efeito da agregação embrionária na alocação celular e

EFEITO DA AGREGAÇÃO EMBRIONÁRIA NA ALOCAÇÃO CELULAR E
DESENVOLVIMENTO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS CLONADOS POR
TRANSFERÊNCIA NUCLEAR DE CÉLULAS SOMÁTICAS
Marcelo Bertolini1; Fabiano Koerich Vieira2; Renato Gerger3; Lain Ohlweiler4; Jamir Machado
Jr4; Joana Claudia Mezzalira5; Fabiana Forell6; Lucio Pereira Rauber7; Alceu Mezzalira7
RESUMO
Palavras-chave: transferência nuclear; clonagem animal; embriões bovinos; agregação citoplasmática
Na clonagem pela técnica handmade cloning (HMC), a heteroplasmia causada pela fusão de citoplastos
pode ter um efeito negativo no desenvolvimento embrionário. Como alternativa, a agregação pode
proporcionar maiores taxas de desenvolvimento embrionário. O objetivo desse estudo foi verificar a
densidade celular e a alocação embrionária de embriões HMC cultivados agregados. Após o
desnudamento e remoção enzimática da zona pellucida, oócitos bovinos maturados in vitro foram
manualmente bisseccionados. Após segregação dos hemi-oócitos enucleados (citoplastos), estes foram
pareados e reconstruídos utilizando dois citoplastos e uma célula somática, positiva (GFP) ou negativa
(WT) para a expressão da proteína fluorescente verde, ou GFP. O cultivo in vitro foi realizado de acordo
com os grupos experimentais, dentro de cada micro-poço: GFP, GFP+GFP, WT, WT+WT, GFP+WT. No
Dia 7 os blastocistos foram submetidos à coloração diferencial para estimar o número de células totais, da
massa celular interna (ICM) e do trofectoderma (TE). As taxas de clivagem (D2) e de blastocisto (D7)
foram comparadas pelo teste de χ2, e o número células pelo teste t (P<0,05). Os grupos GFP (86,4%) e
WT (80,0%) apresentaram taxas de clivagem semelhantes, porém inferiores aos grupos GFP+GFP
(100%), WT+WT (100%) e GFP+WT (90,9%), demonstrando um incremento nas taxas de clivagem com
a agregação. No entanto, os grupos GFP (9,1%) e GFP+GFP (20,8%) apresentaram taxas de blastocisto
inferiores aos grupos WT (50,0%) e WT+WT (40,0%), o que pode estar associado a uma maior
senescência dos cultivos celulares das células GFP. Não obstante, a densidade celular foi semelhante
entre todos os grupos.
1 - Orientador, Professor do Departamento de Morfofisiologia – Centro de Ciências Agroveterinárias Av. Luiz de Camões, 2090 - CEP 88520-000 - Lages - SC
2 - Acadêmico do Curso de Medicina Veterinária – CAV/UDESC, bolsista de iniciação científica do
PROBIC/UDESC
3 - Doutorando - USP/SP
4- Acadêmico do Curso de Medicina Veterinária – CAV/UDESC
5–Mestranda - CAV/UDESC
6- Pesquisadora colaboradora - UFRGS/RS
7 - Professores – Laboratório de Fisiopatologia da Reprodução Animal Prof. Assis Roberto de Bem CAV/UDESC