Análise de marcadores do genoma mitocondrial de espécies de

56º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 56º Congresso Brasileiro de Genética • 14 a 17 de setembro de 2010
Casa Grande Hotel Resort • Guarujá • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Análise de marcadores do genoma mitocondrial
de espécies de moscas de importância forense
(Diptera: Sarcophagidae) no contexto da identificação
taxonômica molecular
Rodrigues, EL1; Mello-Patiu, CA2; Lessinger, AC1
Laboratório de Genética Molecular, Universidade Federal de São Carlos campus Sorocaba
Setor de Diptera – Departamento de Entomologia, Museu Nacional do Rio de Janeiro/ Universidade Federal do Rio de Janeiro
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Palavras-chave: DNA barcoding, Sarcophagidae, DNAmt, biodiversidade.
A família Sarcophagidae possui aproximadamente 2.600 espécies, das quais 622 estão distribuídas na região
Neotropical. Nesta família, a identificação das espécies é uma questão complexa que requer amplo conhecimento
taxonômico. A avaliação de metodologias de identificação com base em sequências DNA é uma nova abordagem
que pode contribuir no esforço de caracterização destas espécies. Um trecho de 658pb do gene COI (sub-unidade
I do complexo Citocromo Oxidase) têm sido empregado no contexto da análise de “DNA barcodes”, assim como
outras regiões do DNAmt. O objetivo deste trabalho é avaliar o potencial informativo do gene COI para promover
a identificação de espécies da família Sarcophagidae em um contexto integrado às análises morfológicas. Os
espécimes foram coletados usando iscas em decomposição em Cerrado e Mata Atlântica, sendo identificados
pela análise de imagens digitalizadas das genitálias masculinas. O tórax dos indivíduos coletados foi removido
e armazenado em etanol absoluto a -200C ou via seca a -700C visando posterior análise. Os aedeagos foram
preservados como material testemunho (voucher). A extração de DNA foi realizada utilizando-se o tórax seguindo
as instruções do sistema Invisorb Spin Tissue Mini (Invitek). Sequências do gene COI foram amplificadas via
PCR utilizando-se os “primers” L2-N-3014 e C1-J-2195. Além disso, dois novos “primers” foram identificados pela
análise de alinhamentos dos genes COI e COII de dípteros caliptrados e estão sendo testados para amplificar
uma região gênica mais ampla. Visando análises mais abrangentes do genoma mitocondrial foram testadas
combinações de “primers” de PCR de longa-extensão (H16SB/HCOII e H16SA/HCOIII). Até o momento foram
coletados 165 espécimes, abrangendo 16 espécies de sarcofagídeos, onde Oxysarcodexia thornax foi a espécie
mais abundante (64%). Uma região de aproximadamente 850 pb foi satisfatoriamente amplificada para nove
espécies: Oxysarcodexia thornax, O. admixta , O. culmiforceps, O. parva, Peckia (Peckia) pexata, P. (Euboettcheria)
australis, P. (Euboettcheria) anguilla, Sarcodexia lambens e Ravinia advena. Reações de amplificação referentes a P.
(Squamatodes) ingens, P. (Euboettcheria) collusor e P. (Pattonella) intermutans estão sendo conduzidas utilizando-se
novos “primers” elaborados a partir de reformulações em “primers universais” (região COI/COII - 2300pb). Com
relação aos resultados de PCR de longa-extensão, uma região de 9.6 Kb foi amplificada nas espécies O. thornax e
R. advena, a partir da combinação de “primers” H16SB/HCOII, e está sendo testada para as demais espécies. Neste
trabalho apresentamos a padronização da reação de amplificação de um trecho do gene COI para 9 espécies de
Sarcophagidae, a elaboração de novos “primers” táxon-específicos para promover a caracterização de sequências
do DNAmt nestas espécies e o potencial de estratégias de PCR de longa-extensão para estudos do genoma
mitocondrial neste grupo.