INSTRUÇÕES DE USO HEMAGEN®VIRGO HERPES SIMPLES TIPO 1 (HSV-1) IgG - Imunofluorescência Cat. No. 902500 - 96 testes (12x8) Cat. No. 902506 - 200 testes (25x8) USO DO PRODUTO O teste de Herpes Simples Tipo 1 - HSV-1 - IgG Hemagen® VIRGO® por imunofluorescência indireta é usado para a detecção e titulação dos anticorpos IgG do Vírus do Herpes Simples Tipo 1 no soro humano. Podem ser usados soros pareados, agudo e convalescente para demonstrar a soroconversão ou um aumento significativo nos níveis de anticorpo, como uma ajuda no diagnóstico de uma infecção recente ou corrente (primária ou reinfecção recorrente/reativação) com o vírus do herpes simples. Devido à reação cruzada de antígenos comuns , ambos os ensaios HSV-1 e HSV-2 deverão ser ensaiados em conjunto para total avaliação da condição de anticorpos de uma pessoa. Os ensaios de HSV-1 ou HSV2 não deverão ser usados sozinhos. RESUMO, EXPLICAÇÃO E PRINCÍPIO DO TESTE A percepção aumentada de viroses por herpes simples (HSV) por profissionais médicos e o público é devido a muitos fatores. Cinco fatores parecem ser primariamente importantes. Primeiro, há a epidemia corrente de infecções por herpes sexualmente transmitidas1. Segundo, há associada com o aumento na infecção de herpes sexualmente transmitida, um aumento em infecções de HSV em neonatais2. Terceiro, tem sido detectado HSV em pacientes seguidos de transplantes de órgãos 3,4. Quarto, tem sido reportado detecção de HSV em pacientes imunodeprimidos 5. Finalmente, como medida defensiva contra as futuras infecções difundidas de HSV tem sido desenvolvida terapias específicas antivirais para HSV6. Embora a primeira descrição clínica do herpes labial tenha ocorrido durante a época de Hipocrates 7, o herpes genital não foi descrito até 17368 na França por Astnuc, o médico do rei. Nos tempos modernos, o agente causador tem mostrado pertencer até o momento a dois tipos distintos de vírus, HSV-1 e HSV2, que diferem em seus padrões clínicos e epidemiológicos. Ambos os tipos são caracteristicamente de rápido crescimento, vírus citolíticos que permanecem dormentes nas células glanglionares neurais até serem reativados. Sorologicamente, muitas das imunidades humorais são direcionadas a tipos de antígenos comuns; entretanto, a resposta a um tipo específico de anticorpo permite diferenciação de infecções ao Tipo 1 e 29. O vírus do herpes simples é um membro do grupo herpesvirus que inclui Varicela-Zoster, citomegalovirus e Epstein-Barr vírus. A replicação do vírus ocorre dentro do núcleo das células e é completada na lise da célula. A distinção dos membros do grupo do herpesvirus pode ser acompanhada pela análise antigênica e definição das propriedades biológicas10. Nos tempos recentes, a subdivisão do HSV em tipos específicos tem se tornado possível. É estimado que a qualquer época, entre 0,65 e 15 porcento de todos os adultos podem expelir HSV-1 ou HSV-211. As taxas de infecção parecem ser inversamente relacionadas ao estado sócio econômica 12. Somente de 30 - 50 porcento dos adultos de grupos sócio econômicos mais altos têm anticorpos HSV enquanto de 80 - 100 porcento dos grupos sócio econômico mais baixos têm anticorpos específicos. Isto é provavelmente devido às condições de vida mais aglomeradas nos últimos grupos. O HSV-1 é principalmente difundido de secreções orais a outras áreas da pele e ocorrem freqüentemente infecções recorrentes. Na entrada dos sítios da pele, o vírus do herpes simples duplica e instiga uma resposta inflamatória local. A infecção primária de HSV-1 é freqüentemente assintomática, mas ocorrem irritações ocasionais menos importantes das