título: efeitos da ingestão de dieta hiperlipídica nas contagens total e

TÍTULO: EFEITOS DA INGESTÃO DE DIETA HIPERLIPÍDICA NAS CONTAGENS TOTAL E
DIFERENCIAL DE LEUCÓCITOS EM RATOS WISTAR MANTIDOS EM AMBIENTE ENRIQUECIDO
CATEGORIA: CONCLUÍDO
ÁREA: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E SAÚDE
SUBÁREA: FISIOTERAPIA
INSTITUIÇÃO: CENTRO UNIVERSITÁRIO CATÓLICO SALESIANO AUXILIUM
AUTOR(ES): KELVIN ANEQUINI SANTOS
ORIENTADOR(ES): JOSÉ ALEXANDRE CURIACOS DE ALMEIDA LEME
COLABORADOR(ES): ANDRÉ ZANOLO
RESUMO
A dieta tem sido apontada como fator importante para manutenção da atividade adequada do
sistema imunológico.Todavia, a dieta hiperlipídica é tida como prejudicial ao sistema
imunológico. Desta forma, o presente estudo tem por objetivo investigar os efeitos da dieta
hiperlipídica (HP) na resposta imunológica em ratos wistar. Para isso, os animais foram
distribuídos em grupo controle (8) que receberam a dieta convencional e (8) que receberam a
dieta HP (60%). Semanalmente, durante o período experimental de 8 semanas, foram
coletadas amostras para as análises global e diferencial de leucócitos e os resultados foram
analisados estatisticamente utilizando o teste t de student. Os valores de contagem total dos
leucócitos os valores foram reduzidas pela dieta. Nas análises diferenciais de leucócitos, o
linfócitos apresentaram aumento e os neutrófilos redução. Desta forma pode ser concluído que
a dieta hiperlipídica reduziu as concentração de leucócitos, alterando ainda a contagem
diferencial, aumentando o número de linfócitos e reduzindo de neutrófilos.
Palavras-chave: Leucócitos, Sistema imunológico, dieta hiperlipídica.
INTRODUÇÃO
O sistema imunológico é composto por um conjunto de células (leucócitos) e
moléculas que atuam na defesa e regeneração do organismo. Estas ações são
realizadas basicamente no combate contra microorganismos, na remoção de células
mortas
e
detritos
celulares
e
estabelecendo
a
memória
imunológica
(SCHULENBURG et al., 2004).
Os leucócitos podem ser agrupados nos granulócitos polimorfonucleares
(neutrófilos, eosinófilos e basófilos), monócitos e macrófagos e os linfócitos
(LEANDRO et al., 2007).
A modulação da resposta do sistema imunológico é realizada por vários
fatores, sejam estes genéticos ou ambientais. Dentre estes fatores ambientais está a
dieta que pode alterar de forma positiva ou negativa no sistema imunológico, isto
porque o sistema imune é sensível tanto aos agentes infecciosos quanto às
mudanças na homeostase orgânica (WOMACK et al., 2007; LEANDRO, 2007).
Os lipídios disponíveis na alimentação podem agir de forma benéfica ou
prejudicial sobre o sistema imunológico. Neste sentido, a dieta hiperlipídica aumenta
a secreção de leptina, bem como,estimula a produção de citocinas pró inflamatórias
que podem alterar as concentrações globais e diferenciais de leucócitos (GERALDO
et al., 2008). Alguns estudos têm observado que o comportamento do sistema imune
em resposta à dieta hiperlipídica não é linear e pode não promover diferenças
significativas ( SANTOS, 2013; SILVA, 2014).
Desta forma, ainda existem lacunas a serem descobertas na relação entre
lipídios e sistema imunológico. Há carências de estudos que tenham verificado a
administração de dietas com alta concentração de lipídios e a resposta das células
do sistema imunológico.
OBJETIVOS
O presente estudo teve por objetivo investigar os efeitos da ingestão de dieta
hiperlipídica nas contagens total e diferencial de leucócitos em ratos Wistar mantidos
em ambiente enriquecido
METODOLOGIA
Para desenvolver este estudo, ratos da linhagem Wistar (Rattus Norvegicus
Albinus Wistar) com idade em torno de 3 meses foram mantidos em gaiolas
coletivas, a temperatura controlada por ar condicionado de 25 ± 1º C e em ciclo
claro/escuro de 12/12 horas, com livre acesso a água e ao alimento.
