HAV IgM (aHAVM)

Manual do Ensaio ADVIA Centaur
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HAV IgM (aHAVM)
Ensaio para a detecção de anticorpos IgM para o vírus da hepatite A
Indica informação revisada
Resumo do ensaio
Tipo de amostra
Volume da amostra
Calibrador
Limite do ensaio
Soro, plasma EDTA, lítio ou plasma com heparina de sódio
20 µl
HAV IgM
0,02 – 7,00 S/CO
Conteúdo
REF
05004126
Conteúdo
1 embalagem de reagentes primários ReadyPack® contendo reagente fluorescente,
fase sólida e reagente auxiliar HAV IgM ADVIA Centaur®
1 embalagem auxiliar contendo reagente auxiliar HAV IgM ADVIA Centaur
Cartão de curva principal HAV IgM ADVIA Centaur
1 frasco de calibrador baixo HAV IgM
1 frasco de calibrador alto HAV IgM
Cartão de valor atribuído ao calibrador HAV IgM ADVIA Centaur
Número de testes
100
Para uma definição dos símbolos utilizados na rotulagem dos produtos, consulte Para entender
os símbolos no Apêndice D.
Aplicação
O ensaio HAV IgM ADVIA Centaur® é um imunoensaio de diagnóstico in vitro para a
determinação qualitativa da resposta de IgM ao vírus da hepatite A (HAV) no soro ou plasma
humanos (EDTA, heparina de lítio ou de sódio) utilizando o sistema ADVIA Centaur System.
Este ensaio deve ser utilizado como uma ajuda no diagnóstico de infecção aguda ou recente
(normalmente 6 meses ou menos) pelo vírus da hepatite A.
Materiais necessários mas não fornecidos
REF
05004800
Descrição
Material de controlo de qualidade do HAV IgM
ADVIA Centaur
07948423
(110314)
01137199
(112351)
Multi-diluente 2 do ADVIA Centaur*
*
Líquido de lavagem 1 ADVIA Centaur
Conteúdo
Controlo negativo de 2 x 7,0 ml
Controlo positivo de 2 x 7,0 ml
Cartão do valor previsto
2 embalagens de reagente auxiliar
ReadyPack contendo 10 ml/embalagem
2 x 1500 ml/embalagem
São necessárias no mínimo duas embalagens de reagente auxiliar Multi-Diluente 2 ADVIA Centaur para cada
embalagem de reagente primário HAV IgM ADVIA Centaur (100 testes).
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Resumo e explicação do teste
O ensaio HAV IgM ADVIA Centaur é um imunoensaio quimioluminométrico de
micropartículas de captura de anticorpos utilizado para a detecção do anticorpo IgM para o
vírus da hepatite A no soro ou plasma humanos.
A hepatite A é causada pela infecção com o vírus da hepatite A. O HAV é um vírus de ARN,
sem envelope, de 27 nm de cadeia simples, sendo classificado como um picornavírus. A
transmissão da hepatite A é feita pela via fecal-oral e a infecção ocorre principalmente devido à
ingestão de alimentos contaminados ou a fracas condições sanitárias.1,2
O vírus da hepatite A é replicado no fígado. O vírus é excretado na bílis e transportado nas
fezes. Foi observado apenas um serotipo de entre os isolados de HAV recolhidos em várias
partes do mundo. O período médio de incubação para a infecção pelo HAV é de 30 dias com um
intervalo de 15 a 40 dias. A ocorrência de infecção crónica não foi registada após infecção pelo
HAV. Os sintomas duram aproximadamente 2 semanas e incluem hepatomegalia, icterícia,
urina escura, fadiga e perturbações gastrointestinais, designadamente anorexia, náuseas,
vómitos e dores abdominais. O anticorpo para o HAV é detectado após o aparecimento dos
sintomas resultantes da infecção pelo HAV. A resposta precoce do anticorpo inclui de forma
substancial a subclasse do anticorpo IgM. O anti-HAV IgM é detectado normalmente durante
3 a 6 meses após os sintomas da doenças, apesar do anti-HAV IgG poder persistir
indefinidamente. Devido à produção transitória de anti-HAV IgM, a sua presença no soro indica
a existência de uma infecção ou infecção recente e é o marcador serológico mais útil para o
diagnóstico da infecção aguda pelo HAV.1-4
Uma vez que as infecções virais sintomáticas pela hepatite A podem ser clinicamente iguais às
infecções virais pela hepatite B ou C, o teste serológico é importante para um diagnóstico
correcto.
Princípio do ensaio
O ensaio HAV IgM ADVIA Centaur é um imunoensaio de captura de IgM utilizando o formato
de 2 passos. No primeiro passo, a amostra é diluída utilizando o Multi-Diluente 2. Após a
diluição da amostra, é adicionado o anticorpo monoclonal IgM biotinilado na cuvete de IgM
ligada com a amostra diluída do doente. O complexo IgM é então capturado pela adição de
partículas de látex magnéticas revestidas com estreptavidina (MLP). O IgM-MLP é lavado e
novamente suspenso.
No segundo passo, o anti-HAV IgM capturado na fase sólida é detectado pelo adição sequencial
do antigénio HAV e do anticorpo anti-HAV de rato marcado com éster de acridínio.
