determinação de metodologias de concentração viral para o estudo

I CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA AGROPECUÁRIA,
AGRÍCOLA E AMBIENTAL (CBMAAA)
09 a 12 de maio de 2016 - Centro de Convenções da UNESP,
Câmpus de Jaboticabal, SP.
DETERMINAÇÃO
DE
CONCENTRAÇÃO
VIRAL
METODOLOGIAS
PARA
O
ESTUDO
DE
DE
DIVERSIDADE EM AMOSTRAS DE SOLO
DETERMINATION OF VIRAL CONCENTRATION METHODS
FOR DIVERSITY STUDY FROM SOIL SAMPLES
Aneli Eiko Abe(1)
Roberto Sousa Dias(2)
Sérgio Oliveira de Paula(3)
Cynthia Canêdo da Silva(4)
Resumo
O solo representa a maior fonte de microrganismos em todo planeta, que podem ser estudados
por métodos dependentes e independentes de cultivo. Os bacteriófagos fazem parte do grupo
de entidades biológicas mais abundante no planeta, e a presença destes no solo influencia na
atividade, ecologia das populações de bactérias hospedeiras e na evolução. Através da
transferência horizontal de genes via transdução, o vírus introduz material genético novo em
uma bactéria, que foi adquirido da bactéria doadora. Visto que a diversidade viral no solo
ainda é pouco estudada, e que não existe um consenso de qual metodologia de concentração
viral abrange melhor a diversidade de vírus no solo, o presente trabalho visa testar diferentes
métodos de concentração viral para aplicação em estudos de diversidade com amostras de
solo. Foram utilizadas três metodologias: i) membrana com carga negativa (HA), ii)
polietilenoglicol 8000 (PEG) e iii) ultracentrifugação. As amostras de solo testadas foram
coletadas em áreas da Universidade Federal de Viçosa (MG), sendo estas de áreas de cultivo
agrícola. Após concentração viral das amostra de solo, as mesmas foram submetidas à
amplificação por RAPD e microscopia eletrônica. Os resultados do RAPD revelaram que o
método de concentração com membrana de carga negativa apresentou maior diversidade de
bandas, quando comparado com as outras técnicas utilizadas. O estudo de diversidade
morfológica das técnicas de membrana HA e PEG por microscopia eletrônica de transmissão
corroborou com os resultados anteriores, pois também mostrou que o método de membrana
com carga negativa apresentou tanto maior diversidade viral, quanto melhor visualização das
partículas virais em comparação com a técnica com PEG.
Palavras-chave: Solo. Bacteriófagos. Concentração viral. Diversidade viral.
1
Mestrando em Microbiologia Agrícola pela Universidade Federal de Viçosa. [email protected]
Doutor em Biologia Celular e Estrutural pela Universidade Federal de Viçosa. [email protected]
3
Professor Doutor em Imunologia Básica e Aplicada - Bioagentes Patogênicos pela Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto - USP.
Docente da Universidade Federal de Viçosa. [email protected]
4
Professora Doutora em Genética e Biologia Molecular pela Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Docente da Universidade
Federal de Viçosa. [email protected]
2
Ciência & Tecnologia: FATEC-JB, Jaboticabal (SP), v. 8, Número Especial, 2016. (ISSN 2178-9436).