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Imunofluorescência
Fluorocromo
Sensibilidade
Relativa
400
500
600
Vermelho
Laranja
Amarelo
Verde
Ultra
Violeta
Azul
Violeta
Luz Visível
Infra
Vermelho
700
Comprimento de Onda (nm)
Sonda
Isotiocianato de Fluoresceína (FITC)
Rodamina
Texas Red
Absorção nm (excitação)
Fluorescência nm (emissão)
495
550
589
519
573
615
Microscópio de Imunofluorescência
Filtro barreira
519 nm
495 nm
Filtros de excitação
Lâmpada de mercúrio ou halogênio
(alta intensidade)
Microscópio de Imunofluorescência
Imunofluorescência
 Imunofluorescência Direta (IFD)
 Imunofluorescência Indireta (IFI)
Imunofluorescência Direta (IFD)
Lavagem
IFD
Imunofluorescência Indireta (IFI)
Lavagem
Lavagem
Imunofluorescência Indireta (IFI)
CLASS OF ANTIBODY
PROPERTIES
IgM
IgD
IgG
IgA
IgE
Heavy chains
Light chains
Number of four-chain units
Percentage of total Ig in blood
m
k or l
5
10
d
k or l
1
<1
g
k or l
1
75
a
k or l
1 or 2
15
e
k or l
1
<1
Activates complement
Crosses placenta
Binds to macrophages and
neutrophils
Binds to mast cells and
basophils
++++
-
-
++
+
+
-
-
-
-
-
-
+
Nuclear Homogêneo
Anti-DNA e anti-Histona
Marcador para Lupus Eritrematoso Sistêmico
Nuclear Pontilhado Grosso
Anti-Sm e anti-RNP
Marcadores para Lupus Eritrematoso Sistêmico
Nucleolar homogêneo
Anticorpo anti-To/Th.
75% - Esclerodermia Sistêmica
Centromérico
Anticorpo anticentrômero
(proteínas CENP-A, CENP-B e CENP-C).
70% Esclerodermia
Variante CREST
Prognóstico Favorável
Centromérico
Nuclear Pontilhado Fino Denso
Anti-P75: correlação clínica ainda não estabelecida.
Exemplo de laudo de FAN
Associação FAN x clínica
Padrões de FAN mais comuns
Pesquisa de anticorpo anti-DNA
Teste reagente: IFI em Crithidia luciliae
Pesquisa de ANCA
Anti-proteinase 3
Anti-MPO
Diagnóstico
IFD x IFI
 IFD
 IFI

Mais Específico

Mais Sensível

Antígeno

Anticorpo e Antígeno

Menor Intensidade

Maior Intensidade

Conjugado

Conjugado

Determina classes e sub
classes de anticorpos
com conjugados
específicos
Vantagens
 Teste de referência em muitas doenças
 Sensibilidade = 96% a 100%
 Especificidade = 99,8% a 100%
 Reprodutível
 Padronização e Execução simples
 Utilização de cepas de referência
 Disponíveis comercialmente
Desvantagens
 Autofluorescência
 Fotodestruição
 Necessidade de microscópio de
fluorescência
 Subjetividade da leitura
Diagnóstico Laboratorial
 Chlamydia trachomatis
 Citomegalovírus
 Vírus do Herpes
 Treponema pallidum
 Trypanosoma cruzi
 Toxoplasma gondii

Vírus da Rubéola
 Plasmodium falciparum
 Auto anticorpos contra diferentes estruturas
celulares
Pesquisa
Ilhota de Langerhans
Ducto
Cél. Delta
Hemácias
Acino
Pancreático
Ilhotas
Cél.
Langerhans Beta
Cel.
Alfa
Pâncreas
Insulina – Verde
Núcleo – Azul
Nestina – Vermelho
Co-localização - Amarelo
Novo padrão citoplasmático de IFI, não observado em
nenhuma amostra controle e em 15,4% (16/104) dos
pacientes portadores de HCV. (P=0,002)