Isolamento e análise de cDNA de actinas de diferentes tecidos da

51º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 51º Congresso Brasileiro de Genética • 7 a 10 de setembro de 2005
Hotel Monte Real • Águas de Lindóia • São Paulo • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 85-89109-05-4
187
[email protected]
Poletto, AB; 1Carvalho, RF; 1Azevedo, A; 1Wasko, AP; 1Oliveira, C; 1Foresti, F; 1Martins, C
Departamento de Morfologia, Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista, 18618-000, Botucatu, SP.
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Isolamento e análise de cDNA
de actinas de diferentes tecidos
da tilápia do Nilo Oreochromis niloticus
As actinas são um grupo de proteínas altamente conservadas nos organismos eucariotos e representam
um componente essencial das células. Duas classes podem ser encontradas nos eucariotos superiores:
actina muscular (α) e actina citoplasmática (β e γ). Embora haja uma grande quantidade de dados
sobre a evolução das actinas nos mamíferos, poucos estudos foram feitos em vertebrados inferiores.
No mínimo seis diferentes isoformas de actinas existem em mamíferos: duas actinas citoplasmáticas e
quatro actinas musculares. Em peixes, entretanto, apenas alguns membros da família multigênica das
actinas foram clonados e seqüenciados, e pouco se sabe sobre sua expressão e evolução. Para uma melhor
compreensão da família das actinas entre os peixes, foram isolados através de RT-PCR e clonagem,
fragmentos de cDNAs de α-actina e β-actina de brânquia, fígado, coração, ovário, músculo esquelético
e cérebro de tilápia do Nilo. Dois conjuntos de primers foram desenhados, sendo um para α-actina e
outro para β-actina, a partir de seqüências destes genes disponíveis no GenBank para Fugu rubripies,
e utilizados para amplificar os produtos da reação de transcrição reversa de RNA total de brânquia,
fígado, coração, gônada, músculo estriado e cérebro da tilápia do Nilo. Foram obtidos fragmentos de
cDNA de aproximadamente 1.100 pb. Produtos de amplificação de α-actina foram detectados apenas
em brânquia, coração e músculo esquelético e cérebro enquanto produtos de β-actina foram detectados
para todos os tecidos analisados. Os cDNAs de α-actina de brânquia, coração e músculo esquelético e
de β-actina de ovário, músculo esquelético e cérebro foram clonados e seqüenciados. Em seguida foi
feita a tradução das seqüências nucleotídicas em seqüência de aminoácidos e alinhamento limitado ao
genoma de Fugu rubripies através do programa BLASTn do NCBI, para detectar as isoformas de actinas.
Foram detectadas as isoformas alfa-esquelética, alfa-cardíaca e beta-citoplasmática. Foram verificadas
substituições nucleotídicas e de aminoácidos entre as seqüências determinadas para a tilápia do Nilo
e Fugu rubripies. Em seguida foi calculada a distância genética das seqüências nucleotídicas em relação
às principais classes de vertebrados.
Suporte financeiro: FAPESP.