diagnóstico microbiológico em saúde animal

IV 11 - DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO EM SAÚDE ANIMAL
Crédito: (2T - 1P)
Carga Horária: (30T - 30P)
Professor Responsável: Drs. Carlos Alberto da Rocha Rosa, Miliane Moreira Soares de
Souza e Carlos Mazur
OBJETIVOS:
Proporcionar informações atualizadas ao pós-graduando que colaborem para sua formação
profissional no desenvolvimento de rotinas de diagnóstico para os principais grupos de
microorganismos de importância em Medicina Veterinária.
EMENTA:
Amostras clínicas e seu processamento. Indicações, obtenção, transporte e conservação.
Diagnóstico direto. Isolamento, seleção de meios, semeadura, identificação bioquímica e
antigênica. Visualização de microorganismos. Critérios de patogenicidade.
PROGRAMA ANALÍTICO:
Parte I: Introdução
1. Relação entre a Microbiologia e as outras Ciências. Conceito de Microbiologia Celular:
antecedentes, estado atual e perspectivas
2. Natureza das associações simbióticas. Microbiota normal. Comensalismo. Mutualismo.
Colonialismo. Oportunismo. Parasitismo: etapas da patogênese.
3. Adesão dos patógenos às células hospedeiras. Estruturas do hospedeiro e dos
microorganismos implicados na adesão. Conseqüências da adesão sobre os
microorganismos e as células hospedeiras.
4. Invasão da célula hospedeira por microrganismos. Mecanismos de invasão
microbiana:bacteriana, micótica e viral: manipulação do cito-esqueleto da célula
hospedeira. Rotas de invasão. Seleção de um nicho intracelular. Conseqüências da
invasão. Infecção.
5. Interferência dos patógenos microbianos com o ciclo e a morte celular do hospedeiro.
Controle do ciclo celular: inibição e indução da proliferação. Controle da apoptose:
Inibição e indução da morte celular.
Parte II: Laboratório de Microbiologia:
1. Biossegurança. O Laboratório de Microbiologia. Desinfecção. Esterilização
2. Amostras. Coleta, transporte e conservação. Amostras para cultivo de microrganismos
aeróbios ou anaeróbios. Amostras para diagnóstico virológico. Envio de amostras ao
laboratório. Manipulação de amostras no laboratório de Microbiologia.
3. Visualização e cultivo de microrganismos. Microscopia. Métodos de coloração. Métodos
de cultivo. Meios de cultivo. Meios de cultivo para diversos fins. Princípios fisiológicos e
nutricionais. Inoculação de meios de cultivo primário
Parte III: Diagnóstico
1) Bacteriología básica
a) Gênero Staphylococcus spp:
Isolamento em Ágar sangue, Ágar manitol vermelho de fenol, Ágar Baird Parker e Ágar Vogel
Johnson; Identificação presuntiva : Coloração de Gram, teste do hidróxido de potássio a 30% e
prova da catalase. Identificação específica: prova de coagulase (livre e ligada), VP, fermentação
de áçucares, redução de nitratos, produção de urease, produção de Dnase.
b) Gênero Streptococcus spp:
Isolamento e determinação do tipo hemolítico em agar sangue.
Identificação presuntiva : Coloração de Gram, teste do hidróxido de potássio a 30% e prova da
catalase. Isolamento em meios de cultura com azida sódica e cristal violeta.Diferenciação entre
as espécies: hidrólise do hipurato, hidrólise da esculina, fermentação de lactose sorbitol, trealose,
salicina e inulina, redução do leite mais azul de metileno.
c) Gênero Bacillus
Isolamento em Ágar sangue e Ágar Infusão de Cérebro e coração (BHI);
Identificação presuntiva : Coloração de Gram, teste do hidróxido de potássio a 30%
e prova da catalase. Diferenciação entre as espécies: teste de motilidade (meio de
SIM, meio de Edwards), fusão e tipo de crescimento em gelatina, ação das bactérias
sobre o leite, redução do nitrato, fermentação de açúcares.
d) Gênero Clostridium
Isolamento em agar base Columbia + sangue em anaerobiose.