O experimento seguira as recomendações das Resoluções Brasileiras de
Bioética de Experimentos com Animais (lei federal nº 11.794, de 08 de outubro de
2008, Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal- CONCEA). Este
projeto foi submetido para apreciação no Comitê de Ética em Experimentação
Animal do Centro Universitário Católico Salesiano Auxilium- Unisalesiano.
Distribuição do grupos
Os animais serão distribuídos aleatoriamente nos seguintes grupos:
Dieta convencional (DC) - Animais que receberam dieta convencional;
Dieta hiperlipídica (DH) – Animais que receberam dieta hiperlipídica (60% de
lipídeos)
Dieta hiperlipidica
A dieta hiperlipídica consistiu de 26,13% de carboidratos, 14,4% de proteínas
e 57,6% de lipídios, tendo vitaminas e minerais adicionados de forma balanceada e
ajustado pela dieta controle. Esta dieta foi obtida junto à empresa Pragsoluções
(Jaú-São Paulo)
Análise global de leucócitos
No inicio e ao final do período experimental foram coletadas amostras de
25µL de sangue da parte distal da cauda de cada rato utilizando capilar
heparinizado, sem a utilização de anestesia. A coleta foi feita por volta das 14 horas
da tarde. A amostra coletada foi dispensada em microtubo de 1,5 mL e diluído em
500 µl de solução de Turk. Após suave agitação, a solução será gotejada na câmara
de Neubauer e realizada a contagem total de leucócitos em microscópio (OLIVEIRA
et al., 2002).
Análise diferencial de leucócitos
No inicio e ao final do período experimental foram coletadas amostras de uma
gota de sangue da parte distal da cauda de cada rato que foi dispensada em lâmina
de vidro e, posteriormente, feito o esfregaço desta. Após seca , a lâmina foi
mergulhada nos corantes do panótico rápido. Depois de secas, as lâminas serão
analisadas em microscópio, com a utilização de óleo de imersão entre a objetiva e o
material observado. Foram contadas 50 células em cada lamina sendo diferenciados
os tipos de leucócitos entre estas células analisadas (OLIVEIRA et al., 2002).
Análise estatística
Após o teste de normalidade, os resultados serão analisados estatisticamente
utilizando o teste t Student ou Mann-Whitney (para dados não paramétricos) através
do software SPSS®.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
No presente estudo foram investigadas as possíveis alterações nas contagens
totais e diferenciais de leucócitos sanguíneos. Este estudo é resultado de um projeto
promoveu a instauração desta técnica no laboratório, tendo sido o trabalho de
instauração realizado pelo grupo de discentes envolvidos no presente estudo.
O estudo da contagem total (global) de leucócitos no inicio do experimento não
apresentou diferenças pelas dietas oferecidas aos animais (Figura 1). Na análise
realizada ao final do experimento, os animais que receberam dieta hiperlipídica
apresentaram valores maiores que os animais que receberam a dieta controle.
Quando realizada a média das semanas (tabela 1) pode ser observado que os
animais que receberam a dieta hiperlipídica apresentaram valores menores na
contagem global de leucócitos
Figura 1. Contagem total de leucócitos (n° de células x 10 3/mm3 de
sangue) dos animais dos grupos DC (dieta controle) e DH (dieta
hiperlipídica) mantidos em ambiente enriquecido previa (1) e
posteriormente (2) ao período experimental (8 semanas). Teste t Student;
p<0,05 n=8 ratos/ grupo. A≠ DC
A tabela 2 apresenta os resultados da contagem diferencial de leucócitos nos
grupos estudados. A dieta hiperlipídica promoveu aumento nas concentrações de
linfócitos e redução nos valores de neutrófilos. Os demais tipos de leucócitos não
sofreram alterações promovidos pela dieta hiperlipídica.
Tabela 2. Média da contagem diferencial de leucócitos (%) e global (n° de células x
103/mm3 de sangue) realizada semanalmente dos animais dos grupos DC (dieta
controle) e DH (dieta hiperlipídica) mantidos em ambiente enriquecido previa e
posteriormente ao período experimental de 8 semanas).
