Bula - Hemagen

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INSTRUÇÕES DE USO
HEMAGEN®VIRGO
HERPES SIMPLES TIPO 1 (HSV-1) IgG - Imunofluorescência
Cat. No. 902500 - 96 testes (12x8)
Cat. No. 902506 - 200 testes (25x8)
USO DO PRODUTO
O teste de Herpes Simples Tipo 1 - HSV-1 - IgG Hemagen® VIRGO® por imunofluorescência
indireta é usado para a detecção e titulação dos anticorpos IgG do Vírus do Herpes Simples Tipo 1 no
soro humano.
Podem ser usados soros pareados, agudo e convalescente para demonstrar a soroconversão ou um
aumento significativo nos níveis de anticorpo, como uma ajuda no diagnóstico de uma infecção recente
ou corrente (primária ou reinfecção recorrente/reativação) com o vírus do herpes simples. Devido à
reação cruzada de antígenos comuns , ambos os ensaios HSV-1 e HSV-2 deverão ser ensaiados em
conjunto para total avaliação da condição de anticorpos de uma pessoa. Os ensaios de HSV-1 ou HSV2 não deverão ser usados sozinhos.
RESUMO, EXPLICAÇÃO E PRINCÍPIO DO TESTE
A percepção aumentada de viroses por herpes simples (HSV) por profissionais médicos e o público é
devido a muitos fatores. Cinco fatores parecem ser primariamente importantes. Primeiro, há a
epidemia corrente de infecções por herpes sexualmente transmitidas1. Segundo, há associada com o
aumento na infecção de herpes sexualmente transmitida, um aumento em infecções de HSV em
neonatais2. Terceiro, tem sido detectado HSV em pacientes seguidos de transplantes de órgãos 3,4.
Quarto, tem sido reportado detecção de HSV em pacientes imunodeprimidos 5. Finalmente, como
medida defensiva contra as futuras infecções difundidas de HSV tem sido desenvolvida terapias
específicas antivirais para HSV6.
Embora a primeira descrição clínica do herpes labial tenha ocorrido durante a época de Hipocrates 7, o
herpes genital não foi descrito até 17368 na França por Astnuc, o médico do rei. Nos tempos modernos,
o agente causador tem mostrado pertencer até o momento a dois tipos distintos de vírus, HSV-1 e HSV2, que diferem em seus padrões clínicos e epidemiológicos. Ambos os tipos são caracteristicamente de
rápido crescimento, vírus citolíticos que permanecem dormentes nas células glanglionares neurais até
serem reativados. Sorologicamente, muitas das imunidades humorais são direcionadas a tipos de
antígenos comuns; entretanto, a resposta a um tipo específico de anticorpo permite diferenciação de
infecções ao Tipo 1 e 29.
O vírus do herpes simples é um membro do grupo herpesvirus que inclui Varicela-Zoster,
citomegalovirus e Epstein-Barr vírus. A replicação do vírus ocorre dentro do núcleo das células e é
completada na lise da célula. A distinção dos membros do grupo do herpesvirus pode ser acompanhada
pela análise antigênica e definição das propriedades biológicas10. Nos tempos recentes, a subdivisão do
HSV em tipos específicos tem se tornado possível.
É estimado que a qualquer época, entre 0,65 e 15 porcento de todos os adultos podem expelir HSV-1
ou HSV-211. As taxas de infecção parecem ser inversamente relacionadas ao estado sócio econômica 12.
Somente de 30 - 50 porcento dos adultos de grupos sócio econômicos mais altos têm anticorpos HSV
enquanto de 80 - 100 porcento dos grupos sócio econômico mais baixos têm anticorpos específicos.
Isto é provavelmente devido às condições de vida mais aglomeradas nos últimos grupos.
O HSV-1 é principalmente difundido de secreções orais a outras áreas da pele e ocorrem
freqüentemente infecções recorrentes. Na entrada dos sítios da pele, o vírus do herpes simples duplica e
instiga uma resposta inflamatória local.
