Laudo LAPEMI/UFSM de aglutinação YES-MOS

UFSM - UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA E
PARASITOLOGIA
LAPEMI - LABORATÓRIO DE PESQUISAS MICOLÓGICAS
CEP 97105-900 SANTA MARIA – RS
FONE/FAX: 0**55 3220 8906
e-mail: [email protected]
LAUDO: 06/13 Capacidade Aglutinante de MOS
ENTRADA: 24/05/2013
SAÍDA: 28/06/2013
MATERIAL: YES-MOS
ANÁLISES SOLICITADAS: Análise de aglutinação de bactérias entéricas - MOS
REQUISITANTE: Juliana N. Castro
EMPRESA: YES SINERGY DO BRASIL AGROINDUSTRIAL LTDA
ENDEREÇO: Av. Anunciatto Sonni, 3413
CEP: 86900-000 Jandaia do Sul - PR
CNPJ/CPF: 10.505.913/0002-02
Metodologia Utilizada:
1. Foram utilizadas espécies de Salmonella e Escherichia coli, isolados de carnes, intestino e rações
de suínos e aves.
2. As bactérias foram cultivadas em caldo Luria para estimular a produção de fímbrias. Neste meio a
incubação foi realizada overnight a 37º C, sob condições estáticas. Após esta incubação o crescimento
bacteriano foi repicado para o ágar Luria, para isolamento das colônias.
3. Preparação das células bacterianas para os testes:
1
Após o cultivo foram preparadas 2 suspensões bacterianas com turvação equivalente a
OD600 = 2,0 em a) PBS e b) Manose (0,05M). Imediatamente antes do teste, volumes de 100 ml de cada
suspensão foram agitados em shaker durante 60 minutos à temperatura de 25º C.
4. Suspensão de MOS foram preparadas em PBS na concentração de 0,1%.
5. Realização do Teste.
Em uma lâmina de microscopia, dividida em 2 áreas, foram dispensados 8 l da suspensão de MOS em
PBS estéril, em ambas as áreas. A seguir, acrescentou-se 8 l da suspensão bacteriana em PBS a uma
das áreas; na outra área, foi acrescentado 8 l da mesma suspensão bacteriana em manose. Cobriu-se as
suspensões com lamínulas e examinaram-se em microscópio com objetivas de 10X e 25X.
As bactérias que possuem fímbrias poderão aglutinar o MOS em PBS.
6. Para avaliar as aglutinações das bactérias pelas amostras de MOS, foi utilizada a prática visual com
o auxílio de microscópio de contraste de fase. Usamos a convenção abaixo para classificar as
aglutinações:
- Ausência de aglutinação;
+ Aglutinação pequena – em torno de 10% dos campos do microscópio;
++ Aglutinação média – em torno de 50% dos campos do microscópio;
+++ Aglutinação forte - = ou > de 80% dos campos do microscópio.
7. Cálculos:
a)Amostras Aglutinantes (%): Média Percentual relativa a aglutinação frente aos isolados em
no mínimo uma cruz (+). Ex: Das 20 amostras de E.coli testadas frente a uma amostra de MOS, 17
aglutinaram em no mínimo uma (+). Então, 85% dos isolados aglutinaram frente a amostra de MOS em
avaliação.
b)Intensidade da Aglutinação (%): Somatório de aglutinações obtidas por uma determinada
amostra de MOS frente várias amostras de E. coli ou Salmonella. Ex.: Das 20 cepas de E.coli testadas
frente a uma amostra de MOS, duas aglutinaram em 3 cruzes (+++), 5 em duas cruzes (++) , outras 10
cepas de E. Coli aglutinaram em uma cruz (+) e as duas restantes cepas não aglutinaram (-). Então,
somando o número de cruzes desta amostra, frente as 20 cepas de E.coli, o resultado é de 29 cruzes
num total possível máximo de 60 cruzes (3 cruzes por cepa x 20 cepas = 60 cruzes). Logo,
percentualmente esta amostra teve uma intensidade de aglutinação de 48,33%.
2
RESULTADOS Salmonella
Bactéria
S. gallinarum 5362/10
S. hadar
S. gafsa 4958/10
S. orion 4959/10
S. anatum 4967/10
S. schwarzengrund 5027/10
S. livingstone 5032/10
S. gallinarum 5220/10
S. gallinarum 5234/10
S. infantis 5262/10
S. kentucky
S. agona
S. gallinarum 5471/10
S. gallinarum 5474/10
S. cerro 5637/10
S. pullorum ATCC 9140
S. enteritidis ATCC 13076
S. ohio
S. heidelberg
S. typhymurium ATCC 14028
YES-MOS
+
++
+
++
+
++
+
+
+
+
++
++
++
+++
++
++
+
+
++
Amostras Aglutinantes (%)
95%
Intensidade da Aglutinação(%)
50%
3
RESULTADOS Escherichia coli
YES-MOS
Bactéria
++
E. coli M4-4251
+
E. coli ATCC 5922
++
E. coli M5-7184
++
E. coli M4-7389
+++
E. coli M5-7384
+++
E. coli M5-10494
+
E. coli 5511
++
E. coli F18-LT
+++
E. coli M4-4246
++
E. coli M4- 4249
+
E. coli M5-10341
++
E. coli M4-6743
+
E. coli 35
+
E. coli M4-8358
+++
E. coli M5-2339
++
E. coli M4-4247
+
E. coli M4-7387
++
E. coli G-1253
+
E. coli M4-4648
++
E. coli M5-2338
Amostras Aglutinantes (%)
100%
Intensidade da Aglutinação(%)
61,66%
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Prof. Dr. Janio Morais Santurio
Responsável Técnico
4