O sistema efectua automaticamente os seguintes passos:
aHAVM
•
distribui 20 µl de amostra e 180 µl de Multi-Diluente 2 numa cuvete
•
aspira 60 µl de amostra diluída e distribui a mesma para uma cuvete
•
distribui 150 µl de reagente auxiliar e incuba durante 6 minutos a 37°C
•
distribui 150 µl de fase sólida e incuba durante 18 minutos a 37°C
•
separa a fase sólida da mistura e aspira o reagente não ligado
•
lava a cuvete com o líquido de lavagem 1
•
volta a suspender as partículas em 250 µl de solução de lavagem 1 e incuba durante
6,75 minutos a 37°C
•
distribui 50 µl de reagente auxiliar e reagente fluorescente e incuba durante 18 minutos a
37°C
•
separa a fase sólida da mistura e aspira o reagente não ligado
•
lava a cuvete com o líquido de lavagem 1
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•
distribui 300 µl de reagente ácido e de reagente básico para iniciar a reacção
quimioluminescente
•
comunica os resultados de acordo com a opção seleccionada, conforme descrito nas
instruções de funcionamento ou no sistema de ajuda online
Existe uma relação directa entre o volume de actividade do anti-HAV IgM presente na amostra
do doente e a quantidade de unidades de luz relativa (RLUs) detectadas pelo sistema. Um
resultado reactivo ou não reactivo é determinado de acordo com o valor de "Signal-to-Cutoff"
(S/CO) estabelecido com os calibradores. Consulte Interpretação dos Resultados para uma
descrição do cálculo do valor de "cutoff".
Recolha e manuseamento da amostra
Os tipos de amostra recomendados para este ensaio são o soro, plasma com EDTA, plasma com
heparina de lítio ou de sódio. Não utilize amostras com contaminação microbiana evidente. O
desempenho do ensaio HAV IgM ADVIA Centaur não foi determinado com sangue do cordão
umbilical, amostras sanguíneas de recém-nascidos, amostras sanguíneas de cadáveres, amostras
inactivadas por calor, ou outros fluidos corporais para além do soro e do plasma tais como
saliva, urina, líquido amniótico ou fluidos pleurais.
As recomendações gerais que se seguem para o manuseamento e armazenamento de amostras
de sangue são fornecidas pelo National Committee for Clinical Laboratory Standards5 e
completadas com estudos adicionais sobre o manuseamento de amostras com a utilização do
ensaio HAV IgM ADVIA Centaur:
•
Manuseie todas as amostras como potenciais transmissores de doenças.
•
As amostras são processadas através de centrifugação, normalmente seguida por uma
separação física do soro ou plasma dos eritrócitos. A etapa de centrifugação pode ocorrer
até 24 horas após a recolha. Ao testar 10 amostras nas quais a etapa de centrifugação variou
até 24 horas após a recolha, não foram observadas diferenças clínicas significativas.
•
Analise as amostras o mais rapidamente possível após a sua recolha. Armazene as amostras
entre 2 e 8°C se não forem imediatamente analisadas.
•
Armazene sempre as amostras vedadas e na vertical entre 2 e 8°C e até um máximo de
7 dias.
•
Armazene os tubos de amostras primários entre 2 e 8°C até 7 dias. Mantenha sempre as
amostras vedadas e na vertical. As amostras do tubo primário incluem soro armazenado
coagulado, plasma armazenado em glóbulos vermelhos empacotados e amostras
processadas e armazenadas em tubos de recolha de amostras com barreira de gel. Ao testar
10 amostras que permaneceram nestes tubos primários até 7 dias, não foram observadas
diferenças clínicas significativas.
•
Para um período de armazenamento mais longo, congele as amostras, isentas de eritrócitos,
a uma temperatura de -20°C ou inferior. As amostras podem ser armazenadas à temperatura
de ou inferior a -20°C até 180 dias. Não guarde as amostras num frigorífico com
descongelamento automático. Após terem sido submetidas 10 amostras a 4 ciclos de
congelamento/descongelamento, não foram observadas quaisquer diferenças clínicas
significativas. Misture bem e centrifugue as amostras descongeladas antes de as utilizar.
•
Embale e coloque as etiquetas nas amostras para envio de acordo com os regulamentos
nacionais e internacionais aplicáveis respeitantes ao transporte de amostras clínicas e
agentes etiológicos. As amostras mantidas à temperatura ambiente durante 2 dias ou
arrefecidas durante 7 dias não demonstraram diferenças qualitativas; no entanto, as boas
práticas de laboratório indicam que as amostras deverão ser armazenadas arrefecidas.
Armazene as amostras vedadas e na vertical entre 2 e 8°C após a sua chegada. Se o período
de envio ultrapassar os 7 dias, envie as amostras congeladas.
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Antes de colocar as amostras no sistema, verifique o seguinte:
•
As amostras não contêm fibrina nem outras partículas. Remova as partículas através da
centrifugação.
•
As amostras não contêm bolhas nem espuma.
Reagentes
Armazene os reagentes na posição vertical, a uma temperatura entre 2 e 8°C.