A infecção primária de HSV-1 é freqüentemente assintomática, mas ocorrem irritações ocasionais
menos importantes das gengivas, garganta e/ou olhos. Infecções recorrentes de HSV-1 são geralmente
mais dolorosas e tem sérias implicações.
Ocasionalmente, acredita-se que o HSV-1 seja o principal agente causador das encefalites por herpes
simples13.
As terapias antivirais têm sido desenvolvidas para tratar indivíduos infectados com HSV-1. Várias
medidas preventivas podem diminuir a velocidade do HSV-1, tais como o uso de luvas pelo pessoal
1
HERPES 1 IFA
médico, isolamento de indivíduos infectados e a prática de sexo seguro. As técnicas sorológicas podem
ser úteis no diagnóstico de infecções primárias por HSV14.
O teste de HSV-1 de IF VIRGO fabricado pela Hemagen Divisão VIRGO fornece todos os reagentes
necessários para uma rápida determinação do anticorpo do HSV-1 no soro humano. O substrato
antigênico, soro controle, conjugado FITC, tampão, lamínula e instruções de uso estão inclusos no kit.
Princípio do Teste
O ensaio de anticorpos fluorescente VIRGO utiliza o método indireto de impregnação de anticorpo
fluorescente, descrito pela primeira vez por Weller e Coons em 1954 15. O procedimento é realizado em
dois passos de reações básicas. No passo um, o soro humano a ser testado entra em contato com o
substrato antigênico. O anticorpo, se presente no soro teste, irá ligar ao antígeno, formando um
complexo antígeno-anticorpo. Se o soro a ser testado não contém anticorpo a este antígeno particular,
não é formado nenhum complexo e todos os componentes do soro são removidos no passo de lavagem.
O segundo passo envolve a adição de um anticorpo anti-humano marcado com fluoresceína aos poços
de teste. Se o complexo antígeno-anticorpo específico é formado no passo um, o anticorpo marcado
com fluoresceína irá ligar à metade do anticorpo do complexo no passo dois. Uma reação positiva,
verde-maçã fluorescente brilhante, pode ser vista com a ajuda de um microscópio de fluorescência.
Princípio do teste de Anticorpo Fluorescente Indireto.
Passo 1
Antígeno (Substrato)
na lâmina
+
Anticorpo específico = Complexo Antígeno-Anticorpo
Passo 2
Anticorpo-Antígeno + Anticorpo anti-humano marcado
com Fluoresceína
= Fluorescência
MATERIAIS FORNECIDOS
Quantidade de teste
96 Testes
200 Testes
902500
902506
12 (8 poços)
25 (8 poços)
01 frasco
01 frasco
01 frasco
01 frasco
01 frasco
02 frascos
03 pacotes
01 frasco
02 pacotes
05 pacotes
01 frasco
03 pacotes
Conteúdo
Lâminas infectadas com HSV-1 e células não infectadas.
Frasco de Controle Positivo contendo soro humano liofilizado.
Frasco de Controle Negativo contendo soro humano liofilizado.
Conjugado FITC contendo IgG anti-humano de cabra inativado
(cadeias leve e pesada) liofilizado, com contra-corante.
*Tampão Fosfato (PBS) em pó, com pH 7,4 +/- 0,2.
*Contendo 2 ml de Glicerol tamponado.
*Contendo 5 mata-borrões cada.
* Estes componentes podem ser trocados entre diferentes lotes.
MATERIAIS REQUERIDOS MAS NÃO FORNECIDOS




Tubos de testes e estantes para fazer as diluições.
Pipetas para a preparação das diluições.
Lamínulas de 22 x 50 mm, No.1 de espessura.
Câmara úmida.
2
HERPES 1 IFA
 Agitador magnético de placa (opcional).
 Travessa de coloração e estante com suporte de lâmina.
 Microscópio de fluorescência. Referir ao manual de instrução do fabricante para que o sistema de
filtro dê ótimos resultados para o FITC (Comprimento de excitação máxima = 490 nm.
Comprimento de emissão média = 520 nm).
Estes materiais podem ser obtidos nas lojas e/ou empresas que vendem produtos e acessórios para
laboratório.
ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE
1. Armazenar o kit de 2 a 8oC. O pó de PBS, o Diluente e o Glicerol Tamponado podem ser
armazenados de 2 a 30 oC se desejado. O kit de teste pode ser usado até a data de expiração escrita
no lado externo da caixa.
2. Após a hidratação: O Controle Positivo, Controle Negativo, e Conjugado FITC deverão ser
armazenados de 2 a 8 oC, ou divididos em alíquotas e armazenados a - 20 oC ou menos.
NOTA: Foram tomadas precauções na fabricação deste produto para proteger os reagentes de
contaminação. Após a reconstituição, deverão ser tomados cuidados para proteger os reagentes
deste kit de contaminação. Se for mantida uma temperatura constante de armazenamento, os
reagentes e substratos deverão ser estáveis até o período de vencimento do kit.
CUIDADOS E PRECAUÇÕES
1. Este kit é somente para uso diagnóstico in vitro.
2. Manusear todas as amostras do ensaio, lâminas, controles positivo e negativo como se fossem
capazes de transmitir agentes infecciosos.
Todos os
componentes de sangue humano do kit foram testados por métodos aprovados pelo FDA e
apresentou-se negativo para antígeno de superfície da hepatite B (HBsAg) e para anticorpos ao
vírus tipo 1 da imunodeficiência humana HIV-1. Como nenhum método pode oferecer completa
segurança de que os vírus do HIV, hepatite B e outros agentes infecciosos estão ausentes, as
amostras e os reagentes do kit deverão ser manuseados no Nível 2 de Biosegurança, como
recomendado para qualquer soro humano ou amostra de sangue potencialmente infeccioso. 16,17
3. Os substratos antigênicos são fixados em acetona.
4. Não pipetar com a boca.
5. Não fumar, comer, ou beber em áreas onde as amostras ou reagentes do kit são manuseadas.
6. Todos os materiais usados neste ensaio, incluindo reagentes, amostras e materiais de limpeza
deverão ser descartados de uma maneira que irá inativar os agentes infecciosos.
7. Não usar o kit ou os reagentes individuais além das suas datas de expiração marcadas.
8. Os componentes do kit foram testados como uma unidade. Não trocar os componentes de outras
fontes ou de diferentes lotes, exceto quando anotado.
9. Proteger o conjugado de exposição prolongada à luz.
COLETA, ARMAZENAMENTO E MANUSEIO DA AMOSTRA
1. As amostras de soro podem ser armazenadas à temperatura ambiente até 24 horas. Por um período
mais longo, podem ser armazenados de 2 a 8oC (por até 3 dias), ou congelados a -20 ºC ou mais
frio. Colocar a 37 oC até que a amostra seja descongelada. Remover e misturar bem antes do uso.
Não é recomendado o autodegelo. Evitar ciclos múltiplos de congelamentos e descongelamentos 18.
2. A ótima execução do kit Hemagen VIRGO HSV-1 IgG IF depende do uso de amostras de soro
frescas. As amostras deverão ser colhidas assepticamente. A separação rápida do coágulo previne a
hemólise do soro19. Não deverá ser adicionado nenhum anticoagulante ou preservativo.
3. Para melhores resultados, deverá ser colhida uma nova amostra se houver a presença de
contaminação bacteriana ou lípides. Se não for obtida uma nova amostra, é requerida uma filtração
(0,45µ) ou centrifugação (aproximadamente 3000 x G por 10 minutos).
4. O excesso de lípides no soro teste pode produzir uma reação de “filmagem”. Os lípides “fixam” não
especificamente no vidro e são extremamente difíceis de remover. A experiência irá habilitar o
técnico a diferenciar esta reação de “filme” da reação específica.
5. Ocasionalmente, as amostras podem conter certas enzimas proteolíticas que atacam e digerem o
substrato. Isto é devido especialmente a amostras contaminadas com microorganismos. Tais
3
HERPES 1 IFA
amostras podem ser aquecidas à 56 oC por 30 minutos. Se isto não ocasionar a redução da atividade
enzimática, deverá ser obtida uma outra amostra de paciente.
