concentrações de kin,bap e tdz na propagação in vitro de

INFLUÊNCIA DE CITOCININAS NA DENSIDADE DE TRICOMAS
GLANDULARES DAS FOLHAS DE ESPÉCIES DE MENTHA
MONTAGNER, Daiane Fiuza 1; MESSCHMIDT, Aline Alves 2; KAIPER, Cristiane3;
GARLET, Tânea Maria Bisognin4.
Palavras-chave: Hortelãs. Cultura de tecidos. Óleos essenciais.
Introdução
A importância econômica das mentas ou hortelãs é atribuída à presença de óleos
essenciais, metabólitos secundários que são ricos em monoterpenos, de ampla utilização nas
indústrias de medicamentos, cosméticos, produtos alimentícios e do tabaco. Os óleos
essenciais no gênero Mentha são produzidos e acumulados em tricomas glandulares das
folhas e das inflorescências. São encontrados basicamente dois tipos de tricomas glandulares
nesse gênero: os peltados e os capitados. Em geral, cada tipo de tricoma glandular apresenta
uma célula basal, situada na epiderme, suportando um pedúnculo ou colo, com 1-3 células, e
uma célula apical, quando são tricomas glandulares capitados, ou 4-10 células no ápice
quando se tratam de tricomas glandulares peltados (HAY & SVOBODA, 1993).
A propagação de plantas in vitro proporciona vantagens como: a possibilidade de
produção de grande número de indivíduos homogêneos e com elevada qualidade sanitária; e a
possibilidade de conservação do germoplasma com a garantia de manutenção da
biodiversidade. As citocininas são importantes na regulação do crescimento e da morfogênese
em cultura de tecidos, pois estimulam a divisão das células, a indução e a proliferação de
brotações. Em plantas aromáticas, as citocininas são utilizadas como fitoefetores com o
propósito de aumentar a biomassa e a produtividade de óleos essenciais (STOEVA & ILIEV,
1997). Desta forma, este trabalho teve como objetivo avaliar a densidade de tricomas
glandulares da epiderme foliar das plantas de menta (Mentha arvensis L. forma piperascens
Holmes , Mentha piperita L. var. piperita e Mentha x gracilis Sole ) obtidas dos diferentes
tratamentos com citocininas.
__________________
1
Acadêmica do Curso de Ciências Biológicas da Universidade de Cruz Alta (UNICRUZ), bolsista BIC
FAPERGS. [email protected]
2
Bióloga. [email protected]
3
Acadêmica do Curso de Especialização em Gestão e Desenvolvimento Sustentável do Meio Rural, UNICRUZ.
[email protected]
4
Professora Dra. Orientadora, Curso de Ciências Biológicas, UNICRUZ. [email protected]
Metodologia
O trabalho foi conduzido no Laboratório de Cultura de Tecidos Vegetais da
Universidade de Cruz Alta (UNICRUZ), no período de outubro de 2009 a janeiro de 2010.
Para a obtenção dos explantes foram utilizadas plantas jovens de Mentha arvensis L. forma
piperascens Holmes , Mentha piperita L. var. piperita e Mentha x gracilis Sole, com trinta
dias de idade e cultivadas em casa de vegetação. Segmentos nodais foram inoculados e
cultivados em tubos de ensaio (25 x 150 mm), contendo 10 mL do meio nutritivo MS
(MURASHIGE & SKOOG, 1962), acrescido de 30 g.L-1 de sacarose, 100 mg.L-1 de mioinositol e suplementado com concentrações (0; 2,0 e 4,0 µM) de 6-benzilaminopurina (BAP),
cinetina (KIN) e thidiazuron (TDZ). O pH foi ajustado para 5,8 e antes da adição de 7 g.L-1 de
ágar. Os explantes foram mantidos em sala de crescimento com temperatura de 252 C,
fotoperíodo de 16 horas de luz/ 8 horas de escuro e intensidade luminosa de aproximadamente
40 µmol m-2 s-1. Para os estudos da densidade de tricomas glandulares da epiderme foliar,
foram utilizadas folhas entre o 3º e o 4º nó superior das microplantas com 30 dias de idade,
provenientes dos diferentes meios com citocininas.