Agite manualmente todas as embalagens de reagentes primários antes de as colocar no sistema. Inspeccione
visualmente a parte inferior da embalagem do reagente, para se certificar de que todas as partículas estão
dispersas e em suspensão. Para obter informações detalhadas sobre a preparação dos reagentes, consulte o
Apêndice C, Manuseamento de reagentes.
Embalagem de
reagente
Reagente
Embalagem de
Reagente
reagente auxiliar fluorescente
ReadyPack
HAV IgM
ADVIA Centaur
Fase sólida
15,0 ml/
embalagem
de reagente
Reagente
auxiliar
5,0 ml/
embalagem
de reagente
Embalagem de
Auxiliar
reagente auxiliar Reagente
ReadyPack
HAV IgM
ADVIA Centaur
25,0 ml/
embalagem
de reagente
Frascos de
calibradores
HAV IgM
Calibradores 2,0 ml/
frasco
Frascos de
Controlos
material de
controlo de
qualidade do
HAV IgM*
Embalagem de
Multireagente auxiliar Diluente 2
ReadyPack
ADVIA Centaur
2*
7,0 ml/
frasco
ADVIA Centaur Líquido de
1*
lavagem 1
1500 ml/
tampão fosfato salino
embalagem com azida sódica (< 0.1%)
e tensioactivo
*
aHAVM
Volume
5,0 ml/
embalagem
de reagente
Armazenament
o
Ingredientes
Estabilidade
anticorpo monoclonal
2–8°C até à data de validade no
anti-HAV (~0,200 µg/ml)
rótulo da embalagem.
marcado com éster de acridínio
Para a estabilidade de
em solução tampão com
utilização, consulte
albumina de sangue bovino,
Estabilidade de utilização
tensioactivo, azida sódica
e intervalo de calibração.
(< 0,1%) e conservantes
micropartículas
2–8°C até à data de validade no
paramagnéticas revestidas com
rótulo da embalagem.
estreptadivina em solução
Para a estabilidade de
tampão com albumina de sangue
utilização, consulte
bovino, tensioactivo, azida
Estabilidade de utilização
sódica (< 0,1%) e conservantes
e intervalo de calibração.
vírus da hepatite A
2–8°C até à data de validade no
inactivado (< 0,1 µg/ml) em
rótulo da embalagem.
solução tampão com albumina
Para a estabilidade de
de sangue bovino, tensioactivo,
utilização, consulte
azida sódica (< 0,1%) e
Estabilidade de utilização
conservantes
e intervalo de calibração.
anticorpo monoclonal de
2–8°C até à data de validade no
rato biotinilado IgM
rótulo da embalagem.
(~0,500 µg/ml) em solução
Para a estabilidade de
tampão com albumina de sangue
utilização, consulte
bovino, IgG de rato,
Estabilidade de utilização
tensioactivo, azida sódica
e intervalo de calibração.
(< 0,1%) e conservantes
plasma humano
2–8°C até à data de validade do
processado positivo para
frasco
anticorpos IgM para o HAV com
ou
conservantes
8 horas de utilização
plasma humano
2–8°C até à data de validade do
processado negativo e positivo
frasco
para anticorpos IgM para o HAV
ou
com conservantes
8 horas de utilização
10,0 ml/
soro caprino com azida
embalagem sódica (0,1%) e
de reagente conservantes
2–8°C
até à data de validade no
rótulo da embalagem
ou
28 dias consecutivos após
a abertura da embalagem
do reagente auxiliar.
2–25°C até à data de validade do
frasco
ou
14 dias de utilização
Consulte Materiais necessários mas não fornecidos
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PRECAUÇÃO: A azida sódica pode reagir com o cobre e o chumbo existentes nas canalizações,
formando azidas metálicas explosivas. Quando eliminar os reagentes, utilize água em
abundância para evitar a acumulação de azidas. Certifique-se primeiro de que a eliminação
destes materiais através da rede de esgotos cumpre a legislação em vigor.
R43
Irritante! Pode causar sensibilidade se em contacto com a pele. Evitar o contacto com a pele. Usar
S24, S37 luvas adequadas. Contém: 5-cloro-2-metil-2H-isotiazol-3-ona e 2-metil-2H-isotiazol-3-ona;
calibradores, controlos
PRECAUÇÃO! POTENCIAIS RISCOS BIOLÓGICOS: Alguns componentes deste produto contêm material de
origem humana. Não existe qualquer método de ensaio conhecido que ofereça a segurança total de que os
derivados do sangue humano não transmitam agentes infecciosos. Todos os produtos fabricados a partir de
material de origem humana devem ser manuseados como potencialmente infecciosos. Manuseie este produto
de acordo com as boas práticas de laboratório e com as precauções universais.6-8
O controlo negativo foi ensaiado através de métodos aprovados pela FDA e considerados não reactivos para o
antigénio de superfície da hepatite B (HBsAg), anticorpo da hepatite C (VHC) e anticorpo do HIV-1/2. O
controlo positivo e os calibradores contêm plasma humano que pode ser reactivo para o anti-HAV IgM. As
unidades foram inactivadas utilizando um procedimento de inactivação BPL-UV. O reagente auxiliar contém
o vírus de hepatite A inactivado com formalina. Todos os produtos fabricados a partir de material de origem
humana devem ser manuseados como potencialmente infecciosos.