PROCEDIMENTO DO TESTE
A - PREPARAÇÃO DOS REAGENTES
Deixar todos os reagentes e lâminas atingirem a temperatura ambiente por 15 a 30 minutos antes
do uso.
1. Lâminas e Glicerol: Prontos para o uso.
2. PBS: Dissolver o conteúdo de um pacote em 1 litro de água destilada ou deionizada. Fechar o
recipiente para prevenir contaminação ou evaporação.
3. Controles: Reidratar com 1,0 ml do PBS. Os controles estão agora a uma diluição de 1:10.
Aliquotar e armazenar a -20 oC.
4. Conjugado: Reidratar com 2,0 ml de PBS. Armazenar de 2 - 8oC ou aliquotar e armazenar a -20 oC
ou menos se não for usado dentro de uma semana.
B - PROCEDIMENTO
As amostras podem conter agentes infecciosos, portanto deverão ser manuseadas com cuidado.
Para obter ótimos resultados NÃO deixar os poços do substrato secarem enquanto executa o
teste.
1. Remover as lâminas e os reagentes requeridos do refrigerador e deixe-os atingir a temperatura
ambiente (15 a 30 minutos).
2. Remova as lâminas da embalagem apenas antes do uso e rotule.
3. Reidrate os controles para preparar a diluição de 1:10. Estes são agora representativos de padrões de
fluorescência positivo e negativo típico.
4. Dilua as amostras com PBS a diluições de 1:10 e 1:100 ou prepare diluições seriadas para a
determinação quantitativa.
5. É necessário testar 1 Controle Positivo, 1 Controle Negativo e um Controle de Tampão PBS para
cada bateria de lâminas testadas.
6. Cobrir cada poço com uma amostra diluída ou controles (aproximadamente 10-20 µl por
poço).
7. Incubar em uma câmara úmida a 23 +/- 2oC por 30 minutos.
8. Enxaguar as lâminas rapidamente com um leve jato de PBS. Não jogar direto nos poços.
9. Enxaguar as lâminas completamente por 7 minutos em uma travessa de coloração do PBS.
Trocar o tampão e lavar uma vez mais por 8 minutos. Manusear as lâminas levemente. É
necessária uma leve agitação do tampão para a lavagem eficiente da lâmina.
10.Secar o lado pintado da lâmina com o mata-borrão fornecido. Não deixar os poços secarem antes
da adição do conjugado.
11.Cobrir cada poço com uma gota (~ 10 µl) do Conjugado FITC.
12.Incubar em uma câmara úmida a 23 +/- 2oC por 30 minutos. Proteger da luz intensa.
13.Repetir os passos 8 e 9. Secar o lado pintado da lâmina com o mata-borrão, não deixar os
poços
secarem antes da adição do glicerol.
14. Colocar uma pequena gota do Glicerol Tamponado em cada poço e cobrir com uma lamínula.
15. Para melhores resultados, as lâminas deverão ser lidas imediatamente em um aumento de 200-500
X. Alternativamente, as lâminas podem ser lidas dentro de 24 horas. Porém, elas deverão ser
armazenadas de 2 - 8oC no escuro, e seladas para prevenir a secagem do fluido de montagem.
C - CRITÉRIO PARA A GRADUAÇÃO DA INTENSIDADE DE FLUORESCÊNCIA
4+
3+
2+
1+
0
Fluorescência verde-maçã brilhante.
Fluorescência verde-maçã luminoso.
Fluorescência verde-maçã claro distinguível.
Fluorescência verde-maçã escuro, mudando a forma, mas legível.
Nenhuma fluorescência ou fluorescência discretamente visível.
D - GUIA PARA CARACTERIZAR A FLUORECÊNCIA
4
HERPES 1 IFA
Fluorescência associada a HSV-1
Uma reação de anticorpos HSV-1 positiva é identificada pela presença de inclusões de fluorescência
verde-maçã nos núcleos e/ou no citoplasma de células infectadas.
