais foram tratados, sempre por gavage. Ao término do tratamento, os
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ratos foram anestesiados com tiopental 70mg/kg para a coleta de sangue por
punção cardíaca destinada a avaliação dos parâmetros bioquímicos (perfil
lipídico e glicemia) e de estresse oxidativo (capacidade antioxidante total
(TRAP), subprodutos do óxido nítrico (NOx) e produtos avançados de oxidação
proteica (AOPP).
As dosagens bioquímicas foram realizadas utilizando metodologia
automatizada; TRAP foi avaliada por quimiluminescência enquanto que as
quantificações de AOPP e NOx foram realizadas por espectrofotometria.
Este projeto foi submetido ao Comitê de Ética em Experimentação
Animal da UEL e foi aprovado sob o processo CEUA n° 31855.2012.76.
A estatística foi realizada por análise exploratória para verificação de
distribuição normal através do teste de Shapiro-Wilk e homogeneidade de
variância pelo teste de Levene de cada variável. Quando estas apresentaram
distribuição normal e homogeneidade, foi utilizado ANOVA complementado
pelo teste de Tukey. Estes dados foram descritos em forma de média e
intervalo de confiança 95%. Para os dados que não apresentaram distribuição
normal, foi utilizado o teste de Kruskal-Wallis complementado pelo teste de
Dunn. Neste caso, os resultados foram expressos em mediana indicando
valores mínimo e máximo. Foi considerado significativo sempre que p < 0,05.
Resultados e discussão
Os parâmetros de EO, TRAP, AOPP e NOx não apresentaram diferenças
significantes entre os grupos. O estudo de Porto et al. (2015), na qual a frutose
foi administrada diluída em água, não encontrou modificação na produção de
NOx entre dois grupos (controle e frutose), corroborando com nossos
resultados. Em contrapartida, os níveis de AOPP foram significativamente
aumentados no grupo frutose.
Em relação aos parâmetros bioquímicos, no presente estudo não houve
diferença significativa nos testes de colesterol total (CT), LDL-colesterol e
triacílgliceróis (TG). Entretanto, observamos diferença significativa da glicose
no grupo GRP comparado a todos os outros grupos. No estudo de Zhang et al.
(2013), foi observado uma hiperlipidemia em ratos adultos tratados com
solução de frutose e também demonstraram que QT 100mg melhorou
efetivamente níveis de CT e TG. Em nosso estudo o HDL encontrou-se
diminuído no GRFR, GTW e GQTL em relação ao GRP.
Conclusão
Embora a QT seja conhecida pelo seu potencial antioxidante em modelos
utilizando a frutose na indução de parâmetros da SM, neste estudo não foi
possível observar a eficácia da QT e MCQT nos parâmetros e concentração
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citados acima. Por isso, novos estudos devem ser realizados com novas
concentrações, a fim de verificar o potencial antioxidante da QT e da MCQT.
Agradecimentos
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico pela
concessão da bolsa, a Universidade Estadual de Londrina e a todos que
colaboraram para a execução desde estudo.
Referências
BAGAD, Z.M.; KHAN, A. Poly(n-butylcyanoacrylate) nanoparticles for oral delivery of
quercetin: preparation, characterization, and pharmacokinetics and biodistribution
studies in Wistar rats. International Journal of Nanomedicine. v.10, p.3921–3935,
2015.
GAO, M.; ZHAO, Z.; LV, P.; LI, Y.; GAO, J.; ZHANG, M.; ZHAO, B. Quantitative
combination of natural anti-oxidants prevents metabolic syndrome by reducing
oxidative stress Redox Biology. v.6, p.206–217, 2015.
KOTANI, K.; SATOH-ASAHARA, N.;NAKAKUKI, T.; YAMAKAGE, H.; SHIMATSU,
A.; TSUKAHARA, T. Association between metabolic syndrome and multiple lesions of
intracranial atherothrombotic stroke: a hospital-based study . Cardiovascular
Diabetology., v.14, p.108 2015.
LAMA, P.L.; GAMBARI, R. Advanced progress of microencapsulation technologies: In
vivo and in vitro models for studying oral and transdermal drug deliveries. Journal of
Controlled Release. V.28, p.25–45, 2014.
PORTO, M.L.; LÍRIO, L.M.; DIAS, A.T.; BATISTA, A.T.; CAMPAGNARO, B.P.; MILL,
J.G.; MEYRELLES, S.S.; BALDO, M.P. Increased oxidative stress and apoptosis in
peripheral blood mononuclear cells of fructose-fed rats, Toxicology in Vitro (2015).
ZHANG, Q.; PAN, Y.; WANG, R. KANG, L.; XUE, Q.; WANG, X.; KONG, L. Quercetin
inhibits AMPK/TXNIP activation and reduces inflammatory lesions to improve insulin
signaling defect in the hypothalamus of high fructose-fed rats. Journal of Nutritional
Biochemistry. Vol. 25, p.420-428, 2014.
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