Para utilizar no diagnóstico in vitro.
Colocação dos reagentes
Certifique-se de que o sistema contém embalagens suficientes de reagentes primários e
auxiliares. Para obter informações mais detalhadas sobre a preparação do sistema, consulte as
instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online.
PRECAUÇÃO: Agite manualmente todas as embalagens de reagentes primários antes de as colocar
no sistema. Inspeccione visualmente a parte inferior da embalagem do reagente, para se
certificar de que todas as partículas estão dispersas e em suspensão. Para obter informações
detalhadas sobre a preparação dos reagentes, consulte o Apêndice C, Manuseamento de
reagentes.
Coloque as embalagens de reagentes primários ReadyPack nos compartimentos dos reagentes
primários e utilize as setas das embalagens para as colocar correctamente. O sistema mistura
automaticamente as embalagens dos reagentes primários para manter uma suspensão
homogénea dos reagentes. Coloque a embalagem de reagente auxiliar Multi-diluente 2 na
entrada do reagente auxiliar. Para informações detalhadas sobre como colocar os reagentes,
consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online.
PRECAUÇÃO: Os calibradores baixo e alto fornecidos neste kit são combinados com a
embalagem de reagentes primários ReadyPack. Não misture lotes de calibradores com lotes
diferentes de embalagens de reagentes.
PRECAUÇÃO: A embalagem de reagentes auxiliares fornecida neste kit é combinada com o
reagente fluorescente, fase sólida e reagente auxiliar. Não misture lotes de reagentes auxiliares
com lotes diferentes de reagente fluorescente, fase sólida e reagente auxiliar.
NOTA: O pacote de reagente auxiliar contém mais volume que o necessário para realizar
100 testes. Uma vez que o reagente auxiliar corresponde ao reagente fluorescente, fase sólida e
reagente auxiliar no pacote de reagente primário ReadyPack, elimine o reagente auxiliar
quando o pacote de reagente primário ReadyPack for eliminado. Não utilize para além da
estabilidade de utilização.
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Estabilidade de utilização e intervalo de calibração
Estabilidade de utilização
41 dias
Intervalo de calibração
28 dias
Para além disso, o ensaio HAV IgM ADVIA Centaur necessita de uma calibração de dois
pontos:
•
ao alterar os números de lote das embalagens dos reagentes primários
•
quando substituir os componentes do sistema
•
quando os resultados do controlo de qualidade se encontram repetidamente fora dos limites
PRECAUÇÃO:
•
Elimine as embalagens dos reagentes no final do intervalo de estabilidade de utilização.
•
Não utilize os reagentes para além da data de validade.
Calibração da curva principal
O ensaio HAV IgM ADVIA Centaur requer uma calibração da curva principal ao utilizar um
novo número de lote do reagente fluorescente, fase sólida e reagente auxiliar. Para cada novo
lote de reagente fluorescente, fase sólida e reagente auxiliar, utilize o leitor de código de barras
ou o teclado para introduzir os valores da curva principal no sistema. O cartão da curva
principal contém os valores da curva principal. Para informações detalhadas sobre a introdução
dos valores de calibração, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de
ajuda online.
Calibração
Para a calibração do ensaio HAV IgM ADVIA Centaur, utilize os calibradores HAV IgM
ADVIA Centaur fornecidos com cada kit. Os calibradores fornecidos com este kit são
combinados com a embalagem de reagentes primários ReadyPack.
Utilização das etiquetas de código de barras
NOTA: As etiquetas de código de barras são específicas do número do lote. Não utilizar etiquetas
de códigos de barras de um lote de calibradores com qualquer outro lote de calibradores.
Utilize as etiquetas de código de barras dos calibradores HAV IgM ADVIA Centaur para
identificar os tubos das amostras do calibrador baixo e do alto ao executar o ensaio HAV IgM
ADVIA Centaur. Coloque a etiqueta de código de barras no tubo da amostra de forma a que os
caracteres legíveis na parte lateral da etiqueta fiquem na vertical no tubo da amostra.
Efectuar uma calibração
Cada lote de calibradores contém um cartão de valor atribuído ao calibrador para facilitar a
introdução dos valores de calibração no sistema. Introduza os valores utilizando um leitor de
código de barras ou o teclado. Para informações detalhadas sobre a introdução dos valores do
calibrador, consulte as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online.
NOTA: Este procedimento utiliza volumes do calibrador suficientes para medir cada calibrador
em duplicado.
1. Introduza os calibradores na lista de trabalho.
2. Coloque etiquetas de código de barras dos calibradores em dois tubos de amostra: uma para
o baixo e outra para o alto.
NOTA: Cada gota do frasco do calibrador tem aproximadamente 50 µl.
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3. Misture suavemente os calibradores baixo e alto e distribua pelo menos 4 a 5 gotas nos
tubos de amostra adequados.
4. Coloque a tubos de amostra numa rack.
5. Coloque a rack na fila de entrada das amostras.
6. Certifique-se de que todos os reagentes para o ensaio estão colocados.
7. Inicie a fila de entrada, se necessário.
NOTA: Elimine qualquer quantidade de calibrador que permaneça nos tubos das amostras
durante mais de 8 horas. Não encha novamente os tubos das amostras quando o conteúdo se
tiver esgotado; se necessário, distribua calibradores novos.