Fluorescência Não-Específica
Toda a célula, infectada e não infectada, exibe fluorescência verde-maçã: no núcleo, citoplasma ou
ambas. Uma reação produzida por um estado de doença não relacionada ou em conjunto com uma
infecção por HSV-1, por exemplo, anticorpo antinuclear ou anticorpo antimitocondrial deverão ser
considerados.20,21
Nenhuma Fluorescência
Ausência de fluorescência ou menos que 1+ no núcleo e/ou citoplasma de células infectadas.
Nota: Nas determinações quantitativas, o título de ponto final é a diluição mais alta que apresenta uma
fluorescência de 1+ nas inclusões.
ORIENTAÇÕES SOBRE OS PROCEDIMENTOS DE LEITURA
ESPECIFICAÇÕES DO MICROSCÓPIO
Os sistemas de comparação de filtro são mostrados abaixo:
Fluorescência da luz transmitida:
Fonte de Luz
Vapor de Mercúrio
200W
50W
Tungstenio Halogênio
50W
100W
Fluorescência da luz incidente:
Fonte de Luz
Vapor de mercúrio
200W
100W
50W
Filtro de Excitação
KP490 + BG 38
(4 mm) ou BG 12 (4 mm) +
BG 38 (4 mm)
KP 490 + BG 38
(4 mm)
Filtro de Excitação
KP500 + BG 38 (4 mm) ou
BG 23 (4 mm) para a
supressão vermelha mais
forte. Filtro de canto de 450
nm, 480 nm para banda de
excitação estreita, supressão
da série de autofluorescência.
KP500 + BG 38 (4 mm)
Tungstênio Halogenio
50W
100W
INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
Filtro de Barreira
KP510, K530
KP510, K515, K530
Raio dicroico
de espelho dividido
TK510
Filtro de
Barreira
K510
K530
TK510
K510
K515
K530
Para determinar a possibilidade de reações falso negativas causados pelo excesso de anticorpos HSV no
soro teste (efeito prozona), deverão ser examinadas dilluições 1:10 e 1:100 da amostra. Uma reação
negativa a 1:10 pode ser devido a níveis excessivamente altos de anticorpos específicos de HSV. A
diluição de 1:100 irá determinar se é uma reação falso negativa ou uma reação negativa verdadeira.
Resultado
Significado
5
HERPES 1 IFA
Pesquisa:
Nenhuma Fluorescência ou intensidade de
fluorescência < 1 + a diluição de 1:10
Nenhum anticorpo de HSV-1 IgG detectável
Fluorescência > 1 + a 1:10 ou maior em uma única
amostra de soro.
Positivo pela IF para os anticorpos do HSV-1
IgG
Nenhuma fluorescência ou intensidade de
Positivo pelo método de IF para anticorpos
fluorescência <1 + à diluição 1:10 mas fluorescência > HSV-1 IgG. Tais indivíduos são suspeitos de
1 + à diluição 1:100 ou maior.
terem sido infectados previamente com
HSV-1.
Para confirmar infecção aguda, são requeridas amostras pareadas. A primeira amostra (aguda) deverá
ser colhida logo após os sinais clínicos da infecção. A segunda amostra (convalescente) deverá ser
colhida dentro de 10-14 dias da primeira. Ambas as amostras devem ser testadas ao mesmo tempo
usando o mesmo lote de reagentes .
Soros Pareados
Uma diferença de uma diluição dupla ou menos no
título de ponto final das amostras de soro pareadas
colhidas de 10 - 14 dias separadas.
Aumento no título de 4 diluições ou mais das
amostras de soro pareadas colhidas com 10 - 14 dias
de intervalo.
Nenhuma evidência de infecção recente ou corrente.
Diagnóstico para infecção recente ou corrente.
LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
1. Os procedimentos do teste de HSV-1 VIRGO e a interpretação dos resultados devem ser seguidos à
risca para obtenção de resultados confiáveis.
2. O anticorpo IgG tem apresentado um rápido aumento no curso da infecção por HSV-1. Um
aumento de quatro etapas no título pode ser dependente da obtenção do primeiro soro ser muito
recente no curso da infeção.
