Estudo da microbiota associada a planta medicinal

C10.1 - Microbiologia
Estudo da microbiota associada a planta medicinal Alternanthera brasiliana.
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2
Natalia R. Rivaben , Marilia A. Trapp , Edson Rodrigues-Filho
3
1. Estudante de IC do Laboratório de Bioquímica Micromolecular de Micro-organismos LaBioMMi-UFSCar*
[email protected]
2. Doutoranda no Laboratório de Bioquímica Micromolecular de Micro-organismos LaBioMMi-UFSCar*
3. Professor titilar do Depto.de Química-UFSCAR, coordenador do Laboratório de Bioquímica Micromolecular de Micro-organismos
LaBioMMi-UFSCar
Palavras Chave: bactérias, isolamento, identificação.
Introdução
A planta Alternanthera brasiliana é amplamente
utilizada no Brasil por suas propriedades anti-inflamatória,
antibiótica e analgésica. Tem sido demonstrado que os
compostos ativos presentes nos tecidos desta planta
podem estar relacionados a presença de microorganismos endofíticos associados a ela associados.
Dessa forma, o presente trabalho visa estudar a
microbiota associada a planta A. brasiliana, avaliando a
influência de diferentes meios de cultura. Além disso, os
micro-organismos isolados serão identificados pela analise
de seu perfil proteômico por MALDI-TOF, uma técnica
inovadora, rápida e eficiente para a identificação de microorganismos.
Resultados e Discussão
Para o isolamento das bactérias endofíticas
associadas a planta A. brasiliana, as folhas da mesma
foram lavadas em agua corrente, imersas em agua
deionizada e mantidas em banho de ultra-som por 10
minutos. Após essa etapa, as folhas foram cortadas em
pedaços de aproximadamente 2x2 cm e esterilizadas
superficialmente segundo a metodologia descrita por
Petrini et. al. Em seguida ao processo de esterilização os
fragmentos foram transferidos para placas de Petri
contendo diferentes meios de cultura: Triptone Soy Agar
(TSA), Brain Heart Infusion (BHI), Nutriente Ágar (NA),
Mueller Hinton (MH) e Luria Bertani (LB).
o
Essas placas foram mantidas a 36 C até que fosse
observado
algum
crescimento
microbiano.
Após
sucessivos repiques 40 cepas de bactérias endofíticas
foram isoladas da planta A. brasiliana. Essas cepas foram
identificadas pela analise do seu perfil proteômico através
da técnica de MALDI-OTF.
Para a aquisição do espectro de massas, as
células de bactéria foram transferidas para a placa de
MALDI e cobertas com ácido p-hidroxicinâmico. Os
espectros foram comparados com a biblioteca do
equipamento como mostrado da Figura 1.
Bacteria isolada
Na Figura 01, as barras verdes relacionam os
picos que coincidem exatamente com os picos presentes
na amostra padrão, enquanto as barras amarelas
apresentam um deslocamento de massa em relação ao
padrão, por fim as barras vermelhas indicam sinais que
não possuem correspondência com a amostra padrão.
Após a comparação com a biblioteca foram
identificadas 16 espécies de bactérias as quais estão
representadas na Figura 2 com a ocorrência nos
respectivos meios de cultura.
Arthrobacter,castelli,
Bacillus,cereus,
Bacillus,infan5s,
Bacillus,megaterium,
Bacillus,pumilus,
Enterobacter,asburiae,
Enterobacter,cloacae,
Enterobacter,cowanni,
Erwinia,tasmaniensis,
Microbacterium,tastaceum,
Pantoea,anana5s,
Pseudomonas,fulva,,
Pseudomonas,pu5da,,
Pseudomonas,straminea,
Staphylococcus,warneri,
Stenotrophomonas,maltophilia,
BHI,
LB,
MH,
NA,
TSA,
BDADIsolamento,
realizado,em,2011,
Figura 2. Bactérias isoladas de A. brasiliana e sua ocorrência nos
diferentes meios de cultura utilizados para isolamento.
Os dados apresentados na Figura 2 mostram que algumas
bactérias
(i.e.
Staphylococcus
warneri,
Erwinia
tasmaniensis, Enterobacter asburiae e Bacillus infanstis)
foram isoladas apenas quando se utiliza determinado meio
de cultura. Além disso, algumas das bactérias isoladas
neste experimento parecem estar intimamente associadas
à planta A. brasiliana, já que haviam sido isoladas em um
experimento prévio realizado em 2011 como mostrado na
Figura 2.
Conclusões
Os resultados aqui apresentados mostram que a analise
do perfil proteômico por MALDI-TOF é uma poderosa
ferramenta para a identificação de bactérias endofíticas.
Além disso, os dados sugerem que o meio de cultura
exerce uma influencia nas espécies de micro-organismos
endofíticos isolados.
Agradecimentos
Bacteria
padrão
Figura 1. Comparação do espectro de massas de uma bactéria isolada
com uma cepa padrão depositada na biblioteca do software Biotyper.
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67ª Reunião Anual da SBPC