Controlo de qualidade
Para o controlo de qualidade do ensaio de confirmação HAV IgM ADVIA Centaur, utilize o
material de controlo de qualidade positivo HAV IgM ADVIA Centaur. Consulte o cartão de
valor previsto para os valores esperados sugeridos, específicos para o número de lote dos
controlos positivo e negativo.
Utilização das etiquetas de código de barras
NOTA: As etiquetas de código de barras dos controlos são específicas do número do lote. Não
utilize etiquetas de códigos de barras de um lote de controlos com qualquer outro lote de
controlos.
Utilize as etiquetas de código de barras dos controlos de qualidade HAV IgM ADVIA Centaur
para identificar os tubos das amostras positivas e negativas ao executar o ensaio HAV IgM
ADVIA Centaur. Coloque a etiqueta de código de barras no tubo da amostra de forma a que os
caracteres legíveis na parte lateral da etiqueta fiquem na vertical no tubo da amostra.
Efectuar um controlo de qualidade
Para informações detalhadas sobre a introdução dos valores do controlo de qualidade, consulte
as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online.
Para monitorizar o desempenho do sistema e as tendências do gráfico, como requisito mínimo,
as amostras de controlo de qualidade devem ser ensaiadas em cada turno em que as amostras
foram analisadas. As amostras de controlo de qualidade também devem ser ensaiadas ao
efectuar uma calibração de dois pontos. Manuseie as amostras de controlo de qualidade da
mesma forma que as amostras de doentes.
NOTA: Este procedimento utiliza volumes do controlo suficientes para medir cada controlo em
duplicado.
1. Introduza as amostras de controlo de qualidade na lista de trabalho.
2. Coloque etiquetas de código de barras dos controlos de qualidade em dois tubos de
amostra: uma para o positivo e outra para o negativo.
NOTA: Cada gota do frasco do controlo tem aproximadamente 50 µl.
3. Misture suavemente os materiais de controlo de qualidade e distribua pelo menos
4 a 5 gotas nos tubos de amostra adequados.
4. Coloque os tubos de amostra numa rack.
5. Coloque a rack na fila de entrada das amostras.
6. Certifique-se de que todos os reagentes para o ensaio estão colocados.
7. Inicie a fila de entrada, se necessário.
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NOTA: Elimine quaisquer materiais de controlo da qualidade que permaneçam nos tubos das
amostras durante mais de 8 horas. Não encha novamente os tubos das amostras quando o
conteúdo se tiver esgotado; se necessário, distribua materiais de controlo de qualidade novos.
Efectuar uma acção correctiva
Se os resultados do controlo de qualidade não coincidirem com os valores esperados ou com os
valores estabelecidos pelo laboratório, faça o seguinte:
•
considere os resultados da amostra inválidos e repita os testes dos controlos que não se
encontrem dentro dos limites
•
reveja estas instruções para se certificar de que este ensaio foi efectuado de acordo com os
procedimentos recomendados pela Bayer HealthCare
•
verifique se os materiais se encontram dentro da validade
•
verifique se a manutenção necessária foi efectuada
•
se necessário, contacte a Bayer HealthCare para mais assistência
Volume da amostra
Este ensaio requer 20 µl de amostra para uma única determinação. Este volume não inclui o
volume não utilizável no recipiente da amostra ou o volume adicional necessário ao efectuar
duplicados ou outros testes na mesma amostra. Para informações detalhadas sobre o volume
mínimo necessário, consulte Requisitos do volume da amostra no Manual de referência
ADVIA Centaur.
Procedimento do ensaio
Para informações detalhadas sobre os procedimentos, consulte as instruções de funcionamento
do sistema ou o sistema de ajuda online.
PRECAUÇÃO: Não coloque mais do que um tamanho do recipiente da amostra em cada rack. O
indicador do suporte deve estar colocado na posição correcta para o tamanho do recipiente da
amostra.
1. Prepare o recipiente da amostra para cada amostra e coloque etiquetas de códigos de barras
nos recipientes das amostras, conforme necessário.
2. Coloque cada recipiente da amostra numa rack e certifique-se de que as etiquetas do código
de barras estão visíveis.
3. Coloque as racks na fila de entrada.
4. Certifique-se de que todos os reagentes para o ensaio estão colocados.
5. Inicie a fila de entrada, se necessário.
Notas sobre procedimentos
Eliminação
A eliminação de material perigoso ou biologicamente contaminado deve ser efectuada de
acordo com as práticas da sua instituição. Elimine todos os materiais de uma forma segura e
aceitável e em conformidade com todos os requisitos locais.
Interpretação dos resultados
Para obter informações detalhadas sobre a forma como o sistema calcula os resultados, consulte
as instruções de funcionamento do sistema ou o sistema de ajuda online.
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O sistema regista os resultados de HAV IgM em valores S/CO e como reactivo, equívoco ou
não reactivo.
•
As amostras com um valor calculado inferior a 0,80 S/CO são consideradas não reactivas
aos anticorpos IgM para o vírus de hepatite A.
