Caracterização molecular do gene de Alfa

51º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 51º Congresso Brasileiro de Genética • 7 a 10 de setembro de 2005
Hotel Monte Real • Águas de Lindóia • São Paulo • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 85-89109-05-4
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Palavras-chave: actina, aminoácidos, expressão gênica, Oreochromis niloticus, seqüência nucleotídica
Wasko, AP; Severino, FE; Presti, FT; Carvalho, RF; Ferreira, AT; Poletto, AB; Azevedo, A; Martins, C
Laboratório de Biologia Molecular e do Desenvolvimento, Departamento de Morfologia, Instituto de Biociências, Universidade
Estadual Paulista, Botucatu, SP.
Caracterização molecular
do gene de Alfa-actina muscular
cardíaca da tilápia do Nilo
Oreochromis niloticus (Pisces, Cichlidae)
Actinas são proteínas altamente conservadas essenciais às células eucarióticas e possuem uma importante
função na manutenção da estrutura do citoesqueleto, na mobilidade e na divisão celular, nos movimentos
intracelulares e nos processos contráteis. O genoma dos vertebrados superiores geralmente contém
seis diferentes genes de actinas - quatro destes genes codificam isoformas musculares (α-esquelética,
α-cardíaca, α-vascular e γ-entérica) e dois outros genes codificam os tipos β- e γ-citoplasmáticos. Embora
existam diversos dados acerca da evolução dos genes de actinas em mamíferos, o padrão de organização e a
diversidade destes genes em outros grupos de vertebrados, especialmente em peixes, ainda necessitam ser
investigados. Desta forma, visando uma melhor compreensão da organização da família multigênica de
actinas no genoma dos peixes, uma isoforma gênica de alfa-actina isolada da tilápia do Nilo (Oreochromis
niloticus) foi caracterizada através de PCR, RT-PCR, seqüenciamento nucleotídico, seqüência dedutível
de aminoácidos, fracionamento por restrição enzimática e Southern-blot/hibridação em membrana. A
amplificação do DNA genômico de O. niloticus resultou em um fragmento de 1.063 pares de bases que
corresponde à seqüência de um gene de alfa-actina muscular cardíaca contendo os éxons 3 a 6. O padrão
de expressão músculo-específico do gene de actina isolado pôde ser confirmado através de RT-PCR
utilizando RNA total de diferentes tecidos de indivíduos adultos da espécie - embora o gene seja expresso
em brânquias, coração, ovários e músculo esquelético, sua expressão não foi evidenciada no fígado ou em
células cerebrais. Experimentos de digestão enzimática dos produtos de PCR da α-actina não evidenciaram
qualquer polimorfismo interindividual. Análises de Southern-blot/hibridação em membrana com DNA
genômico digerido com enzimas de restrição revelaram que o genoma da tilápia do Nilo contém múltiplas
isoformas de actinas. Comparações da seqüência nucleotídica, dos resíduos de aminoácidos deduzidos e
da organização éxon-íntron entre o gene de actina isolado de O. niloticus e diferentes genes de actinas de
outros vertebrados indicaram um alto grau de similaridade, o que demonstra que as famílias de actinas
evoluíram a partir de um único gene ancestral e que mantiveram sua estrutura basal no decorrer da
diversificação das espécies. Por outro lado, alguns resíduos de aminoácidos mostraram-se diagnósticos
a distintos genes de actinas em diversas espécies. Análises futuras em um maior número de espécies de
peixes visando a comparação da organização de distintas isoformas de actinas poderão ser úteis para a
melhor compreensão da evolução molecular destes genes neste grupo de vertebrados.
Apoio financeiro: FAPESP, CNPq e CAPES.
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