Efeito da Pressão de Seleção em Calos Embriogênicos

Efe ito da Pre ssão de Sele ção e m Calos Embriogênicos Bombarde ados de
Brachiaria brizantha (A. Rich.) Stapf cv. Marandu (Poaceae)
LACERDA, Ana Luiza Machado (1,2); CARNEIRO, Vera Tavares de Campos(2); CABRAL, Glaucia
Barbosa (2). - 1-Universidade de Brasília; 2-Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia;
Brachiaria é um gênero largamente utilizado no Brasil como forrageira tropical, cultivada em uma
área de aproximadamente 40 milhões de hectares. Brachiaria, assim como outras gramíneas,
apresenta plantas de modo de reprodução sexual e apomítico. A apomixia é um modo de
reprodução assexual, onde ocorre clonagem natural através de sementes, acarretando uma baixa
variabilidade genética. As restrições do melhoramento genético de Brachiaria são principalmente
devidas à natureza apomítica e poliplóide das cultivares, que não permitem cruzamento com as
plantas sexuais, que são diplóides. Uma grande demanda do programa de melhoramento genético
desta forrageira é a introdução de genes de interesse pela engenharia genética. O objetivo deste
trabalho é a otimização da técnica de transformação genética de Brachiaria usando calos
embriogênicos, tratamento osmótico anterior ao bombardeamento e a seleção dos transformantes.
Sementes maduras de B. brizantha apomítica cv. Marandu, BRA 000591, foram cultivadas em meio
de indução de embriogênese somática (MSCL-indução). Calos embriogênicos com 15 dias (5mm)
foram mantidos em meio MSCL-indução com sacarose 12% (tratamento osmótico) por 16 horas
antes do bombardeamento. O plasmídio utilizado foi o pAHUG que contém o promotor do gene de
actina I de arroz dirigindo a expressão do gene de seleção hptII e o promotor de ubiquitina I de
milho dirigindo o gene gus. Dois dias após o bombardeamento, alguns calos foram separados para
ensaio histoquímico, onde foi observada a expressão do gene repórter gus. Os demais transferidos
para meio MSCL-indução contendo higromicina 15mg/L ou 30mg/L, onde permaneceram por mais
15 dias antes de serem transferidos para o meio MSCL-regeneração nas mesmas concentrações de
higromicina. No controle de transformação os explantes não sobreviveram a presença de
higromicina. Brotos resistentes a 15 mg/L de higromicina encontram-se em processo de elongação.
(EMBRAPA, CNPq e CBAB-MCT)
Link p/ este Trabalho na internet: http://www.57cnbot.com.br/trabalhos.asp?COD=1912
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