RESUMO A medicação intracanal tem por objetivo eliminar os microrganismos presentes no interior do sistema de canais radiculares, possibilitando o reparo dos tecidos perirradiculares danificados pela ação microbiana. Apesar dos inúmeros medicamentos utilizados, ainda não existe um fármaco ideal. Assim, este estudo visa desenvolver e caracterizar nanopartículas contendo clorexidina, avaliar seu processo de degradação na associação com a pasta de hidróxido de cálcio e analisar sua eficácia através de testes in vitro e in vivo. Foram desenvolvidas e caracterizadas nanopartículas lipídicas sólidas contendo clorexidina nas concentrações de 0,2 e 0,5 %, na forma de suspensão e gel, apresentando valores de tamanho médio de partícula de 88,5 nm e 84,6 nm, respectivamente. As amostras foram armazenadas por 90 dias mantendo-se estáveis em temperatura ambiente e geladeira, porém instáveis em estufa a 40°C. O doseamento da clorexidina livre associada à pasta de hidróxido de cálcio mostrou uma redução de 33 % de fármaco após 14 dias de análise, já a clorexidina nanoencapsulada sofreu degradação de apenas 10 % do seu total. O teste de difusão em ágar frente à C. albicans e E. faecalis, pelo período de 72 h, mostrou halos de inibição de menor tamanho, porém com aumento crescente. Apesar deste resultado aparentemente desfavorável, a concentração inibitória mínima mostrou valores iguais para as nanopartículas em comparação ao fármaco livre frente aos mesmos microrganismos. Para observar a penetração das nanopartículas no interior dos túbulos dentinários foi utilizado como método de análise a microscopia eletrônica de varredura associada à energia dispersiva de raios X, através da identificação de átomos de cloro. Esta técnica permitiu observar a presença das nanopartículas no interior dos túbulos e depositadas sobre a superfície dentinária. No teste in vivo em ratos, foi possível observar, radiograficamente e histologicamente, a ação das nanopartículas lipídicas de clorexidina, inclusive da associação à pasta de hidróxido de cálcio, melhorando as propriedades microbianas da mistura. Os resultados sugerem que a clorexidina pode ser associada a nanopartículas lipídicas sólidas, mantendo a ação antimicrobiana da clorexidina, possibilitando seu uso como medicação intracanal em Odontologia e auxiliando na preservação do fármaco quando em associação com a pasta de hidróxido de cálcio evitando sua degradação pelo elevado valor de pH. Palavras-chave: clorexidina, hidróxido de cálcio, medicação intracanal, nanopartículas lipídicas sólidas.