Meios de cultivo de bactérias

MEIOS DE CULTIVO DE BACTÉRIAS
Profª. Dra. Dejanira de Franceschi de Angelis
1 – INTRODUÇÃO
As bactérias podem ser cultivadas em diferentes meios de cultura, contudo é
importante a detecção daquelas que predominam em um determinado ambiente causando
perturbações de ordem ecológica, social e econômica.
Na industria alcooleira, existem bactérias que produzem deterioração na cana-deaçúcar, no caldo de cana, nas tubulações, na fermentação, na qualidade do açúcar,
introduzindo o que reverte-se em perdas no processo.
Considerando, que cada unidade industrial tem suas características próprias verificouse que é possível cada uma reproduzir seus meios de cultivo atendendo as condições de
proveniência de sua matéria-prima.
Desta forma sugere-se os seguintes meios para controle das bactérias do processo:
2 – MEIO CSN (CALDO SUPLEMENTADO COM NUTRIENTES)
Este meio pode ser preparado sem o ágar na forma liquida para multiplicação de
bactérias isoladas do processo.
Outra opção é para o cultivo de levedura, neste caso não se coloca a cicloheximida.
Este meio pode ser empregado para diferentes finalidades: avaliação da sensibilidade
aos biocidas, resistência térmica, resistência ao etanol, variação de pH, crescimento em
diferentes potenciais osmóticos, queda de ART (Açucares Redutores Totais), entre outras.
Pode ainda ser empregado para os ensaios de avaliação da sensibilidade de bactérias no
teste de CIM (Concentração Inibitória Mínima) ou MIC (Minimal Inhibitory Concentration) .
Formula:
Caldo de cana clarificado Brix ...........................................................1000mL
Extrato de levedura ........................................................................... 0,5g
Peptona ............................................................................................. 0,5g
Tweem 80 .......................................................................................... 0,12mL/g
Cicloheximida ..................................................................................... 10,0 ppm
pH ...................................................................................................... 6,2 +/- 0,1
Agar ................................................................................................... 17,0g
PREPARO DO MEIO:
Na industria emprega-se o caldo clarificado, porém se tiver muito sulfito este poderá
prejudicar os ensaios de laboratório.
Clarificação do caldo: 1 litro de caldo-de-cana (garapeiro) adiciona-se 2 claras de ovo,
batidas em neve. Leva-se à autoclave em frasco e deixa-se por 30 minutos com a válvula
aberta. A seguir deixa-se esfriar até condição de abrir ainda quente a autoclave (abre-se com
cuidado). Filtra-se o caldo com gase dobrada ou em algodão colocado em funil.
O caldo filtrado fica claro e livre de matéria polimerizada como pectina, albuminas,
mucilagem, etc. Neste ponto ajustam-se o Brix e o pH para o uso no laboratório.
3 – MEIO CSN COM CARBONATO
Este meio presta-se para verificar a presença de bactérias produtoras de acido.
PREPARO DO MEIO:
Pesar 20g CaCO3 e dissolver em 100mL de água destilada. Esterilizar.
Usar 4 mL desta solução para cada 100 mL de meio CSN.
4 – MEIO PARA PRODUTORAS DE GOMA
Este meio presta-se para verificar a presença de bactérias produtoras de goma.
Formula:
Sacarose ........................................................... 100,0 g
Glicose .............................................................. 10,0 g
Triptona ............................................................. 5,0 g
Agar ................................................................... 16,0 g
pH ......................................................................
5,5
Água destilada ................................................... 100,0 mL
Cicloheximida ...................................................... 0,5 mL (solução 1 mg/ mL)
Pesar a sacarose e a glicose e esterilizar separadamente :
- dissolver a glicose em 20 mL de água
- dissolver a sacarose em 80 mL de água
Na hora de usar acrescentar os demais componentes dissolvidos em 80,0 mL
Completar o volume com 100 mL de água esterilizada.
Obs. – Se a este meio for acrescentado 12,5 mL de uma solução de azida sódica a 1%,
esterilizada em membrana filtrante, tornar-se-á seletivo para Leuccnastac sp.