gengivas, garganta e/ou olhos. Infecções recorrentes de HSV-1 são geralmente mais dolorosas e tem sérias implicações. Ocasionalmente, acredita-se que o HSV-1 seja o principal agente causador das encefalites por herpes simples13. As terapias antivirais têm sido desenvolvidas para tratar indivíduos infectados com HSV-1. Várias medidas preventivas podem diminuir a velocidade do HSV-1, tais como o uso de luvas pelo pessoal 1 HERPES 1 IFA médico, isolamento de indivíduos infectados e a prática de sexo seguro. As técnicas sorológicas podem ser úteis no diagnóstico de infecções primárias por HSV14. O teste de HSV-1 de IF VIRGO fabricado pela Hemagen Divisão VIRGO fornece todos os reagentes necessários para uma rápida determinação do anticorpo do HSV-1 no soro humano. O substrato antigênico, soro controle, conjugado FITC, tampão, lamínula e instruções de uso estão inclusos no kit. Princípio do Teste O ensaio de anticorpos fluorescente VIRGO utiliza o método indireto de impregnação de anticorpo fluorescente, descrito pela primeira vez por Weller e Coons em 1954 15. O procedimento é realizado em dois passos de reações básicas. No passo um, o soro humano a ser testado entra em contato com o substrato antigênico. O anticorpo, se presente no soro teste, irá ligar ao antígeno, formando um complexo antígeno-anticorpo. Se o soro a ser testado não contém anticorpo a este antígeno particular, não é formado nenhum complexo e todos os componentes do soro são removidos no passo de lavagem. O segundo passo envolve a adição de um anticorpo anti-humano marcado com fluoresceína aos poços de teste. Se o complexo antígeno-anticorpo específico é formado no passo um, o anticorpo marcado com fluoresceína irá ligar à metade do anticorpo do complexo no passo dois. Uma reação positiva, verde-maçã fluorescente brilhante, pode ser vista com a ajuda de um microscópio de fluorescência. Princípio do teste de Anticorpo Fluorescente Indireto. Passo 1 Antígeno (Substrato) na lâmina + Anticorpo específico = Complexo Antígeno-Anticorpo Passo 2 Anticorpo-Antígeno + Anticorpo anti-humano marcado com Fluoresceína = Fluorescência MATERIAIS FORNECIDOS Quantidade de teste 96 Testes 200 Testes 902500 902506 12 (8 poços) 25 (8 poços) 01 frasco 01 frasco 01 frasco 01 frasco 01 frasco 02 frascos 03 pacotes 01 frasco 02 pacotes 05 pacotes 01 frasco 03 pacotes Conteúdo Lâminas infectadas com HSV-1 e células não infectadas. Frasco de Controle Positivo contendo soro humano liofilizado. Frasco de Controle Negativo contendo soro humano liofilizado. Conjugado FITC contendo IgG anti-humano de cabra inativado (cadeias leve e pesada) liofilizado, com contra-corante. *Tampão Fosfato (PBS) em pó, com pH 7,4 +/- 0,2. *Contendo 2 ml de Glicerol tamponado. *Contendo 5 mata-borrões cada. * Estes componentes podem ser trocados entre diferentes lotes. MATERIAIS REQUERIDOS MAS NÃO FORNECIDOS Tubos de testes e estantes para fazer as diluições. Pipetas para a preparação das diluições. Lamínulas de 22 x 50 mm, No.1 de espessura. Câmara úmida. 2 HERPES 1 IFA Agitador magnético de placa (opcional). Travessa de coloração e estante com suporte de lâmina. Microscópio de fluorescência. Referir ao manual de instrução do fabricante para que o sistema de filtro dê ótimos resultados para o FITC (Comprimento de excitação máxima = 490 nm. Comprimento de emissão média = 520 nm). Estes materiais podem ser obtidos nas lojas e/ou empresas que vendem produtos e acessórios para laboratório. ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE 1. Armazenar o kit de 2 a 8oC. O pó de PBS, o Diluente e o Glicerol Tamponado podem ser armazenados de 2 a 30 oC se desejado. O kit de teste pode ser usado até a data de expiração escrita no lado externo da caixa. 