Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento – MAPA Secretaria de Defesa Agropecuária – SDA Coordenação Geral de Apoio Laboratorial - CGAL Manual de Métodos de Análises de Bebidas e Vinagres Não alcoólicos ÁCIDOS ORGÂNICOS Método 12 1. MÉTODO Cromatográfico 2. PRINCÍPIO Baseia-se na separação e identificação dos ácidos orgânicos através de padrão, por cromatografia em papel. 3. MATERIAL 3.1 EQUIPAMENTOS a) Balança analítica b) Secador de cabelo 3.2 REAGENTES E SOLUÇÕES a) Fase móvel: Misturar 40 mL de n-butanol (contendo 1 g de azul de bromofenol/Litro de n-butanol) com 20 mL de ácido acético 50 % (v/v). b) Soluções padrão a 1% de: ácido tartárico ácido málico ácido cítrico ácido lático e outros 3.3 VIDRARIA E OUTROS MATERIAIS a) Papel Whatman nº 1 para cromatografia b) Micro pipeta ou tubo capilar c) Cuba cromatográfica 4. PROCEDIMENTO A 5 cm da base do papel Whatman, aplicar 5 L dos padrões e da amostra, distanciados de 3 cm. Introduzir o papel na cuba contendo a fase móvel. Deixar correr ascendentemente até a fase móvel se aproximar da borda superior do papel, aproximadamente por 4 horas. Retirar o cromatograma. Marcar a distância percorrida pela fase móvel e secar. O papel Whatman seco torna-se azulado. Os ácidos separam-se na seguinte ordem: o ácido tartárico em baixo; logo acima o ácido cítrico; ácido málico no meio; e os ácidos láctico e succínico ao alto (apresentam o maior Rf). Se existir ácido orgânico na amostra, constata-se a presença de uma mancha amarela na mesma altura do padrão. 5. CÁLCULO E EXPRESSÃO DO RESULTADO Rf Da Ds Onde: Edição: 1 Revisão: 0 Página 1 de 2 Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento – MAPA Secretaria de Defesa Agropecuária – SDA Coordenação Geral de Apoio Laboratorial - CGAL Manual de Métodos de Análises de Bebidas e Vinagres Não alcoólicos ÁCIDOS ORGÂNICOS Método 12 Da = Distância percorrida pela mancha do ácido orgânico da amostra (distância entre a linha de base e o centro da mancha). Ds = Distância percorrida pela fase móvel (desde a linha de base até a frente da fase móvel). Correlacionar o Rf dos padrões com o Rf da amostra, para identificação do ácido orgânico presente. REFERÊNCIA INSTITUTO de tecnologia de alimentos. Manual técnico de análise química de alimentos. Campinas, 1990. *BRASIL. Ministério da Agricultura. Portaria nº 76 de 26 de novembro de 1986. Dispõe sobre os métodos analíticos de bebidas e vinagre. Diário Oficial da República Federativa do Brasil, Brasília, 28 nov. 1986. Seção 1, pt. 2. Edição: 1 Revisão: 0 Página 2 de 2