Foi realizado o método de moldes proposto por Prado & Casali (2006), com a
utilização de esmalte incolor comercial, conforme segue. Sem retirar as folhas da planta e
com o pincel que acompanha o vidro de esmalte incolor, aplicou-se na epiderme abaxial
(inferior) e na epiderme adaxial (superior) da folha uma película de esmalte. Após a
aplicação, destacou-se a folha da planta e esperou-se o esmalte secar sobre a epiderme.
Depois da secagem (cerca de 20 minutos), retirou-se o filme plástico formado sobre as
epidermes com uma pinça. Montou-se o filme plástico com água, lâmina e lamínula e
observou-se ao microscópio a imagem proporcionada pelo molde obtido.
O material coletado foi observado ao microscópio óptico (Meiji), com aumento de
400x. Foram utilizadas cinco folhas de plantas diferentes (repetições), sendo que para cada
lâmina foram observados 10 campos com a mesma área (0,16 mm2), para contagem do
número de tricomas glandulares por mm2 (densidade). O delineamento experimental foi o
inteiramente casualizado. Os dados foram submetidos à análise de variância e analisados pelo
teste de Tukey em nível de 5% de probabilidade de erro. As plantas foram comparadas entre
si para verificação do efeito das citocininas na densidade dos tricomas glandulares sobre a
superfície foliar.
Resultados e Discussão
Os resultados obtidos neste trabalho demonstram que os tricomas capitados e
peltados ocorrem em ambas as faces da epiderme das folhas das microplantas de M. arvensis,
M. x piperita var. piperita e M. x gracilis, com 30 dias de idade. Além de tricomas
glandulares, a espécie M. arvensis apresenta uma alta densidade de tricomas tectores,
característica que a distingue das demais.
Com relação à densidade de tricomas glandulares, observou-se maior concentração
na face adaxial de M. x piperita var. piperita e M. x gracilis sob efeito de 2,0 µM da
citocinina TDZ, com médias 3,6 e 3,4 respectivamente (Tabela 1), sendo que em M. arvensis
não houve diferença significativa entre os diferentes tratamentos com citocininas. Deschamps
et al. (2006), no estudo da densidade de tricomas de espécies de mentas, observaram uma
média de 0,77 a 1,63 tricomas na face adaxial, porém a análise foi realizada com tecido
completamente expandido e sem a presença de citocininas.
Tabela 1. Densidade dos tricomas glandulares na epiderme adaxial (superior) de folhas de três espécies de
Mentha cultivadas por 30 dias em meio MS e provenientes de meios com diferentes citocininas (06/01/2010).
Campo microscópico = 400 x, área de 0,16 mm2
Citocinina
µM
Mentha arvensis
Mentha x piperita var.
Mentha x gracilis
piperita
0
2,2 a A
1,6 d AB
1,0 b B
2,0
2,6 a AB
3,2 abc A
1,6 b B
KIN
4,0
2,0 a A
2,2 bcd A
2,2 ab A
2,0
2,2 a A
2,0 cd A
1,6 b A
BAP
4,0
2,4 a AB
3,4 ab A
1,8 b B
2,0
3,0 a A
3,6 a A
3,4 a A
TDZ
4,0
2,0 a B
3,4 ab A
2,0 b B
Média geral
2,34 B
2,77 A
1,94 C
*Médias seguidas de mesma letras minúsculas nas colunas não diferem entre as concentrações de citocininas e
letras maiúsculas nas linhas não diferem entre as espécies de Mentha, pelo Teste de Tukey, em nível de 5% de
probabilidade.
