XXV CONGRESSO BRASILEIRO DE ZOOTECNIA ZOOTEC 2015

XXV CONGRESSO BRASILEIRO DE ZOOTECNIA
ZOOTEC 2015
Dimensões Tecnológicas e Sociais da Zootecnia
Fortaleza – CE, 27 a 29 de maio de 2015
Efeito de fontes de óleo no desenvolvimento embrionário e taxa de eclosão de zebrafish1
The effect of dietary oil sources on embryogenesis and hatchability of zebrafish
Táfanie Valácio Fontes2, Danielle Cristina Pereira Marçal2, Felipe Guedes de Araújo2, Daniel Okamura2,
Renan Rosa Paulino2, Diego Vicente da Costa2, Shirly Paola Vargas Licona3, Saulo Almeida da Silva4
Priscila Vieira e Rosa2, *
1
Parte do doutorado do terceiro autor
Departamento de Zootecnia, Universidade Federal de Lavras, P.O Box 3.037, 37200-000 Lavras, Minas
Gerais, Brazil. E-mail: [email protected]
3
Universidade de Córdoba, P.O Box 230002, Montería, Colômbia. E-mail: [email protected]
4
Universidade Estadual de Mato Grosso do Sul- Unidade Universitária de Aquidauana, C. P 25, 79200-000,
Aquidauana, Mato Grosso do Sul, Brasil
2
Resumo: Sabe-se que os ácidos graxos das famílias ômega 3 e ômega 6 são relacionados ao sucesso
reprodutivo de diferentes espécies de peixes. No entanto, poucas são as informações existentes sobre como os
ácidos graxos podem influenciar os parâmetros reprodutivos de zebrafish. Assim, o presente trabalho teve por
objetivo avaliar o efeito de diferentes fontes lipídicas sobre o desenvolvimento embrionário e taxa de eclosão
em zebrafish. Os animais foram alimentados com dietas isoproteícas e isoenergéticas contendo quatro
diferentes fontes de óleo (oliva, linhaça, peixe e milho) durante cinco meses. Após três meses de
alimentação, iniciou-se a reprodução dos animais. Utilizou-se uma proporção de 2 fêmeas para 3 machos. Os
ovos fertilizados foram recolhidos e transferidos para incubadoras experimentais. Trinta embriões foram
coletados de cada incubadora e o estágio de desenvolvimento foi registrado. Os ovos remanescentes foram
usados para avaliar a porcentagem de taxa de eclosão. Observou-se que as dietas com óleo de milho
influenciou positivamente o desenvolvimento embrionário inicial (8-9 hpf). No entanto, o maior
desenvolvimento embrionário não resultou em maior taxa de eclosão. A suplementação de óleo de peixe
proporcionou uma maior taxa de eclosão das larvas de zebrafish.
Palavras–chave: desenvolvimento embrionário, lipídeos, peixe, reprodução
Abstract: It is known that omega-3 and omega-6 fatty acids are related to reproductive success of different
fish species. However, there is little information available on how the fatty acids may influence the
reproductive parameters of zebrafish. Thus, this study aimed to evaluate the effect of different lipid sources
on embryonic development and hatchability of zebrafish. Fish were fed isonitrogenous and isocaloric diets
with four different oil sources (olive, linseed, fish and corn) for five months. After three months of feeding
trial fish reproduction started. A 2:3 male/female ratio was used. The fertilized eggs were collected and
transferred to experimental incubators. Thirty embryos were collected from each incubator and development
stage was recorded. The remaining eggs were used to assess the hatchability percentage. Corn oil diets
positively influenced early embryonic development (8-9 hpf). However, the higher embryo development did
not result in higher eclosion rate. The supplementation of fish oil resulted higher eclosion rate of zebrafish
larvae.
Keywords: embryonic development, fish, lipids, reproduction
Introdução
O papel dos lipídeos sob a reprodução vem sendo estudado em várias espécies, mas existem poucas
informações sobre como estes nutrientes influenciam a reprodução do peixe zebrafish. Sabe-se que os ácidos
graxos, em especial os altamente insaturados (HUFA), são depositados nas gônadas de peixe em estágio
reprodutivo, um indicativo da importância desses nutrientes no processo reprodutivo. Isso pode ser
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comprovado por estudos que apontam um menor desempenho reprodutivo em animais que receberam uma
oferta inadequada de HUFAs.
A necessidade de HUFAs durante o período de reprodução pode ultrapassar a capacidade de síntese
endógena, sendo necessária sua suplementação. Porém, os mecanismos e vias envolvidas na regulação da
reprodução por ácidos graxos na dieta são desconhecidos.
Portanto, o presente estudo teve como objetivo melhorar a compreensão do papel de HUFAs no
desenvolvimento embrionário e na taxa de eclosão, através da introdução de diferentes fontes de óleo na dieta
de reprodutores de zebrafish.
Material e Métodos
Foram utilizados 28 aquários de vidro com capacidade de 10 litros cada, montados num sistema de
recirculação fechada, com temperatura controlada (29 ° C) e um regime de fotoperíodo de 14:10
(claro:escuro). Em cada aquário, foram acondicionadas dez fêmeas de zebrafish com 4 meses de idade e
comprimento padrão inicial de 20±4 mm. Utilizou-se 4 dietas isoenergéticas e isoproteicas com diferentes
fontes de óleo, sendo elas, óleo de oliva (OO), óleo de linhaça (OL), óleo de peixe (OP) e óleo de milho
(OM) e 7 repetições (aquários). Os peixes foram alimentados duas vezes ao dia (às 08:00 e 17:00), durante 5
meses até a saciedade aparente. Nos dois últimos meses os animais foram transferidos a tanques de desova
em uma proporção de 3 machos para cada 2 fêmeas.