2. Após a hidratação: O Controle Positivo, Controle Negativo, e Conjugado FITC deverão ser armazenados de 2 a 8 oC, ou divididos em alíquotas e armazenados a - 20 oC ou menos. NOTA: Foram tomadas precauções na fabricação deste produto para proteger os reagentes de contaminação. Após a reconstituição, deverão ser tomados cuidados para proteger os reagentes deste kit de contaminação. Se for mantida uma temperatura constante de armazenamento, os reagentes e substratos deverão ser estáveis até o período de vencimento do kit. CUIDADOS E PRECAUÇÕES 1. Este kit é somente para uso diagnóstico in vitro. 2. Manusear todas as amostras do ensaio, lâminas, controles positivo e negativo como se fossem capazes de transmitir agentes infecciosos. Todos os componentes de sangue humano do kit foram testados por métodos aprovados pelo FDA e apresentou-se negativo para antígeno de superfície da hepatite B (HBsAg) e para anticorpos ao vírus tipo 1 da imunodeficiência humana HIV-1. Como nenhum método pode oferecer completa segurança de que os vírus do HIV, hepatite B e outros agentes infecciosos estão ausentes, as amostras e os reagentes do kit deverão ser manuseados no Nível 2 de Biosegurança, como recomendado para qualquer soro humano ou amostra de sangue potencialmente infeccioso. 16,17 3. Os substratos antigênicos são fixados em acetona. 4. Não pipetar com a boca. 5. Não fumar, comer, ou beber em áreas onde as amostras ou reagentes do kit são manuseadas. 6. Todos os materiais usados neste ensaio, incluindo reagentes, amostras e materiais de limpeza deverão ser descartados de uma maneira que irá inativar os agentes infecciosos. 7. Não usar o kit ou os reagentes individuais além das suas datas de expiração marcadas. 8. Os componentes do kit foram testados como uma unidade. Não trocar os componentes de outras fontes ou de diferentes lotes, exceto quando anotado. 9. Proteger o conjugado de exposição prolongada à luz. COLETA, ARMAZENAMENTO E MANUSEIO DA AMOSTRA 1. As amostras de soro podem ser armazenadas à temperatura ambiente até 24 horas. Por um período mais longo, podem ser armazenados de 2 a 8oC (por até 3 dias), ou congelados a -20 ºC ou mais frio. Colocar a 37 oC até que a amostra seja descongelada. Remover e misturar bem antes do uso. Não é recomendado o autodegelo. Evitar ciclos múltiplos de congelamentos e descongelamentos 18. 2. A ótima execução do kit Hemagen VIRGO HSV-1 IgG IF depende do uso de amostras de soro frescas. As amostras deverão ser colhidas assepticamente. A separação rápida do coágulo previne a hemólise do soro19. Não deverá ser adicionado nenhum anticoagulante ou preservativo. 3. Para melhores resultados, deverá ser colhida uma nova amostra se houver a presença de contaminação bacteriana ou lípides. Se não for obtida uma nova amostra, é requerida uma filtração (0,45µ) ou centrifugação (aproximadamente 3000 x G por 10 minutos). 4. O excesso de lípides no soro teste pode produzir uma reação de “filmagem”. Os lípides “fixam” não especificamente no vidro e são extremamente difíceis de remover. A experiência irá habilitar o técnico a diferenciar esta reação de “filme” da reação específica. 5. Ocasionalmente, as amostras podem conter certas enzimas proteolíticas que atacam e digerem o substrato. Isto é devido especialmente a amostras contaminadas com microorganismos. Tais 3 HERPES 1 IFA amostras podem ser aquecidas à 56 oC por 30 minutos. Se isto não ocasionar a redução da atividade enzimática, deverá ser obtida uma outra amostra de paciente. PROCEDIMENTO DO TESTE A - PREPARAÇÃO DOS REAGENTES Deixar todos os reagentes e lâminas atingirem a temperatura ambiente por 15 a 30 minutos antes do uso. 1. Lâminas e Glicerol: Prontos para o uso. 2. PBS: Dissolver o conteúdo de um pacote em 1 litro de água destilada ou deionizada. Fechar o recipiente para prevenir contaminação ou evaporação. 