GRAM para bactérias 04 – 100802

GRAM
para bactérias
04 – 100802
IVD Dispositivo médico-diagnóstico in vitro
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Código CND: W01030799
número de testes executáveis .... 100
tempo de realização .................... 40 minutos
validade do produto ..................... 2 anos
temperatura de armazenamento . 15-25°C
equipamento complementar ........ 3 tinas verticais para histologia em vidro, funil, filtro, estufa
Fim previsto
Preparado para o processamento de amostras cito-histológicas a examinar em microscopia óptica.
Aplicação
Método para a diferenciação das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas em secções histológicas,
esfregaços e aposições de tecido.
Princípio
A coloração de Gram é o mais importante método de coloração diferencial para a evidenciação de
espécies bacterianas. O método caracteriza-se pela utilização de 2 corantes em sucessão: violeta cristal
e floxina.
Inicialmente, o violeta cristal é feito precipitar através de uma oxidação com uma solução iodo-iodada. O
complexo que daí deriva fixa-se na parede celular bacteriana com ligações de natureza e intensidade
diversas. A solução diferenciante elimina o complexo violeta cristal - iodo da cápsula de algumas
bactérias, mas não actua sobre outras, que permanecem coradas e se definem como gram-positivas. As
bactérias descoradas são, depois, evidenciadas com um corante de contraste vermelho e definem-se
como Gram-negativas. Atribui-se a propriedade das bactérias Gram-positivas de reterem o complexo
corante - iodo à ligação que se forma entre o complexo e uma molécula apenas presente nos Grampositivos: o magnésio ribonucleolado.
Método
1)
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9)
Desparafine e hidrate a secção com água destilada.
Deite o conteúdo do frasco A numa tina vertical para histologia, introduza a lâmina e incube a 5658°C durante 15 minutos; recupere a solução no frasco A filtrando-a através de papel de filtro.
Lave em água destilada.
Deite na secção 10 gotas do reagente B: deixe actuar durante 3 minutos.
Deixe escorrer a lâmina e, sem a lavar, deite 10 gotas da solução C: deixe actuar durante 3 minutos.
Lave em água destilada e seque a lâmina primeiro com papel de filtro e, depois, ao ar durante 10
minutos.
Deite o conteúdo do frasco D numa tina vertical para histologia: agite a lâmina durante 1 minuto;
recupere a solução no frasco D filtrando-a através de papel de filtro.
Repita a operação do ponto 7 com o reagente E.
Xileno e bálsamo.
Resultados
Bactérias Gram-positivas...................................................................................................................... azul
Bactérias Gram-negativas ............................................................................................................ vermelho
Núcleos ......................................................................................................................................... vermelho
Reagentes
A)
B)
C)
D)
E)
Solução de floxina B ................................................................................................................. 100 ml
Solução de violeta cristal ............................................................................................................ 30 ml
Solução iodo-iodada segundo Gram .......................................................................................... 30 ml
Acetona - limoneno .................................................................................................................. 200 ml
Acetona - limoneno................................................................................................................... 200 ml
Empresa fabricante: Bio-Optica Milano s.p.a.
Bio Optica Milano s.p.a.
via San Faustino 58 • I - 20134 Milano
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Advertências e
precauções
O produto destina-se a ser utilizado por pessoal técnico especializado.
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primeiros socorros e em caso de derrame acidental. Não utilize caso a embalagem primária esteja
danificada.
Conservação
Conserve o preparado à temperatura ambiente. Mantenha as embalagens devidamente fechadas.
Estabilidade
Após a primeira abertura, o reagente deve considerar-se válido até à data de validade indicada, desde
que seja correctamente conservado.
Eliminação
Resíduo perigoso; entregue-o a empresas especializadas e autorizadas, segundo a legislação vigente.
Bibliografia
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Bartholomew JW. Variable influence results and the precise definition of steps in Gram staining as a
means of standardizing the results obtained Stain Technol 1962 37: 139-155.
Gram C. Ueber die isolierte Farbung der Schizomyceten in Schnitt und Trpckenpraparaten, Vorschr
der Med 1946; 2: 185-189; 133:391-406.
Data de publicação: Junho 2013
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