3. A infecção do HSV de células cultivadas in vitro tem apresentado uma indução na produção de um
receptor para a porção Fc das moléculas de IgG nas células infectadas. Este receptor não está
relacionado à presença (ou ausência) de anticorpos específicos de HSV.22-27 As lâminas do kit da
VIRGO foram tratadas para minimizar a reatividade da Fc.
4. Os antígenos do HSV-1 e HSV-2 são comuns28-31. Por esta razão, a detecção do anticorpo para um
tipo, por ex. Tipo 1, pode não ser diagnóstico para uma infecção do Tipo 1 a menos que o soro não
apresente nenhum título de anticorpo para o tipo heterólogo.
5. A presença do anticorpo detectável no soro do paciente em um ou em ambos tipos de virus do
herpes simples pode ou não pode conferir imunidade ou tem um efeito protetor em um ou ambos os
tipos de infecção ou reinfecção pelo virus do herpes simples 29,31,32. A reinfecção e/ou infecção
crônica em alguns indivíduos é muito comun. A detecção de um título de anticorpo muito alto para
outros tipos de herpes não deverá ser usado como critério único ou determinante de agente primário
ou infectante a menos que o título do anticorpo para o tipo de virus heterólogo seja negativo. O fato
dos antígenos serem comuns, a infecção com um tipo de HSV na presença do anticorpo para o tipo
heterólogo, pode produzir uma resposta anamnéstica do anticorpo pré-existente, causando o título
do anticorpo pré-existente que se torna mais elevado que o título do anticorpo do agente infectante
da infecção corrente.
6. A falta de um aumento significativo no título de anticorpos não exclui a possibilidade de infecção
por HSV-1.
7. Uma forte resposta imune à infecção pode causar uma reação negativa de IF a uma diluição de 1:10
devido a níveis excessivamente altos de anticorpos específicos do HSV (efeito prozona). Para
anular este efeito, as amostras diluídas de 1:10 e 1:100 deverão ser examinadas. A diluição de 1:100
irá demonstrar se a reação é um falso negativo devido ao efeito prozona.
8. Quando medir os níveis de anticorpos IgG, os resultados positivos em neonatos deverão ser
interpretados com cuidado uma vez que o anticorpo materno é transferido passivamente da mãe
6
HERPES 1 IFA
para o feto antes do nascimento. Os ensaios de IgM são geralmente indicadores mais úteis de
infecção em crianças abaixo de seis meses.
9. Os resultados deste teste deverão ser interpretados juntamente com outros achados clínicos e
procedimentos diagnósticos.
CONTROLE DE QUALIDADE
1. Os Soros Controle são representativos de reações positivas e negativas. Na diluição de pesquisa, o
Controle Positivo representa uma forte reação (3 - 4+). Se a intensidade de fluorescência do
Controle Positivo for menor que a faixa aceitável, o teste é inválido e deverá ser repetido.
2. Cada lote do Controle Positivo deve ser titulado em uma diluição ponto final. O título ponto final
deverá estar dentro de +/- duas diluições seriais de duplo passo do título do Controle Positivo
reportado na nota de diluição 1+ do kit de IF HSV-1 Hemagen VIRGO. Se os resultados obtidos
estiverem fora da faixa, o teste é inválido e deverá ser repetido.
3. Na diluição de pesquisa, o Controle Negativo não deverá apresentar uma fluorescência verde-maçã.
Se for observada uma fluorescência verde-maçã, o teste é inválido e deverá ser repetido.
4. Os resultados do Controle de Qualidade foram obtidos em um microscópio equipado Nikon® por
epiiluminação com uma lâmpada ARC de mercúrio de 50W HBO, sistema de filtro B para FITC e
uma objetiva seca de 40X (NA 0,65). Diferenças na reatividade de ponto final e intensidade de
fluorescência pode ser afetado pelo tipo e condição de fluorescência do equipamento usado (ver
especificações do Microscópio).