3. Controles: Reidratar com 1,0 ml do PBS. Os controles estão agora a uma diluição de 1:10. Aliquotar e armazenar a -20 oC. 4. Conjugado: Reidratar com 2,0 ml de PBS. Armazenar de 2 - 8oC ou aliquotar e armazenar a -20 oC ou menos se não for usado dentro de uma semana. B - PROCEDIMENTO As amostras podem conter agentes infecciosos, portanto deverão ser manuseadas com cuidado. Para obter ótimos resultados NÃO deixar os poços do substrato secarem enquanto executa o teste. 1. Remover as lâminas e os reagentes requeridos do refrigerador e deixe-os atingir a temperatura ambiente (15 a 30 minutos). 2. Remova as lâminas da embalagem apenas antes do uso e rotule. 3. Reidrate os controles para preparar a diluição de 1:10. Estes são agora representativos de padrões de fluorescência positivo e negativo típico. 4. Dilua as amostras com PBS a diluições de 1:10 e 1:100 ou prepare diluições seriadas para a determinação quantitativa. 5. É necessário testar 1 Controle Positivo, 1 Controle Negativo e um Controle de Tampão PBS para cada bateria de lâminas testadas. 6. Cobrir cada poço com uma amostra diluída ou controles (aproximadamente 10-20 µl por poço). 7. Incubar em uma câmara úmida a 23 +/- 2oC por 30 minutos. 8. Enxaguar as lâminas rapidamente com um leve jato de PBS. Não jogar direto nos poços. 9. Enxaguar as lâminas completamente por 7 minutos em uma travessa de coloração do PBS. Trocar o tampão e lavar uma vez mais por 8 minutos. Manusear as lâminas levemente. É necessária uma leve agitação do tampão para a lavagem eficiente da lâmina. 10.Secar o lado pintado da lâmina com o mata-borrão fornecido. Não deixar os poços secarem antes da adição do conjugado. 11.Cobrir cada poço com uma gota (~ 10 µl) do Conjugado FITC. 12.Incubar em uma câmara úmida a 23 +/- 2oC por 30 minutos. Proteger da luz intensa. 13.Repetir os passos 8 e 9. Secar o lado pintado da lâmina com o mata-borrão, não deixar os poços secarem antes da adição do glicerol. 14. Colocar uma pequena gota do Glicerol Tamponado em cada poço e cobrir com uma lamínula. 15. Para melhores resultados, as lâminas deverão ser lidas imediatamente em um aumento de 200-500 X. Alternativamente, as lâminas podem ser lidas dentro de 24 horas. Porém, elas deverão ser armazenadas de 2 - 8oC no escuro, e seladas para prevenir a secagem do fluido de montagem. C - CRITÉRIO PARA A GRADUAÇÃO DA INTENSIDADE DE FLUORESCÊNCIA 4+ 3+ 2+ 1+ 0 Fluorescência verde-maçã brilhante. Fluorescência verde-maçã luminoso. Fluorescência verde-maçã claro distinguível. Fluorescência verde-maçã escuro, mudando a forma, mas legível. Nenhuma fluorescência ou fluorescência discretamente visível. D - GUIA PARA CARACTERIZAR A FLUORECÊNCIA 4 HERPES 1 IFA Fluorescência associada a HSV-1 Uma reação de anticorpos HSV-1 positiva é identificada pela presença de inclusões de fluorescência verde-maçã nos núcleos e/ou no citoplasma de células infectadas. Fluorescência Não-Específica Toda a célula, infectada e não infectada, exibe fluorescência verde-maçã: no núcleo, citoplasma ou ambas. Uma reação produzida por um estado de doença não relacionada ou em conjunto com uma infecção por HSV-1, por exemplo, anticorpo antinuclear ou anticorpo antimitocondrial deverão ser considerados.20,21 Nenhuma Fluorescência Ausência de fluorescência ou menos que 1+ no núcleo