100807 - Bio Optica

BROWN & BRENN
para bactérias
04 – 100807
IVD Dispositivo médico-diagnóstico in vitro
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Código CND: W01030799
número de testes executáveis .... 100
tempo de realização .................... 8 minutos
validade do produto ..................... 2 anos
temperatura de armazenamento . 15-25°C
equipamento complementar ........ não necessário
Fim previsto
Preparado para o processamento de amostras cito-histológicas a examinar em microscopia óptica.
Aplicação
Método para a diferenciação das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas em secções histológicas e
esfregaços.
Princípio
A coloração de Gram é o mais importante método de coloração diferencial para a evidenciação de
espécies bacterianas. O método caracteriza-se pela utilização de 2 corantes em sucessão: violeta cristal
e fucsina.
Inicialmente, o violeta cristal é feito precipitar através de uma oxidação com uma solução iodo-iodada. O
complexo que daí deriva fixa-se na parede celular bacteriana com ligações de natureza e intensidade
diversas. A solução diferenciante elimina o complexo violeta cristal - iodo da cápsula de algumas
bactérias, mas não actua sobre outras, que permanecem coradas e se definem como gram-positivas. As
bactérias descoradas são, depois, evidenciadas com um corante de contraste vermelho e definem-se
como Gram-negativas. Atribui-se a propriedade das bactérias Gram-positivas de reterem o complexo
corante - iodo à ligação que se forma entre o complexo e uma molécula apenas presente nos Grampositivos: o magnésio ribonucleolado.
Método
1)
2)
3)
4)
5)
6)
7)
8)
9)
10)
Resultados
Bactérias Gram-positivas...................................................................................................................... azul
Bactérias Gram-negativas ............................................................................................................ vermelho
Actinomicetos (Nocardia)...................................................................................................................... azul
Núcleos ......................................................................................................................................... vermelho
Outros elementos tecidulares ......................................................................................................... amarelo
Reagentes
A)
B)
C)
D)
E)
F)
G)
Desparafine e hidrate a secção com água destilada.
Deite na secção 8 gotas do reagente A e 2 gotas do reagente B: deixe actuar durante 1 minuto.
Lave em água destilada.
Deite na secção 10 gotas do reagente C: deixe actuar durante 3 minutos
Lave em água destilada e seque a lâmina com papel de filtro.
Deite na secção 10 gotas do reagente D: deixe actuar durante 1 minuto.
Deixe escorrer sem lavar e deite na secção 10 gotas do reagente E: deixe actuar durante 1 minuto
Lave em água destilada e seque a lâmina com papel de filtro.
Deite na secção 10 gotas do reagente F: deixe actuar durante 1 minuto.
Deixe escorrer sem lavar e deite na secção 10 gotas do reagente G: deixe actuar durante 30
segundos.
11) Xileno e bálsamo.
Solução de violeta cristal ........................................................................................................... 30 ml
Solução de bicarbonato de sódio ............................................................................................... 30 ml
Solução iodo-iodada seg. Gram ................................................................................................. 50 ml
Etanol - acetona.......................................................................................................................... 30 ml
Solução de fucsina básica ......................................................................................................... 30 ml
Solução de ácido pícrico............................................................................................................. 30 ml
Solução de acetona - limoneno ................................................................................................ 100 ml
Empresa fabricante: Bio-Optica Milano s.p.a.
Bio Optica Milano s.p.a.
via San Faustino 58 • I - 20134 Milano
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Advertências e
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primeiros socorros e em caso de derrame acidental. Não utilize caso a embalagem primária esteja
danificada.
Conservação
Conserve o preparado à temperatura ambiente. Mantenha as embalagens devidamente fechadas.
Estabilidade
Após a primeira abertura, o reagente deve considerar-se válido até à data de validade indicada, desde
que seja correctamente conservado.
Eliminação
Resíduo perigoso; entregue-o a empresas especializadas e autorizadas, segundo a legislação vigente.
Bibliografia
•
Bartholomew JW. Variable influence results and the precise definition of steps in Gram staining as a
means of standardizing the results obtained Stain Technol 1962 37: 139-155.
Data de publicação: Junho 2013
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