Variabilidade genética em populações naturais de açaizeiro

XVI Jornada de Iniciação Científíca PIBIC CNPq/FAPEAM/INPA
Manaus - 2007
Variabilidade genética em populações naturais de açaizeiro
(Euterpe precatoria MARTIUS, Arecaceae) na reqrao de Manaus AM, utilizando marcadores de DNA microssatélites.
Joicy Falcão de SOUSA1,2; Maristerra Rodrigues LEMES2,3
olBolsista PIBIC INPA/CNPq; 2 Laboratório de Genética
(LabGen);30rientadora INPA/CPBO
e Biologia
Reprodutiva
de
Plantas
Euterpe precataria é uma especie de palmeira popularmente conhecida como açaí-do-amazonas,
açaí-solitário e juçara, de ampla distribuição em quase toda a bacia amazônica, ocorrendo no Brasil
nos estados do Acre, Amazonas, Pará e Rondônia (Kahn & Granville, 1992). O mesocarpo comestível
é a parte mais utilizada do fruto de onde é extraído, a partir de frutos frescos, um líquido espesso
conhecido como "vinho-de-açaí" bastante apreciado pela população brasileira (Castro, 1992). Apesar
de sua importância econômica, nada se conhece ainda sobre a distribuição da variabilidade genética
nos açaizeiros da Amazônia (E. aleracea e E. precataria). O conhecimento sobre os padrões de
distribuição da variabilidade e diferenciação genética entre populações de plantas é de fundamental
importância para a proposição de estratégias geneticamente embasadas para a conservação e
manejo de espécies sob pressão de exploração, como o açaí. Entre os marcadores moleculares mais
informativos para estudos genéticos em plantas destacam-se os marcadores microssatélites,
também conhecidos como SSR (Seqüências Simples Repetitivas). Os microssatélites representam a
classe de marcadores moleculares mais apropriada a estudos sobre diversidade genética, fluxo
gênico e análise de parentesco (Powell et ai., 1995). Neste trabalho, objetivou-se estimar, por meio
do uso de marcadores de DNA microssatélites a diversidade e estrutura genética em populações de
Euterpe precataria localizadas na Amazônia Central. Foram coletadas amostras de folhas e raízes de
34 indivíduos do município de Manaus-AM e 29 indivíduos de uma população situada na região do
Rio Cuieiras, AM, situada a aproximadamente 60 Km ao Norte de Manaus. Na extração do DNA
seguiu o protocolo padrão com CTAB (brometo de cetiltrimetilamônio)
(Doyle & Doyle, 1987). A
quantidade do DNA extraído foi estimada por comparação com marcadores padrões (50 ng, 100 ng
e 200 ng de DNA fago Lambda), em gel de agarose 1% corado com brometo de etídio, sob luz ultravioleta. No estudo foram utilizados marcadores microssatélites previamente desenvolvidos para
Euterpe edulis (Gaiotto et ai., 2001). Foram testados sete locos microssatélites desenvolvidos
previamente para E. edulis. Na Figura 1 é apresentado um gel de agarose contendo DNA extraído de
amostras de folhas (coluna 1) e raízes (colunas 2 a 4) de indivíduos coletados de E. precataria.
Tendo em vista a excelente qualidade da extração do DNA de amostras oriundas de raízes,
observou-se a vantagem de se coletar apenas raízes para as futuras análises, já que o acesso é bem
mais fácil no campo do que a coleta de folhas. Foi extraído o DNA a partir de E. precataria, sendo
coletadas 30 amostras de folhas e 33 amostras de raízes.
Figura. 1 - DNA extraído a partir de folhas (1) e raízes (2 a 4) de E. precatória, em gel de agarose 1,5% corado
com brometo de etídio. A, B e C - marcadores contendo 50, 100 e 200 ng de DNA (fago Lambda).
Dos sete pares de primers propostos para análise no projeto, dois (EE43 e EE48) amplificaram os
locos microssatélites na temperatura de anelamento de 56 0e. Para os demais primers foram
testadas outras temperaturas utilizando-se um termociclador com gradiente de temperatura. Dessa
forma, os primers EE54 e EE15 tiveram suas temperaturas de anelamento otimizadas a 58 e 60°C,
respectivamente. Na figura 2, são apresentados os produtos amplificados de quatro dos sete locos
microssatélites testados para análise neste projeto.
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Manaus
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Os resultados obtidos mostram o sucesso da transferibilidade dos primers de E. edulis para E.
precataria. Dessa forma foram disponibilizados quatro pares de primers: EE08, EE15, EE43 e EE54
que amplificaram satisfatoriamente locos microssatélites do genoma nuclear de E. precatória e que
serão utilizados posteriormente em estudos de genética de populações e biologia reprodutiva do
açaizeiro.
lKb Plus
lKb Plus
••
••
-.
-.
200-pb
100-pb
lKb Plus
lKb Plus
-.-.
200 pb
100pb
Figura 2 - Géis de agarose 1,5% mostrando amplificação de quatro locos rnicrossatélites para E. precataria: A)
EE43, B) EE 54 C) EE15/ D) EE 08. A primeira coluna em cada gel corresponde ao padrão de peso molecular
Ladder 1 Kb plus (Gibco).
Palavras-chave:
Açaí, Microssatélites, Variabilidade Genética.
Apoio financeiro: CNPq
Bibliografias citadas:
Castro, A. 1992. O extrativismo do açaí no Amazonas. In: Relatório de resultados do projeto de pesquisa:
extrativismo na Amazônia Central, viabilidade e desenvolvimento. Manaus: INPA-CNPqjOrstom. p779-782.
Doyle, J. J. and Dovle, J. L. 1987. Isolation of plant DNA from fresh tissue. Facus, 12: 13-15.
Gaiotto FA, Brondani RPV/ Grattapaglia D. 2001. Microsatellite markers for Heart of Palm - Euterpe edulis and E.
aleracea Mart. (Arecaceae). Malecular Ecolagy Notes/ 1/2, 86-88.
Kahn, F. & De Granville, J. J. 1992. Palms in Farest ecasystems af Amazônia.
Berlin, Springer. 226p.
l.itt, M. & Lutv, J. A. 1989. A hypervariable microsatellite revealed by in vitro amplification of a dinucleotide
repeat within the cardiac muscle actin gene. American Jaurnal af Human Genetics, 44: 398-401.
Powell, W., Morgante, M., Andre, C., McNicol, J. W./ Machray, G. c., Doyle, J. J./ Tingey, S. V., Rafalski, J. A.
1995. Hypervariable microsatellites provide a general source of polymorphic DNA markers for the chloroplast
genome. Current Bialagy 5: 1023-1029.
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