Congelamento de Células em Ampolas

1. Procedimento padrão para congelamento de células em ampolas.
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Preparar previamente rótulos e ampolas a serem utilizadas com as
células. O rótulo deve conter as seguintes informações:
- Nome da Célula
- Número da passagem da célula que está sendo congelada
- Data
- Nome ou iniciais do operador.
Quaisquer outras observações, tais como presença de contaminantes,
etc, devem igualmente ser anotadas.
- EX: MDBK 128 ; (09/10/98); Livre BVDV; PMR
Tripsinizar as células.
Suspender as células em meio de congelamento, logo após a
tripsinização pipetando 6 ml de meio de congelamento em uma garrafa
de cultivo celular de 25 cm2.
Distribuir as células suspensas em ampolas ou tubos próprios para
congelamento. Uma garrafa de cultivo celular de 25 cm2 irá gerar 3
ampolas (1,8 ml por ampola). Cada ampola servirá como semente de
célula para uma garrafa de cultivo celular de 25 cm2 . Para garrafas
maiores ajustar de acordo. O ideal é que tenhamos cerca de 1,5 milhões
de células por ampola para gerar uma garrafa de 25 cm2 .
Enrolar os tubos ou ampolas em algodão e colocá-los em uma caixa de
isopor.
Colocar a caixa, no mínimo por 24 horas, no freezer - 70 oC. (O ideal é
que a temperatura baixe lentamente, cerca de um grau centígrado por
minuto).
Armazenar as ampolas ou tubos para os “racks” dos botijões com
nitrogênio líquido.
Anotar no livro de registro de cultivos celulares o número do botijão e do
rack e quantas ampolas foram congeladas, assim como as informações
constantes no rótulo das ampolas.