IMPORTÂNCIA DA INCORPORAÇÃO DO

IMPORTÂNCIA DA INCORPORAÇÃO DO ESTUDO CITOGENÔMICO POST MORTEM À NECROPSIA DE
PORTADORES DE MALFORMAÇÕES CONGÊNITAS
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Autores
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Alexandre Torchio Dias , Évelin Aline Zanardo , Roberta Lelis Dutra , Flavia Balbo Piazzon , Gil
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Monteiro Novo-Filho , Marília Moreira Montenegro , Cintia Fridman , Regina Schultz , Chong Ae Kim ,
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Leslie Domenici Kulikowski
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Instituição LC-FMUSP - Laboratório de Citogenômica - HC-FMUSP (Av. Dr. Enéas Carvalho Aguiar 155 - 2º andar 2
Bloco 12 - Sala 7 - São Paulo/SP), DAP-FMUSP - Divisão de Anatomia Patológica - Dep. de Patologia 3
FMUSP (Av. Dr. Enéas Carvalho Aguiar 155 - 10º andar - São Paulo/SP),
LIM 40 - FMUSP Departamento de Medicina Legal - LIM 40 - FMUSP (Av. Dr. Arnaldo, 455 - Instituto Oscar Freire - FMUSP
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- São Paulo/SP), UG-ICr-FMUSP - Unidade de Genética - Instituto da Criança - FMUSP (Av. Dr. Enéas
Carvalho Aguiar 647 - 7º andar - São Paulo/SP)
Resumo
OBJETIVOS
O objetivo do trabalho foi mostrar a viabilidade e a importância do diagnóstico citogenômico em amostras post
mortem nos casos de óbitos fetais e infantis, cujo estudo anatomopatológico foi inconclusivo para a determinação
etiológica das malformações congênitas.
MÉTODOS
Foram avaliados 15 casos de óbitos fetais e infantis de portadores de malformações congênitas submetidos à análise
anatomopatológica sem estudo genético prévio. O isolamento e purificação do DNA de tecido parafinado, conservado
em formol ou a fresco foi realizado utilizando kit DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen) e o preparo das lâminas para a
análise celular foi realizada com protocolo desenvolvido pelo Laboratório de Citogenômica (HC-FMUSP). As técnicas
citogenômicas utilizadas para a realização do diagnóstico foram a Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification
(MLPA – MRC Holland) com os kits P095 - aneuploidias, P036 e P070 – regiões subteloméricas e P064 –
microdeleções; a Fluorescence in Situ Hybridization (FISH) com sondas regiões-específicas (Cytocell), a técnica de
array com o BeadChip Infinium CytoSNP-850K (Illumina) e a técnica de marcadores microssatélite com o Kit MiniFiler
™ (AppliedBiosystems), composto por 9 marcadores de Short Tandem Repeats (STRs) (D13S317, D7S820,
Amelogenin, D2S1338, D21S11, D16S539, D18S51, CSF1PO, e FGA). Foram incluídos controles positivos e
negativos em todos os testes.
RESULTADOS
Dos 15 pacientes analisados, 7 (cerca de 47%) apresentaram resultados importantes à conclusão diagnóstica da
necropsia. Seis casos apresentaram alterações genômicas patogênicas, incluindo: uma duplicação envolvendo o
gene TYMS em 18p11.3; uma deleção envolvendo os genes CHL1 em 3p26.3; uma deleção na região do gene HIC1
em 17p13.3 e três casos de aneuploidias envolvendo os cromossomos 18 e 21, todos sem suspeita clínica na análise
anatomopatológica. Ainda, durante a análise dos resultados, foi possível realizar a determinação sexual
cromossômica (para o sexo feminino) de um paciente com genitália ambígua.
CONCLUSÃO
Consideramos imprescindível a incorporação de testes citogenômicos na rotina de análise anatomopatológica, uma
vez que a necropsia molecular pode ajudar a confirmar uma suspeita clínica além de revelar alterações genômicas
crípticas capazes de um diagnóstico inequívoco. A transposição tecnológica da pesquisa científica para a rotina
laboratorial nesses casos representa um benefício direto para o aconselhamento genético familiar e para o
planejamento de políticas públicas para prevenção primária das malformações congênitas.
Palavras-chaves: Estudo citogenômico post mortem, MLPA, Array, FISH, Necropsia - Agência de Fomento: CAPES; CNPq