•
As amostras com um valor calculado superior ou igual ao valor 0,80 S/CO e inferior ao
valor 1,20 S/CO são consideradas equívocas e devem ser repetidas. Recomenda-se que o
teste seja repetido em duplicado e que os resultados sejam comunicados com base nos
resultados da repetição. Se os resultados continuarem equívocos após o teste de repetição,
obtenha uma nova amostra e teste novamente com o ensaio HAV IgM ADVIA Centaur.
•
As amostras com um valor calculado superior ou igual ao valor 1,20 S/CO são consideradas
reactivas aos anticorpos IgM para o vírus da hepatite A.
•
O "cutoff" para o ensaio HAV IgM ADVIA Centaur foi verificado com base nos resultados
da curva característica receptor-operador (ROC)9 e no acordo clínico gerado a partir de
estudos clínicos.
•
Os resultados das amostras são inválidos e têm de ser repetidos se os controlos estiverem
fora dos limites.
Limitações
•
O ensaio HAV IgM ADVIA Centaur está limitado à detecção de anticorpos IgM para o
vírus da hepatite A no soro ou plasma humanos (EDTA, plasma com lítio ou heparina de
sódio).
•
O ensaio HAV IgM ADVIA Centaur pode ser utilizado para determinar se um doente tem
ou teve recentemente uma infecção aguda ou assintomática de hepatite A. Este teste não
calcula o anti-HAV IgG e, por esta razão, não pode ser utilizado para determinar o estado de
imunidade de um doente quanto à hepatite A.
•
O desempenho do ensaio HAV IgM ADVIA Centaur não foi determinado com sangue do
cordão umbilical, amostras sanguíneas de recém-nascidos, amostras sanguíneas de
cadáveres, amostras desactivadas por calor ou outros fluidos corporais para além do soro ou
plasma tais como saliva, urina, líquido amniótico ou fluidos pleurais.
•
O desempenho do ensaio não foi estabelecido para populações de doentes hospedeiros
imunodeprimidos ou imunodeficientes.
•
Não utilize amostras com contaminação microbiana evidente.
•
Os anticorpos heterofílicos no soro humano podem reagir com imunoglobinas interferindo
com os imunoensaios in vitro.10 Os doentes expostos frequentemente a animais ou a
produtos de soro animal podem ter tendência para esta interferência e podem ser
observados valores anómalos. Poderá ser necessária informação adicional para o
diagnóstico.
Resultados esperados
Numa população de 515 amostras de doentes hospitalizados/clínicos, 99,6% (513/515) foram
não reactivas utilizando o ensaio HAV IgM ADVIA Centaur. De 98 amostras reactivas
consensuais ao anti-HAV IgM, 96 foram reactivas e 2 equívocas utilizando o ensaio HAV IgM
ADVIA Centaur.
Como para todos os ensaios de diagnóstico in vitro, cada laboratório deverá determinar o(s)
seu(s) próprio(s) nível(éis) de referência para a avaliação de diagnóstico dos resultados dos
doentes.11
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Manual do Ensaio ADVIA Centaur
Características de desempenho
O desempenho do ensaio HAV IgM ADVIA Centaur foi determinado através do teste de um
total de 719 amostras em dois locais. Os resultados do HAV IgM ADVIA Centaur foram
comparados com os resultados do teste automático EIA anti-HAV IgM disponível no mercado.
As amostras incluíram as seguintes populações: 101 doentes com HAV aguda, 515 doentes
hospitalizados e 103 doentes recuperados do HAV. Foi efectuada outra avaliação com as
amostras discordantes e equívocas utilizando outro ensaio disponível no mercado para o
anti-HAV IgM.
Especificidade clínica
Foi testada uma população de 515 doentes hospitalizados e 103 doentes com HAV recuperados
utilizando o ensaio HAV IgM ADVIA Centaur e um EIA automático anti-HAV IgM disponível
no mercado. Uma amostra inicialmente equívoca e não reactiva ao HAV IgM ADVIA Centaur
utilizando o ensaio comparativo anti-HAV IgM terminou como reactiva após um teste de
método consensual. A especificidade relativa do HAV IgM ADVIA Centaur foi de 100%
(616/616).
Especificidade relativa
Ensaio HAV IgM ADVIA Centaur
Reactivo
Equívoco
Não reactivo
Total
Reactivo
1
0
0
1
Ensaio comparativo HAV IgM
Equívoco
Não reactivo
0
0
0
1
0
616
0
617
Total
1
1
616
618
Especificidade relativa = 100% (616/616), 95% IC (Intervalo de Confiança) = 99,40 – 100%
Sensibilidade clínica
Foi testada uma população de 101 amostras de doentes com HAV agudo utilizando o ensaio
HAV IgM ADVIA Centaur e um EIA anti-HAV IgM disponível no mercado. Noventa e quatro
destas amostras de doentes com HAV foram consideradas reactivas para o anti-HAV IgM
utilizando o ensaio comparativo com a mesma aplicação. Destas amostras reactivas, 93 foram
reactivas e 1 equívoca utilizando o ensaio HAV IgM ADVIA Centaur. Seis amostras foram
consideradas equívocas com o ensaio comparativo e 1 amostra não reactiva utilizando ambos os
ensaios. A sensibilidade relativa inicial foi de 100%.
