17 Pepsina

PEPSINA
pepsinum
06963
A pepsina em pó é preparada a partir da mucosa gástrica de suínos, bovinos e ovinos. Contém
proteinases gástricas atuantes em meio ácido (pH 1 a 5). Possui uma atividade não inferior a 0,5 Ph.
Eur. U./mg, calculada com referência à substância seca.
DESCRIÇÃO
Características físicas. Pó branco ou ligeiramente amarelado, amorfo ou em pó cristalino,
higroscópico.
Solubilidade. Facilmente solúvel na água, quase insolúvel no álcool etílico, no clorofórmio e no
éter etílico.
IDENTIFICAÇÃO
A. A pepsina em solução deve precipitar com soluções de tanino ou ácido gálico.
B. Aqueça uma solução aquosa e ácida de pepsina a 100 °C: deve tornar-se leitosa e produzir
precipitado flocoso, perdendo todo o poder proteolítico.
ENSAIOS DE PUREZA
Perda por secagem. Não superior a 5,0%, determinado em 0,5 g por secagem a 60 ºC sobre
pentóxido difósforo a uma pressão não superior a 670 Pa por 4 horas.
Resíduo por incineração. No máximo 1%.
Contagem de microrganismos viáveis totais (V.5.1.6). Bactérias aeróbicas viáveis totais: no
máximo 104 UFC/g. Deve estar em conformidade com os ensaios de Escherichia coli e Salmonella.
DOSEAMENTO
A atividade da pepsina em pó é determinada pela comparação da quantidade de peptídeos não
precipitáveis por solução ácida de tricloroacético R e doseada usando o reagente de
fosfomolibdatungstato R no qual são liberados peptídeos por minuto a partir de um substrato de
solução de hemoglobina R, com a quantidade de tais peptídeos liberados pela pepsina em pó SQR a
partir do mesmo substrato na mesma condição.
Evitar a agitação e espuma durante a preparação do teste e soluções referência.
Solução teste: imediatamente antes do uso, preparar a solução do substrato a ser examinado
esperando conter 0,5 Ph. Eur. U./ml em HCl diluído R2, antes do volume de diluição, ajustar para
pH 1,6 ± 0,1 , se necessário usando HCl M.
Solução de referência: preparar uma solução de pepsina SQR, até 15 minutos antes do uso,
contendo 0,5 Ph. Eur. U./ml em HCl diluído R2, antes do volume de diluição, ajustar para pH 1,6
±0,1, se necessário usando HCl M.
Colocar os tubos com solução de ácido tricloroacético R e solução de hemoglobina R em banho
de água a 25 ± 0,1 ºC. Usar três tubos de solução de referência, marcados S1, S2, S3 e três tubos
para os brancos marcados S1b, S2b, S3b. Usar outros três tubos de solução teste marcados T1, T2, T3, e
três tubos para os brancos marcados T1b, T2b, T3b. Deixar os tubos em banho de água a 25 ± 0,1 ºC.
Nos tubos S1, S2, S3 e S1b, S2b, S3b adicionar 1 ml de solução de referência e nos tubos T1, T2, T3 e
T1b, T2b, T3b adicionar 1 ml de solução teste. Deixar em banho equilibrado a 25 ± 0,1 ºC.
Adicionar 10 ml de solução de ácido tricloroacético R nos tubos S1b, S2b, S3b e T1b, T2b, T3b.
Adicionar 5 ml de solução de hemoglobina R sucessivamente nos tubos S1, S2, S3 e T1, T2, T3
com um intervalo de 30 segundos para cada. Misture as soluções suavemente.
Adicionar 5 ml de solução de hemoglobina R nos tubos S1b, S2b, S3b e T1b, T2b, T3b e misturar.
Exatamente 10 minutos após adicionar a solução de hemoglobina R e nos intervalos de 30
segundos, parar a reação com a adição de 10 ml de solução de ácido tricloroacético R nos tubos S1,
S2, S3, T1, T2, e T3 (a utilização de pipeta com escoamento rápido é recomendado) e misturar.
Filtrar o conteúdo de cada tubo (amostras e brancos) duas vezes através do mesmo papel de filtro.
O papel de filtro deve ser previamente lavado com uma solução de ácido tricloroacético 50 g/l, em
seguida com água e seco. Descartar os primeiros 5 ml do filtrado. Colocar 3 ml de cada filtrado,
separadamente, em tubo contendo 20 ml de água, misturar.
Um papel de filtro adequado cumpre o seguinte teste: filtrar 5 ml de solução de ácido
tricloroacético 50g/l através de um disco de 7 cm papel filtro branco: a absorbância do filtrado,
medida em 275 nm usando solução de ácido tricloroacético não filtrado como branco, é inferior a
0,04.
Adicionar a cada tubo 1 ml de solução de hidróxido sódio R e 1 ml de reagente de
fosfomolibdatungstato R, iniciando com o branco e, em seguida, as amostras de cada conjunto, em
uma ordem conhecida.
Após 15 minutos medir as absorbâncias das soluções S1, S2, S3 e T1, T2 e T3 em 540 nm usando as
soluções de branco correspondentes como líquido de compensação. Calcule a média da absorbância
das soluções S1, S2, S3 e para as soluções T1, T2 e T3.
CLASSE TERAPÊUTICA
Enzima proteolítica.
EMBALAGEM E ARMAZENAMENTO
Em recipiente bem fechado, protegido da luz e em refrigerador.
SOLUÇÕES REAGENTES
Solução de ácido tricloroacético R: dissolver 40g de ácido tricloroacético em 1000 ml de água.
Solução de hemoglobina R: agitar 2 g de hemoglobina com 75 ml de ácido clorídrico 0,03 M.
Ajustar o pH da solução para 1,5 – 1,7 com ácido clorídrico M e diluir para 100 ml com ácido
clorídrico 0,03 M. Adicionar 25 mg de tiomersal.
Solução de hidróxido sódio R: hidróxido de sódio a 20% (p/V), 20 g em 100 ml.
Reagente de fosfomolibdatungstato R: dissolver 100 g de tungstato de sódio e 25 g de molibdato
de sódio em 700 ml de água, adicionar 100 ml de ácido clorídrico e 50 ml de ácido fosfórico, e
aquecer a mistura em condensador de refluxo por 10 horas. Adicionar 150 g de sulfato de lítio, 50
ml de água e 0,2 ml de bromo. Ferver para remover o excesso de bromo por 15 minutos. Resfriar e
diluir para 100 ml. Filtrar.
Ácido clorídrico diluído R2: 30 ml de HCl M em 1000 ml água, ajustar pH 1,5 a 1,7.