Os ovos fertilizados foram recolhidos e transferidos para as incubadoras experimentais com 200ml de
meio E3 (5 mM de NaCl, KCl 0,17 mM, CaCl2 0,33 mM, MgSO4 0,33 mM, 0,1% de azul de metileno
(Sigma)). A temperatura foi ajustada para 26 ± 0,5 ° C em todas as unidades e os meios foram substituídos
todos os dias. O desenvolvimento embrionário foi avaliado através de microscópio estereoscópico (Nikon,
Optiphot-2, Belmont, CA, EUA) nos horários: 8-9, 23-25 , 30-34 e 48-50 horas após a fertilização (HPF). Os
tempos das avaliações foram escolhidos de forma a coincidir com as mudanças morfológicas representativas
nos embriões. A determinação dos estádios de desenvolvimento foi realizada de acordo com as descritas por
Kimmel et al. (1995). A fase de desenvolvimento embrionário foi avaliada usando um sistema escore de
pontuação que varia de uma pontuação mínima de 0 para um óvulo recém fecundado e uma pontuação
máxima de 10 para larvas emergentes. Para cada avaliação, 30 embriões foram coletados de cada incubadora
e o estágio de desenvolvimento foi registrado. Os ovos remanescentes foram usados para avaliar a
porcentagem de taxa de eclosão. Os dados de taxa de eclosão foram analisados por ANAVA e as médias
comparadas pelo teste Tukey a 5% de significância. As diferenças nos escores de desenvolvimento de
embriões foram avaliadas pelo teste de Kruskal-Wallis em um nível de significância de 5%, utilizando o
pacote computacional SAEG (Euclydes, 1997).
Resultados e Discussão
O desenvolvimento embrionário em 8-9 hpf foi significativamente afetado pelas dietas (P<0,05;
Figura 1). Os embriões dos peixes que receberam a dieta com OM obtiveram maior desenvolvimento do que
os alimentados com OO e OP. Contudo, após 8-9 hpf não foi encontrado diferença no desenvolvimento dos
embriões entre os tratamentos.
O OM foi utilizado como fonte do ácido graxo linoleico (ômega 6). Esse ácido graxo é precursor de
ácido araquidônico, que é o principal precursor de prostaglandinas da série 2, e tem sido mostrado participar
como mediador da esteroidogênese, maturação de oócito e ovulação ( Lister and Van der Kraak, 2008)
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Figura 1. Box- plot de pontuação do desenvolvimento na (A) 8-9hpf (P = 0,007), (B) 23-25hpf (P
= 0,149), (C) 30-34hpf (0,761) e (D) 48-50hpf (P = 0,576). Os valores são apresentados como
média ± EPM (n = 30). As colunas com diferentes letras diferem entre si estatisticamente, de
acordo com teste Tukey a 5% de significância.
Os peixes alimentados com OP obtiveram uma taxa de eclosão maior que os demais (65%) e os que
consumiram OL e OM apresentaram a mesma taxa de eclosão. Os peixes que receberam OO como fonte
lipídica obtiveram os menores valores de taxa de eclosão. Os resultados obtidos são semelhantes aos
observados por Furuita et al. (2007) que ao estudarem a enguia japonesa (Anguilla japonica) constataram
uma maior taxa de eclosão quando os reprodutores foram suplementados com OP em comparação aos grupos
que receberam OM ou combinações com óleo de peixe e outra fonte lipídica.
Conclusões
A suplementação de fêmeas de zebrafish com óleo de peixe proporcionou uma maior taxa de eclosão
dos embriões uma característica valorizada pelos produtores comerciais. O óleo de milho influcienciou
positivamente o desenvolvimento embrionário inicial (8-9 hpf), no entanto essa diferença não se manteve nos
estágios posteriores de desenvolvimento.
Agradecimentos
À Universidade Federal de Lavras, pela oportunidade de condução deste estudo. Ao Conselho
Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), pelo financiamento do projeto de pesquisa e
concessão da bolsa de estudos. À Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (Capes),
pela concessão da bolsa de estudos. À Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais
(FAPEMIG), pela concessão da bolsa de estudos.
Literatura citada
EUCLYDES, R.F. Instructions for use of the program SAEG - System for Genetic
Analysis and Statistics.
Viçosa: Federal University of Viçosa, p.150, 1997. FURUITA H, HORI K, SUZUKI T, SUGITA T & YAMAMOTO T. Effect of n-3 and n-6 fatty acids in
broodstock diet on reproduction and fatty acid composition of broodstock and eggs in the Japanese eel
Anguilla japonica. Aquaculture 267 55-61, 2007.
KIMMEL CB, BALLARD WW,KIMMEL SR,ULLMANN B & SCHILLING TF. Stages of Embryonic
Development of the Zebrafish. Developmental Dynamics 203 253-310, 1995.
LISTER, A.L. and G.VAN DER KRAAK. An investigation into the role of prostaglandins in zebrafish
oocyte maturation and ovulation. General and Comparative Endocrinology 59: 46-57, 2008.
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