201501_UNISA_Biomedicina_Meios de cultivo para bactérias e
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Meios de cultivo utilizados na Bacteriologia Clínica Introdução à Microbiologia Clínica O exame microbiológico deve responder às seguintes perguntas: Exame bacterioscópico - Há bactérias presentes na amostra? Cultura - Qual? - Quais medicamentos devem ser utilizados? Provas de identificação Teste de sensibilidade aos antimicrobianos Cultura de bactérias – Aspectos Gerais Coleta da amostra: Uso de antibióticos? Evitar contaminação da amostra Quantidade de amostra suficiente Transporte da amostra Qual o sítio anatômico da coleta Correta identificação da amostra Em que momento deve ser feita a coleta? Cultura de bactérias – Aspectos Gerais Semeadura: Quais meios de cultura semear? Como semear? Incubação: Qual temperatura? Quanto tempo? Qual concentração de CO2? Semeadura - Técnicas Técnicas de isolamento de microrganismos: técnica de esgotamento técnica de semeadura em superfície método de pour-plate Semeadura por esgotamento Semeadura em superfície Semeadura – Qual meio utilizar? MacConkey: seletivo e diferencial (lactose) para Gram negativos Sangue: enriquecimento e diferencial (hemólise) Tioglicolato: enriquecimento, cultura de anaeróbios estritos SS: seletivo e diferencial (lactose). Thayer-Martin: enriquecimento e seletivo Meios de cultura e amostras biológicas Ferida cirúrgica: AS, MC, LJ e SAB Coprocultura: MC e SS Escarro: AS e MC Escarro-tuberculose: LJ Secreção nasal: AS e MC Ponta de cateter: AS Urina: CLED e MC AS: agar sangue LJ: Lowenstein-Jensen MC: MacConkey SAB: Sabouraud Condições de crescimento Oxigênio Aeróbicos estritos Anaeróbicos facultativos Anaeróbios obrigatórios Anaeróbios aerotolerantes Microaerófilas Incubação Estufa Jarra de anaerobiose Meios de Cultura Aspectos gerais Cultivar e laboratório manter microrganismos viáveis Substâncias essenciais para o crescimento das bactérias Crescimento seletivo Demonstração de propriedades biológicas Isolamento no Meio de Cultura Principais produtos e compostos utilizados Hidrolizados de proteínas Carboidratos Tampões Enriquecimento Inibidores Meio de Cultura Principais produtos e compostos utilizados Indicadores de pH Outros indicadores Ágar Substratos para a ação de enzimas Classificação Formulação Sólidos (ágar) 1 a 2,0 % Semi-sólidos (ágar) 0,05 a 0,3 % Caldos Ativação das culturas, repiques de microorganismos, provas bioquímicas Finalidade Meios de pré-enriquecimento Microrganismos injuriados Ex: Água peptonada,, Caldo lactosado Caldo lactosado Caldo lactosado Finalidade Meios de Enriquecimento Ideal para quando há poucos micro-organismos, crescimento lento, exigentes e fastidiosos. Ex: infusão de cérebro e coração (BHI), Caldo Tioglicolato Caldo tioglicolato Finalidade Diferenciais Identifica micro-organismos parecidos Ex: Ágar Sangue, Ágar MacConkey Ágar MacConkey Finalidade Seletivos Contém substâncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros Ex: Ágar Salmonella-Shigella (SS) - Isolamento Salmonella e Shigella sp Ágar Salmonella-Shigella (SS) Finalidade Identificação Realização de provas bioquímicas e verificação de funções fisiológicas de organismos Ex: Ágar Citrato, Ágar Bile-Esculina Ágar bile-esculina Finalidade Identificação Avaliam determinadas atividades metabólicas permitindo caracterização e identificação Ex: Uréia, Ágar TSI (Tríplice açucar ferro) Ágar TSI (tríplice açúcar ferro) Meios de Transporte e Conservação Meio Stuart Cary Blair Salina Tamponada Ágar Nutriente Meios de Transporte e Conservação Meio Stuart Impede a multiplicação do microrganismos e garante apenas sua sobrevivência. Cor original do meio: Branco opalescente. Não há evidência de crescimento bacteriano. Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Chocolate Meio rico e não seletivo Microrganismos exigentes Base - sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta (hemina e hematina) Haemophilus sp., Neisseria sp., Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Chocolate Haemophilus sp. Neisseria sp. Meios para Crescimento e Isolamento Thayer Martin Ágar Chocolate com Vancomicina (G+), Colistina (G-), Nistatina (f) e Trimetoprim Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Sangue Meio rico e não seletivo Gram negativo e Gram positivo, fungos filamentosos (bolores) e leveduras Eritrócitos íntegros (padrões de hemólise nítidos) Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Sangue S. aureus - colônias -hemolíticas Meios para Crescimento e Isolamento Ágar MacConkey Isolamento de bacilos Gram negativos (seletivo) Inibe bactérias Gram positivas Utilização de lactose (diferencial) Lactose positiva – coloração avermelhada Lactose negativa – coloração inalterada Meios para Crescimento e Isolamento Ágar MacConkey Salmonella. E.coli Meios para Crescimento e Isolamento Ágar MacConkey Klebsiella sp Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Salmonella-Shigella (SS) Inibem microrganismos Gram positivos (sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio) Tiossulfato de sódio e o citrato férrico Colônias com centro negro (H2S) ou colônias incolores: suspeita de Salmonella. Colônias incolores: suspeita de Shigella spp Meios para Crescimento e Isolamento Ágar Salmonella-Shigella (SS) Salmonella e Shigella Meios para Crescimento e Isolamento Ágar CLED – cystine lactose electrolyte deficient Utilizado para semear amostras de urina Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras. Cor original do meio: azul claro. Colônias lactose positiva: cor amarela. Colônias lactose negativa: cor azul. Meios para Crescimento e Isolamento Ágar CLED – cystine lactose electrolyte deficient Meios para Crescimento e Isolamento Löwenstein Jensen Base formada por ovos integrais Isolamento primário de micobactérias. Cor original do meio: verde claro Positivo: Crescimento de colônias amarelas/vermelhas Negativo: ausência de crescimento Meios para Crescimento e Isolamento Löwenstein Jensen Identificação e Classificação Ágar Sangue esverdeado Identificação e Classificação Ágar Sangue S. aureus - colônias -hemolíticas Alpha-hemólise (Streptococcus pneumoniae) Beta-hemólise (Streptococcus pyogenes) Gama-hemólise (Enterococcus faecalis) Provas de Identificação Ágar DNAse Meios para Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos Ágar Mueller Hinton Ágar Sangue Sensibilidade aos Antimicrobianos Ágar Mueller Hinton Kirby e Bauer e pelo CLSI - condições de crescimento das principais bactérias. Avaliação da resistência aos antimicrobianos - métodos de difusão em disco e E-test para enterobactérias, não fermentadores, Staphylococcus, Enterococcus sp. Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos Ágar Mueller Hinton Sensível a novobiocina S. Saprophyticus Resistente S. epidermidis Teste de Sensibilidade aos Antimicrobianos Ágar Mueller Hinton Resistente e sensível à oxacilina MRSA Resumo dos tipos de meio e quais microorganismos costumam crescer Meios de cultura para fungos Ágar Sabouraud (meio sólido) BHI (meio líquido) Semeadura: em superfície Incubação: temperatura de 25 a 30 graus por até 4 semanas. Agar Sabouraud