NOTA: As amostras que apresentaram resultados equívocos não foram incluídas no cálculo da
sensibilidade relativa e da especificidade relativa.
Sensibilidade inicial
Ensaio HAV IgM ADVIA Centaur
Reactivo
Equívoco
Não reactivo
Total
Reactivo
93
1
0
94
Ensaio comparativo anti-HAV IgM
Equívoco
Não reactivo
3
0
0
0
3
1
6
1
Total
96
1
4
101
Sensibilidade clínica relativa
Foi efectuada nova análise de 7 amostras com resultados equívocos (1 ensaio comparativo/
equívoco reactivo ADVIA Centaur, 3 ensaios não reactivos/comparativos equívocos e 3 ensaios
reactivos/comparativos equívocos ADVIA Centaur) utilizando um ensaio adicional disponível
no mercado para o anti-HAV IgM.
aHAVM
05025018 Rev. C, 2004-09
Manual do Ensaio ADVIA Centaur
HAV IgM 11 / 14
A amostra equívoca utilizando o ensaio HAV IgM ADVIA Centaur HAV IgM e reactiva
utilizando um ensaio comparativo tornou-se reactiva segundo o método equívoco/consensual
ADVIA Centaur.
Das 3 amostras que foram não reactivas utilizando o ensaio HAV IgM ADVIA Centaur e
equívocas utilizando o ensaio comparativo, 1 tornou-se equívoco segundo o método não
reactivo/consensual ADVIA Centaur, 1 reactiva segundo o método equívoco/consensual
ADVIA Centaur, 1 manteve-se indeterminada (ensaio não reactivo/comparativo
ADVIA Centaur reactivo segundo o método equívoco/consensual).
Das 3 amostras que foram reactivas utilizando o ensaio HAV IgM ADVIA Centaur e equívocas
utilizando o ensaio comparativo, tornaram-se reactivas segundo o método consensual.
Os resultados consensuais são indicados na seguinte tabela:
Sensibilidade clínica relativa
Ensaio HAV IgM ADVIA Centaur
Reactivo
Equívoco
Não reactivo
Total
Resultados consensuais do ensaio HAV IgM
Reactivo
Equívoco
Não reactivo
96
0
0
2
0
0
0
2
1
98
2
1
Total
96
2
3
101
Sensibilidade relativa = 100% (96/96), 95% IC (Intervalo de confiança) = 96,23 – 100%
Reactividade cruzada
O ensaio HAV IgM ADVIA Centaur foi avaliado para a reactividade cruzada com outros
anticorpos virais e amostras de situação de doença. O estado de não reactividade ao anti-HAV
IgM de cada amostra foi verificado utilizando um ensaio comparativo anti-HAV IgM. Os
seguintes resultados foram obtidos através da utilização do ensaio HAV IgM ADVIA Centaur:
Categoria clínica
Infecção por hepatite B (VHB)
Infecção por hepatite C (VHC)
Doença do fígado não-viral
IgG contra o Vírus Epstein-Barr (EBV)
IgM contra o Vírus Epstein-Barr (EBV)
IgG contra o Vírus Herpes Simplex (HSV)
IgM contra o Vírus Herpes Simplex (HSV)
IgG contra a Sífilis
Sífilis IgM
Vírus da imunodeficiência humana (HIV1/2)
Varicela Zoster (VZV) IgG
Citomegalovírus (CMV) IgG
Citomegalovírus (CMV) IgM
Toxoplasma IgG
Toxoplasma IgM
Rubéola IgG
Hepatite alcoólica
Multiparidade
05025018 Rev. C, 2004-09
Número
testado
2
11
8
10
10
10
10
10
10
10
10
2
3
10
9
10
2
10
Resultados do HAV IgM ADVIA Centaur
Não reactivo
Equívoco
Reactivo
0
0
2
0
0
11
0
0
8
1
0
9
0
0
10
0
0
10
0
0
10
0
0
10
0
0
10
0
0
10
0
0
10
0
0
2
0
0
3
0
0
10
0
0
9
0
0
10
0
0
2
0
0
10
aHAVM
HAV IgM 12 / 14
Manual do Ensaio ADVIA Centaur
Categoria clínica
Frasco da vacina anti-gripe
Artrite reumatóide (RF)
Anticorpo anti-nuclear (ANA)
Lúpus eritematoso sistémico (SLE)
Anticorpos anti-rato humanos (HAMA)
Total de amostras testadas
Amostras de soro que é . . .
hemolisado
lipémico
ictérico
ictérico
proteinémico
proteinémico
Número
testado
6
10
10
10
9
192
Resultados do HAV IgM ADVIA Centaur
Não reactivo
Equívoco
Reactivo
0
0
6
0
0
10
0
0
10
0
0
10
0
0
9
1
0
191
Demonstraram ≤ 10% de alterações dos resultados até . . .
500 mg/dl de hemoglobina
3000 mg/dl de triglicerídeos
60 mg/dl de bilirrubina conjugada
40 mg/dl de bilirrubina não conjugada
12 g/dl de proteína
3,5 g/dl de proteína
O ensaio de interferência foi determinado de acordo com o NCCLS Document EP7-P.12
Painéis de seroconversão
A sensibilidade clínica do ensaio HAV IgM ADVIA Centaur foi definida para que o resultado
reactivo indique uma infecção aguda ou recente pelo HAV. O anticorpo Anti-HAV IgM está
normalmente presente durante 6 meses ou menos após o aparecimento da doença. Isto está
ilustrado pelo seguinte perfil de colheitas em série de um doente com hepatite A.
