louise haddad maciel

Manaus - 2007
XVI Jornada de Iniciação Científica PIBIC CNPq/FAPEAM/INPA
Variabilidade e estrutura genética de populações naturais do vetor
da filariose bancroftiana Culex quinquefasciatus da Amazônia, Brasil.
Louise Haddad MACIEL1; Rafael Trindade MAIA2; Claudia Rios VELÁSQUES3; Wanderli Pedro TADEI4
& Vera Margarete SCARPASSA
4
lBolsista PIBIC INPA/FAPEAM; 2 Mestrando
GCBEV/INPA; 3Fiocruz/Manaus;
"Pesquisador/It+PA.
Culex (Culex) quínquefasciatus Say, 1823 é um mosquito trópico-cosmopolita,
noturno, ornitofílico
e antropofílico (Scorza, 1972; Forattini et aI., 1987; Castex et aI., 1990). É considerada o veto r
primário da filariose bancroftiana e da encefalite japonesa (Coleman et aI., 2002),além disso, tem
sido incriminada como vetor de arbovírus, tais como os que causam encefalites, tipos St. Louís e
venezuelana, encontrados nos E.U.A. e no Panamá, respectivamente. No Havaí é o principal vetor da
malária em aves (Fonseca et aI., 1998), sendo também vetor do vírus Oropouche em regiões do
norte do Brasil (Consoli & Lourenço-de-Oliveira,
1994; Forattini, 1962; 2002). Em decorrência da
elevada antropofilia e importância epidemiológica, inúmeros estudos genéticos foram realizados em
populações de Cx. quínquefasciatus, de diferentes áreas de sua distribuição geográfica (Humeres et
aI., 1990; Fonseca et aI., 2000; Cornel et aI., 2003; entre muitos outros). Na Amazônia brasileira,
entretanto, apenas um estudo de isoenzimas foi realizado com amostras de Manaus (Cavalcante &
Scarpassa, 2005). Neste estudo pretendeu-se estimar a variabilidade e estrutura genética em
populações naturais de Cx. quínquefasciatus das cidades de Manaus (bairros Educandos, Cidade
Nova II e Coroado) e Manacapuru (Estado do Amazonas), utilizando-se o gene ND4 do DNA
mitocondrial. As amostras foram coletadas em recipientes artificiais próximos às residências, nos
estágios de larva e pupa. O material foi transportado para o Insetário do Laboratório de Genética de
Populações e Evolução de Mosquitos vetores de Malária e Dengue do Instituto Nacional de Pesquisas
da Amazônia (INPA) para completar o desenvolvimento, conforme o método descrito em Scarpassa
& Tadei (1990).
Os espécimes foram identificados, utilizando-se a chave taxonômica de Forattini
(2002), posteriormente, acondicionados em tubos eppendorfs etiquetados e congelados em freezer
-80°e. As extrações do DNA genômico foram realizadas seguindo-se o método de Collins et. aI.
(1987) e amplificadas pela técnica de PCR. Em seguida os produtos de PCR foram checados em gel
de agarose a 1% (Figura 1). Os produtos de PCR que apresentaram bandas foram purificados e
então seqüenciados em um seqüenciador automático (Mega Bace). As sequências foram alinhadas
manualmente com o emprego dos programas BíoEdít e Chromas.
Foram realizadas 180 extrações de DNA, das quais um total de 16 indivíduos foram seqüenciadas,
apresentando no fragmento final 372 pares de bases do total do gene. A freqüência de nucleotídeos
estimada foi de: Adenina=
28,49%;
Timina= 43,28% (A+ T = 71,77%);
Citosina= 9,14%;
Guanina=19,09%
(C+G=28,23%).
Até o momento nenhuma mutação foi observada nesses
indivíduos, não sendo possível estimar a variabilidade genética dos mesmos. No entanto, esses
resultados parecem indicar que o gene ND4 é monomórfico ou pouco variável para a espécie Culex
quínquefascíatus.
65
67
69
71
75
77
79
CN
+
Tamanho do
fragmento
200
400
800
1200
2000
MM
41 43
45
49
57
59
61
62
63
64
Figura 1- Amostras de Culex quínquefasciatus testadas para o gene ND4. MM= Marcador Molecular;
CN= Controle Negativo.
Palavras-chave: Culex quínquefascíatus, DNA mitocondrial,
filariose, Amazônia.
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XVI Jornada de Iniciação Científica PIBIC CNPq/FAPEAM/INPA
Manaus - 2007
Fonte Finaciadora: MCT/INPA e FAPEAM
Bibliografias citadas:
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