DC
DH
Grupos
Leucócitos
Linfócitos
54,9±7,1
72,1±5,6a
Monócitos
5,4±1
5,6±1
Neutrófilos
23,5±3,3
12,7±4a
Eusinófilos
4,5±2,3
3,1±0,6
Basófilos
6±3
3,7±1,6
Bastonetes
5±2,9
3,3±1,2
Contagem
11,2±2,2
8,4±1,7a
global
Teste t Student; p<0,05 n=8 ratos/ grupo. A≠ DC
O presente estudo demonstrou que a ingestão da dieta hiperlídica (60%) pode
trazer um conjunto de prejuízos ao sistema imunológico. A principio, a redução da
concentração sanguínea de leucócitos pode ser um efeito a longo prazo da
administração desta dieta.
As alterações no tipo de leucócitos também é uma informação relevante.
Estudos prévios apresentam resultados constrantes entre si, sendo este contraste
resultado da concentração de lipídios na dieta hiperlipídica, tipo de ácidos graxos
predominante e idade dos animais (WU et al., 2013; CURI et al., 2001).
CONCLUSÕES
O presente estudo permite concluir que a ingestão de dieta hiperlipídica (60%)
durante 8 semanas em animais adultos induziu redução na contagem global de
leucócitos e na contagem diferencial redução de neutrófilos e aumento de linfócitos.
Com relação à iniciação científica, deve ser ressaltado que, através do
presente estudo, os discentes promoveram a instauração da técnica de contagem
global e diferencial de leucócitos no laboratório.
REFERÊNCIAS
CURI, Rui et al. Entendendo a Gordura-Os Acidos Graxicos. Editora Manole Ltda,
2001.
GERALDO, J.M.; ALFENAS, R.C.G. Role of diet on chronic inflammation prevention
and control: current evidences. Arquivos Brasileiros de Endocrinologia &
Metabologia, v. 52, n. 6, p. 951-967, 2008.
SANTOS, Ed W.C.O. Estudo da função de macrófagos peritoniais de
camundongos submetidos à dieta hipoprotéica e dieta hiperlipídica. 2013. Tese
de Doutorado. Universidade de São Paulo.
SILVA, K.M.F. Obesidade induzida por dieta em diferentes tempos: efeitos
sobre análises murinométricas, hematológicas e imunológicas de ratas. 2014.
Tese de Doutorado. Universidade Federal de Pernambuco.
SCHULENBURG, H.; KURZ, C.L.; EWBANK , J.J. Evolution of the innate immune
system: the worm perspective. Immunol Rev. 2004;198:36-58.
LEANDRO, C. G. et al. Mecanismos adaptativos do sistema imunológico em
resposta ao treinamento físico. Rev Bras Med Esporte, v. 13, n. 5, p. 343-348,
2007.
DE HEREDIA, F.P.; GÓMEZ-MARTÍNEZ, S.; MARCOS, A. Obesity, inflammation
and the immune system. Proceedings of the Nutrition Society, v. 71, n. 02, p. 332338, 2012.
WOMACK, J. et al. Obesity and immune cell counts in women.Metabolism, v. 56, n.
7, p. 998-1004, 2007.
GREENBERG, A.S.; OBIN, M.S. Obesity and the role of adipose tissue in
inflammation and metabolism. The American journal of clinical nutrition, v. 83, n.
2, p. 461S-465S, 2006.
Escribano, B.M et al.. Benefits of moderate training to the nonspecific immune
response of colts. Equine Vet J Suppl. 2002:182-5.
OLIVEIRA, C.A.M.; ROGATTO, G.P.; LUCIANO, E. Efeitos do treinamento físico de
alta intensidade sobre os leucócitos de ratos diabéticos. Rev Bras Med
Esporte, Niterói , v. 8, n. 6, p. 219-224, Dec. 2002.
PEDERSEN B.K., et al. Immunity in athletes. J Sports Med Phys Fitness
1996;36:236-45
WASINSKI, F. et al. Exercise and caloric restriction alter the immune system of mice
submitted to a high-fat diet. Mediators of inflammation, v. 2013, 2013.
WOODS, J.A.; PENCE, B.D. Physical Activity, Exercise, and the Immune System:
Three Lines of Research That Have Driven the Field. 2015.
WU, Dayong et al. Diet‐induced obesity has a differential effect on adipose tissue
and macrophage inflammatory responses of young and old mice.Biofactors, v. 39,
n. 3, p. 326-333, 2013.