Perfil de colheitas em série de um doente com hepatite A
Precisão
A precisão foi avaliada de acordo com o protocolo National Committee for Clinical Laboratory
Standards EP5-A.13 Um painel de cinco membros e controlos foram ensaiados em duas
réplicas, duas vezes por dia, durante 20 dias. Foram obtidos os seguintes resultados através da
utilização de 1 lote de reagentes e uma curva de calibração armazenada.
Amostra
Controlo negativo
Controlo positivo
K2 EDTA 1
K2 EDTA 2
K2 EDTA 3
K2 EDTA 4
aHAVM
Média
S/CO
0,13
1,77
0,19
0,67
1,24
1,69
Durante o processamento
SD
CV (%)
0,00
N/A*
0,06
3,7
0,01
N/A
0,03
3,8
0,05
4,2
0,07
4,3
Entre testes
SD
CV (%)
0,01
N/A
0,12
6,5
0,00
N/A
0,03
4,0
0,06
4,5
0,07
4,3
Total
SD
0,01
0,13
0,01
0,04
0,08
0,12
CV (%)
N/A
7,5
N/A
6,2
6,7
6,8
05025018 Rev. C, 2004-09
Manual do Ensaio ADVIA Centaur
Amostra
K2 EDTA 5
Heparina de lítio 1
Heparina de lítio 2
Heparina de lítio 3
Heparina de lítio 4
Heparina de lítio 5
Heparina de sódio 1
Heparina de sódio 2
Heparina de sódio 3
Heparina de sódio 4
Heparina de sódio 5
Soro 1
Soro 2
Soro 3
Soro 4
Soro 5
*
HAV IgM 13 / 14
Média
S/CO
2,31
0,16
0,69
1,32
1,81
2,50
0,29
0,72
1,46
1,98
2,71
0,17
0,69
1,22
1,75
2,52
Durante o processamento
SD
CV (%)
0,10
4,5
0,00
N/A
0,03
4,4
0,08
6,0
0,11
5,9
0,19
7,6
0,01
N/A
0,04
5,6
0,11
7,4
0,14
7,0
0,24
8,7
0,01
N/A
0,03
4,1
0,06
4,9
0,09
4,9
0,12
4,9
Entre testes
SD
CV (%)
0,14
6,1
0,00
N/A
0,02
3,3
0,06
4,6
0,11
5,9
0,10
3,8
0,00
N/A
0,02
2,3
0,05
3,6
0,12
6,3
0,13
4,8
0,01
N/A
0,02
3,4
0,04
3,3
0,07
4,3
0,13
5,2
Total
SD
0,21
0,01
0,04
0,10
0,15
0,21
0,01
0,05
0,14
0,20
0,28
0,01
0,04
0,08
0,12
0,18
CV (%)
9,0
N/A
5,7
7,6
8,3
8,5
N/A
6,5
9,7
9,9
10,3
N/A
6,2
6,4
6,8
7,3
NA = Não aplicável.
Normalização
A padronização do ensaio HAV IgM ADVIA Centaur baseia-se no acordo clínico relativo aos
ensaios anti-HAV IgM disponíveis no mercado. O "cutoff" do ensaio HAV IgM
ADVIA Centaur foi definido para detectar infecção aguda ou recente (normalmente 6 meses ou
menos) por hepatite A. Consulte Características de desempenho. Os valores atribuídos para os
calibradores e controlos são determináveis para esta normalização.
Assistência técnica
Para serviços de atendimento ao cliente, contacte o seu distribuidor ou fornecedor de assistência
técnica.
Referências
1.
Hollinger FB, Ticehurst JR. Hepatitis A virus. In: Fields BN, Knipe DM, Howley PM, Fields virology, 3rd ed.
Philadelphia, PA: Lippincott-Raven Publishers, 1996:735–782.
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6. Centers for Disease Control. Update: Universal precautions for prevention of transmission of human
immunodeficiency virus, hepatitis B virus and other bloodborne pathogens in healthcare settings. MMWR
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biohazards and infectious disease transmitted by blood, body fluids, and tissue; approved guideline. NCCLS
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using Receiver Operator Characteristics (ROC) plots; approved guideline. NCCLS Document GP-10A. Wayne
(PA): NCCLS;1995.
10. Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988;34:27–33.
05025018 Rev. C, 2004-09
aHAVM
HAV IgM 14 / 14
Manual do Ensaio ADVIA Centaur
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in the clinical laboratory; approved guideline. NCCLS Document C28-A. Wayne (PA): NCCLS;1995.
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guideline. NCCLS document EP7-P. Wayne (PA):NCCLS;1986.
13. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Evaluation of precision performance of clinical
chemistry devices-second edition; approved guideline. NCCLS Document EP5-A. Wayne (PA): NCCLS;1995.
ADVIA Centaur e ReadyPack são marcas registadas da Bayer HealthCare LLC.
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