Identificação: API (anaeróbios).
e) Enterobactérias
Isolamento em meios de seletivos e diferenciais : MacConkey, EMB, Salmonella-Shigella, Endo
C.Identificação presuntiva : Coloração de Gram, teste do hidróxido de potássio a 30% e prova da
catalase. Identificaçãobioquímica: Comportamento em ágar tríplice açúcar-ferro (TSI),
motilidade em tubo, produção do Indol, fermentação de açúcares, redução do nitrato, produção
de gelatinase, produção de urease, degradação do citrato e do malonato
2) Micologia
a) Micoses superficiais:
- Infecções cutâneas Gêneros: Microsporum, Trichophyton, Scopulariopsis, Malassezia,
Trichosporum
- Micoses subcutâneas: Gêneros: Sporothrix Alternaria, Cladosporium, Curvularia
b) Micoses oportunistas:
- Leveduras - Gêneros: Candida, Cryptococcus. Prototheca
- Filamentosos - Gêneros: Aspergillus, Pythium, Penicillium,
c) Micoses sistêmicas: Gêneros: Histoplasma, Blastomyces, Coccidioides, Paracoccidioides
d) Micotoxicoses
3) Virologia
a) Introdução à Virologia: histórico, composição morfo-estrutural e funcional do vírus.
b) Ciclo de replicação viral: permissividade celular, especificidade vírus-célula, etapas de
replicação viral.
c) Genética viral: noções básicas em biologia molecular, variação antigênica, mutação evolução
dos vírus.
d) Cultivo de vírus: sistema hospedeiros, noções teóricas em cultura de células.
e) Patogênese nas infecções virais: Fatores e mecanismos de patogenicidade viral, tipos interação
vírus-celulas.
f) Imunidade nas infecções virais: resposta humoral e celular nas infecções virais e seus
mecanismos de ação.
g) Diagnóstico das infecções virais: métodos de diagnóstico virológico.
h) Isolamento viral, imunofluorescência, imunoensaio enzimático, hibridização molecular e PCR
(amplificação enzimática de ácidos nucléicos)
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
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Co., USA, 1984.
2. CARTER, G.R. Diagnostic Procedures in Veterinary Bacteriology and Micology, 3a ed.
Charles C. Thomas Publisher, 1978.
3. FERREIRA, A . W.; Ávila, S. L. M.. Diagnóstico Laboratorial das Principais Doenças
Infecciosas e Auto-Imunes. Ed. Guanabara Koogan, 1996.
4. JAWETZ, E.; Melnick, J. L.; Adelberg, E. A. Microbiologia Médica. 21a ed., Ed.
Guanabara Koogan, 2000.
5. KONEMAN, E. W. ; Allen, S. D. ; Janda, W. M. ; Schreckenberger, P. C. ; Winn, W C .
Diagnóstico Microbiológico: Texto e Atlas Colorido. 5a ed., Ed. MEDSI, 2001.
6. MADIGAN, M. T.; Martinko, J. M. . & Parker, J.. Brock Biology of Microorganisms. 9a
d., Editora Prentice-Hall, 2000.
7. RIPPON, J. W. Medical Mycology - The pathogenic fungi and he pathogenic
Actinomycetes. 3rd Edition - W.B. Saunders Co., Philadelphia, 1988
8. FENNER, F et al. 2nd ed. Veterinary Virology. Academic Press, 1993.
9. CANN, A.J. 2nd ed. Principles of Molecular Virology. Academic Press, 1997.
10. FIELDS, B et al. 3nd ed. Fundamental Virology. Raven Press, 1996.
11. MURPHY, F.A.et al. 3nd ed. Veterinary Virology. Academic Press, 1999.