e/ou citoplasma de células infectadas. Nota: Nas determinações quantitativas, o título de ponto final é a diluição mais alta que apresenta uma fluorescência de 1+ nas inclusões. ORIENTAÇÕES SOBRE OS PROCEDIMENTOS DE LEITURA ESPECIFICAÇÕES DO MICROSCÓPIO Os sistemas de comparação de filtro são mostrados abaixo: Fluorescência da luz transmitida: Fonte de Luz Vapor de Mercúrio 200W 50W Tungstenio Halogênio 50W 100W Fluorescência da luz incidente: Fonte de Luz Vapor de mercúrio 200W 100W 50W Filtro de Excitação KP490 + BG 38 (4 mm) ou BG 12 (4 mm) + BG 38 (4 mm) KP 490 + BG 38 (4 mm) Filtro de Excitação KP500 + BG 38 (4 mm) ou BG 23 (4 mm) para a supressão vermelha mais forte. Filtro de canto de 450 nm, 480 nm para banda de excitação estreita, supressão da série de autofluorescência. KP500 + BG 38 (4 mm) Tungstênio Halogenio 50W 100W INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS Filtro de Barreira KP510, K530 KP510, K515, K530 Raio dicroico de espelho dividido TK510 Filtro de Barreira K510 K530 TK510 K510 K515 K530 Para determinar a possibilidade de reações falso negativas causados pelo excesso de anticorpos HSV no soro teste (efeito prozona), deverão ser examinadas dilluições 1:10 e 1:100 da amostra. Uma reação negativa a 1:10 pode ser devido a níveis excessivamente altos de anticorpos específicos de HSV. A diluição de 1:100 irá determinar se é uma reação falso negativa ou uma reação negativa verdadeira. Resultado Significado 5 HERPES 1 IFA Pesquisa: Nenhuma Fluorescência ou intensidade de fluorescência < 1 + a diluição de 1:10 Nenhum anticorpo de HSV-1 IgG detectável Fluorescência > 1 + a 1:10 ou maior em uma única amostra de soro. Positivo pela IF para os anticorpos do HSV-1 IgG Nenhuma fluorescência ou intensidade de Positivo pelo método de IF para anticorpos fluorescência <1 + à diluição 1:10 mas fluorescência > HSV-1 IgG. Tais indivíduos são suspeitos de 1 + à diluição 1:100 ou maior. terem sido infectados previamente com HSV-1. Para confirmar infecção aguda, são requeridas amostras pareadas. A primeira amostra (aguda) deverá ser colhida logo após os sinais clínicos da infecção. A segunda amostra (convalescente) deverá ser colhida dentro de 10-14 dias da primeira. Ambas as amostras devem ser testadas ao mesmo tempo usando o mesmo lote de reagentes . Soros Pareados Uma diferença de uma diluição dupla ou menos no título de ponto final das amostras de soro pareadas colhidas de 10 - 14 dias separadas. Aumento no título de 4 diluições ou mais das amostras de soro pareadas colhidas com 10 - 14 dias de intervalo. Nenhuma evidência de infecção recente ou corrente. Diagnóstico para infecção recente ou corrente. LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO 1. Os procedimentos do teste de HSV-1 VIRGO e a interpretação dos resultados devem ser seguidos à risca para obtenção de resultados confiáveis. 2. O anticorpo IgG tem apresentado um rápido aumento no curso da infecção por HSV-1. Um aumento de quatro etapas no título pode ser dependente da obtenção do primeiro soro ser muito recente no curso da infeção. 3. A infecção do HSV de células cultivadas in vitro tem apresentado uma indução na produção de um receptor para a porção Fc das moléculas de IgG nas células infectadas. Este receptor não está relacionado à presença (ou ausência) de anticorpos específicos de HSV.22-27 As lâminas do kit da VIRGO foram tratadas para minimizar a reatividade da Fc. 4. Os antígenos do HSV-1 e HSV-2 são comuns28-31. Por esta razão, a detecção do anticorpo para um tipo, por ex. Tipo 1, pode não ser diagnóstico para uma infecção do Tipo 1 a menos que o soro não apresente nenhum título de anticorpo para o tipo heterólogo. 