CARACTERÍSTICAS DO DESEMPENHO
Estudo de Reprodutibilidade
Teste de Imunofluorescência Indireta (IF) para a detecção do anticorpo do HSV Tipo 1 e HSV Tipo 2
no soro humano.
Os seguintes dados foram gerados na empresa para determinar a reprodutibilidade do teste de IF para a
detecção do Herpes hominis, anticorpos Tipo 1 e Tipo 2.
Vinte e seis (26) amostras de soro de indivíduos aparentemente normais foram aliquotados em tres (3)
frascos e rotulados com um código. Foram feitas tres (3) técnicas de testes das alíquotas codificadas em
dois dias separados. Todas as amostras foram pesquisadas a 1:10 e 1:100. A amostra positiva a 1:100
foi testada a 1:1000. A intensidade de fluorescência menor que 1+ foi registrada como “negativo”.
Os resultados são os seguintes:
HSV-1
Número da
amostra
1-1101
2-1105
3-1108
4-1125
5-1132
6-1137
7-1165
8-1188
9-1203
10-1211
11-1218
12-1221
13-1225
< 1:10
5
> 1:10
1
1
>1:100
5
HSV-2
>1:1000
6
6
6
< 1:10
1
5
5
> 1:10
5
1
6
1
6
6
1
6
5
6
6
6
6
2
6
6
1
6
6
7
HERPES 1 IFA
>1:100
>1:1000
14-1237
15-1248
16-1269
17-1270
18-1289
19-1119
20-1162
21-1168
22-1272
23-1290
24-1297
25-1209
26-1182
6
5
6
6
1
6
6
6
6
6
4
1
6
1
6
4
1
6
1
6
4
2
6
2
6
5
6
6
1
2
5
6
5
4
1
Sensibilidade Comparativa
O teste de Fixação de Complemento (FC) é correntemente o método mais usado para a determinação
dos níveis de anticorpos do Herpes Simples no soro humano. Os seguintes dados foram gerados para
determinar a sensibilidade do sistema de IF:
Comparação da sensibilidade do teste de FC versus IF
Título de IF
Número
Número da
Amostra
Título de FC
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
2000
2094
2138
2185
2205
2278
2288
2417
2445
2555
2555-1
2606
2657
2749
3046
3098
3348
3456-6
478
3479
3565
3668
3712
3721
3943
Negativo
3
128
64
128
64
128
32
64
8
Negativo
16
32
Negativo
128
16
8
128/256
32
64
8
16
8
32
64
8
HERPES 1 IFA
HSV-1
16
128
256
512
256
128
1024
128
512
64
16
128
12
<4
25
128
64
1024
128
64
16
128
512
64
128
HSV-2
32
256
128
128
256
64
256
64
512
16
16
32
64
<4
256
32
32
256
64
128
16
32
128
64
64
26
27
28
29
30
31
32
33
34
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128
64
32
64
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Este kit como um todo tem garantia de troca, desde que esteja dentro do prazo de validade e seja
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DATA DA REVISÃO DAS INSTRUÇÕES DE USO
Documento Revisado em: - Março de 2014.
RESUMO DO KIT DE HSV-1 IgG DA VIRGO
IMPORTANTE: É recomendado que se esteja familiarizado com o procedimento detalhado nas
instruções de uso antes de usar este resumo.
Cobrir os poços com as diluições de 1:10 e 1:100 das amostras e controles. Para a determinação
quantitativa, preparar diluições seriadas de duas etapas.

Incube as lâminas em câmara úmida a 23 +/- 2oC por 30 minutos.

Enxaguar as lâminas rapidamente com PBS. Lavar por 15 minutos, trocando o tampão 1 vez. Enxugar
as lâminas.

Cobrir cada poço com o conjugado FITC.

Incubar as lâminas em uma câmara úmida à 23 +/- 2oC por 30 minutos.

Repetir o passo de lavagem descrito acima.

Colocar uma pequena gota do Glicerol Tamponado em cada poço e cobrircom uma lamínula.

Ler as lâminas imediatamente de 200-500X de aumento em um microscópio de fluorescência.
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