Com relação à densidade de tricomas na face abaxial, o melhor resultado foi
observado em M. arvensis na presença de 4,0 µM de BAP com média de 3,4 (Tabela 2), no
entanto para as espécies M. x piperita var. piperita e M. x gracilis não houve diferença
significativa entre os tratamentos com as diferentes citocininas. Quando se comparam as
faces epidérmicas das três espécies, observa-se que não houve diferenças significativas entre
as faces adaxial e abaxial. Entretanto, a espécie Mentha x piperita var. piperita apresentou um
maior número de tricomas glandulares para ambas as faces. De acordo com Werker et al.
(1993), o aparecimento e desenvolvimento de tricomas glandulares dependem da maturidade
do tecido foliar.
Tabela 2 . Densidade dos tricomas glandulares na epiderme abaxial (inferior) de folhas de três espécies de
Mentha cultivadas por 30 dias em meio MS e provenientes de meios com diferentes citocininas (06/01/2010).
Campo microscópico = 400 x, área de 0,16 mm2
Citocinina
µM
Mentha arvensis
Mentha x piperita var.
Mentha x gracilis
piperita
0
2,0 ab A
2,2 a A
2,0 a A
2,0
2,6 ab A
3,0 a A
1,0 a B
KIN
4,0
2,4 ab AB
3,0 a A
1,4 a B
2,0
1,8 b AB
3,0a A
1,0 a B
BAP
4,0
3,4 a A
2,0 a B
2,0 a B
2,0
2,0 ab A
3,0 a A
2,4 a A
TDZ
4,0
1,8 b B
3,2 a A
1,8 a B
Média geral
2,28 B
2,77 A
1,66 C
*Médias seguidas de mesma letras minúsculas nas colunas não diferem entre as concentrações de citocininas e
letras maiúsculas nas linhas não diferem entre as espécies de Mentha, pelo Teste de Tukey, em nível de 5% de
probabilidade.
Neste trabalho, não se observou diferença estatística entre as faces epidérmicas das
espécies, provavelmente pelo fato da avaliação ter sido realizada com folhas jovens, em tecido
em fase de expansão, cujo número de tricomas ainda não havia sido definido.
Conclusão
O número de tricomas glandulares nas folhas das espécies de Mentha estudadas pode
sofrer a influência das diferentes concentrações de citocininas.
Não houve diferença significativa entre as epidermes de cada espécie de Mentha.
Referências
DESCHAMPS , C. et al . Densidade de tricomas glandulares e produção de óleo essencial em
Mentha arvensis L., Mentha X piperita L. e Mentha cf. aquática L. Revista Ciência e
Natura, UFSM v.28 n.1 p. 23-34, 2006.
HAY, R.K.M.; SVOBODA, K.P. Botany. In: HAY, R.K.M.; WATERMAN, P.G. Volatile oil
crops: their biology, biochemistry and production. Essex: Longman Group, 1993. p.5-19.
MARTINS, E.R. Estudos em Ocimum selloi Benth.: Isozimas, morfologia e óleo essencial. In:
MING, L.C. (coord.). Plantas medicinais aromáticas e condimentares: avanços na
pesquisa agronômica. v.2, 1998. p.97-125
MURASHIGE, T.; SKOOG, F. A revised medium for rapid growth and bioassays with
tabacco tissue cultures. Physiologia Plantarum, v. 15, p. 473-497, 1962.
PRADO, C.H.B.A.; CASALI, C.A. Fisiologia vegetal. Barueri, SP: Manole, 2006. 448p.
STOEVA, T.; ILIEV, L. Influence of some phenylurea citokinins on spearmint essential oil
composition. Bulgarian Journal Plant Physiology, v. 23, p. 66-71, 1997.
WERKER, E.; PUTIEVSKI, E.; RAVID, U.; DUDAI, N.; KATZIR, I. Glandular hairs and
essential oil in developing leaves of Ocimun basilicum L. ( Lamiaceae). Annals of Botany,
v.71, p. 43-50, 1993.