5. A presença do anticorpo detectável no soro do paciente em um ou em ambos tipos de virus do herpes simples pode ou não pode conferir imunidade ou tem um efeito protetor em um ou ambos os tipos de infecção ou reinfecção pelo virus do herpes simples 29,31,32. A reinfecção e/ou infecção crônica em alguns indivíduos é muito comun. A detecção de um título de anticorpo muito alto para outros tipos de herpes não deverá ser usado como critério único ou determinante de agente primário ou infectante a menos que o título do anticorpo para o tipo de virus heterólogo seja negativo. O fato dos antígenos serem comuns, a infecção com um tipo de HSV na presença do anticorpo para o tipo heterólogo, pode produzir uma resposta anamnéstica do anticorpo pré-existente, causando o título do anticorpo pré-existente que se torna mais elevado que o título do anticorpo do agente infectante da infecção corrente. 6. A falta de um aumento significativo no título de anticorpos não exclui a possibilidade de infecção por HSV-1. 7. Uma forte resposta imune à infecção pode causar uma reação negativa de IF a uma diluição de 1:10 devido a níveis excessivamente altos de anticorpos específicos do HSV (efeito prozona). Para anular este efeito, as amostras diluídas de 1:10 e 1:100 deverão ser examinadas. A diluição de 1:100 irá demonstrar se a reação é um falso negativo devido ao efeito prozona. 8. Quando medir os níveis de anticorpos IgG, os resultados positivos em neonatos deverão ser interpretados com cuidado uma vez que o anticorpo materno é transferido passivamente da mãe 6 HERPES 1 IFA para o feto antes do nascimento. Os ensaios de IgM são geralmente indicadores mais úteis de infecção em crianças abaixo de seis meses. 9. Os resultados deste teste deverão ser interpretados juntamente com outros achados clínicos e procedimentos diagnósticos. CONTROLE DE QUALIDADE 1. Os Soros Controle são representativos de reações positivas e negativas. Na diluição de pesquisa, o Controle Positivo representa uma forte reação (3 - 4+). Se a intensidade de fluorescência do Controle Positivo for menor que a faixa aceitável, o teste é inválido e deverá ser repetido. 2. Cada lote do Controle Positivo deve ser titulado em uma diluição ponto final. O título ponto final deverá estar dentro de +/- duas diluições seriais de duplo passo do título do Controle Positivo reportado na nota de diluição 1+ do kit de IF HSV-1 Hemagen VIRGO. Se os resultados obtidos estiverem fora da faixa, o teste é inválido e deverá ser repetido. 3. Na diluição de pesquisa, o Controle Negativo não deverá apresentar uma fluorescência verde-maçã. Se for observada uma fluorescência verde-maçã, o teste é inválido e deverá ser repetido. 4. Os resultados do Controle de Qualidade foram obtidos em um microscópio equipado Nikon® por epiiluminação com uma lâmpada ARC de mercúrio de 50W HBO, sistema de filtro B para FITC e uma objetiva seca de 40X (NA 0,65). Diferenças na reatividade de ponto final e intensidade de fluorescência pode ser afetado pelo tipo e condição de fluorescência do equipamento usado (ver especificações do Microscópio). CARACTERÍSTICAS DO DESEMPENHO Estudo de Reprodutibilidade Teste de Imunofluorescência Indireta (IF) para a detecção do anticorpo do HSV Tipo 1 e HSV Tipo 2 no soro humano. Os seguintes dados foram gerados na empresa para determinar a reprodutibilidade do teste de IF para a detecção do Herpes hominis, anticorpos Tipo 1 e Tipo 2. Vinte e seis (26) amostras de soro de indivíduos aparentemente normais foram aliquotados em tres (3) frascos e rotulados com um código. Foram feitas tres (3) técnicas de testes das alíquotas codificadas em dois dias separados. Todas as amostras foram pesquisadas a 1:10 e 1:100. A amostra positiva a 1:100 foi testada a 1:1000. A intensidade de fluorescência menor que 1+ foi registrada como “negativo”. Os resultados são os seguintes: HSV-1 Número da amostra 1-1101 2-1105 3-1108 4-1125 5-1132 6-1137 7-1165 8-1188 9-1203 10-1211 11-1218 12-1221 13-1225 < 1:10 5 > 1:10 1 1 >1:100 5 HSV-2 >1:1000 6 6 6 < 1:10 1 5 5 > 1:10 5 1 6 1 6 6 1 6 5 6 6 6 6 2 6 6 1 6 6 7 HERPES 1 IFA >1:100 >1:1000 14-1237 15-1248 16-1269 17-1270 18-1289 19-1119 20-1162 21-1168 22-1272 23-1290 24-1297 25-1209 26-1182 6 5 6 6 1 6 6 6 6 6 4 1 6 1 6 4 1 6 1 6 4 2 6 2 6 5 6 6 1 2 5 6 5 4 1 Sensibilidade Comparativa O teste de Fixação de Complemento (FC) é correntemente o método mais usado para a determinação dos níveis de anticorpos do Herpes Simples no soro humano. Os seguintes dados foram gerados para determinar a sensibilidade do sistema de IF: Comparação da sensibilidade do teste de FC versus IF Título de IF Número Número da Amostra Título de FC 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 2000 2094 2138 2185 2205 2278 2288 2417 2445 2555 2555-1 2606 2657 2749 3046 3098 3348 3456-6 478 3479 3565 3668 3712 3721 3943 Negativo 3 128 64 128 64 128 32 64 8 Negativo 16 32 Negativo 128 16 8 128/256 32 64 8 16 8 32 64 8 HERPES 1 IFA HSV-1 16 128 256 512 256 128 1024 128 512 64 16 128 12 <4 25 128 64 1024 128 64 16 128 512 64 128 HSV-2 32 256 128 128 256 64 256 64 512 16 16 32 64 <4 256 32 32 256 64 128 16 32 128 64 64 26 27 28 29 30 31 32 33 34 4016 4070 4085 4110 4239 4279 4317 4319 4425 Negativo 16 Negativo 64 8 32 32 16 128 32 64 <4 128 64 128 128 64 128 8 32 <64 128 64 128 64 32 64 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Becker, TM, JH Blount, ME Guinan. 1985. 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Rua Doutor Diogo de Faria, 109 – Vila Clementino São Paulo - SP - CEP 04037-000 Fone: (011) 3819-5222. Fax: (011) 3816-7623 CGC: 64.002.686/0013-2 Resp. Técnico: Dhália Gutemberg CRF 07.183 - SP HEMAGEN DIAGNOSTICS, INC. VIRGO® PRODUCTS DIVISION Columbia, Maryland 21045 - USA Fone: (800) 436-2436 ou 617-890-3748. SERVIÇO DE ATENDIMENTO AO CLIENTE Quaisquer dúvidas técnicas, no manuseio deste kit ou no seu procedimento entrar em contato com a ASSESSORIA CIENTÍFICA DA HEMAGEN DIAGNÓSTICOS, que estará sempre à disposição para auxiliar quando ocorrerem dificuldades na utilização de seus produtos. Contacte a HEMAGEN através do seguinte endereço: HEMAGEN DIAGNÓSTICOS COM. IMP. EXP. LTDA. Rua Doutor Diogo de Faria, 109 – Vila Clementino São Paulo - SP - CEP 04037-000 10 HERPES 1 IFA Fone: (011) 3819-5222. Fax: (011) 3816-7623 DATA DA REVISÃO DAS INSTRUÇÕES DE USO Documento Revisado em: - Março de 2014. RESUMO DO KIT DE HSV-1 IgG DA VIRGO IMPORTANTE: É recomendado que se esteja familiarizado com o procedimento detalhado nas instruções de uso antes de usar este resumo. Cobrir os poços com as diluições de 1:10 e 1:100 das amostras e controles. Para a determinação quantitativa, preparar diluições seriadas de duas etapas. Incube as lâminas em câmara úmida a 23 +/- 2oC por 30 minutos. Enxaguar as lâminas rapidamente com PBS. Lavar por 15 minutos, trocando o tampão 1 vez. Enxugar as lâminas. Cobrir cada poço com o conjugado FITC. Incubar as lâminas em uma câmara úmida à 23 +/- 2oC por 30 minutos. Repetir o passo de lavagem descrito acima. Colocar uma pequena gota do Glicerol Tamponado em cada poço e cobrircom uma lamínula. Ler as lâminas imediatamente de 200-500X de aumento em um microscópio de fluorescência. 11 HERPES 1 IFA