Isolamento e caracterização de marcadores microssatélites do

55º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 55º Congresso Brasileiro de Genética • 30 de agosto a 02 de setembro de 2009
Centro de Convenções do Hotel Monte Real Resort • Águas de Lindóia • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Isolamento e caracterização de marcadores
microssatélites do genoma de Dipteryx alata Vogel
Gouveia, FO¹; Resende, LV¹; Melo, DB¹; Brondani, RPV²; Chaves, LJ3; Lima, JS¹; Santana, LL¹; Telles,
MPC¹; Soares, TN¹;
Laboratório de Genética e Biodiversidade, Universidade Federal de Goiás.
Laboratório de Biotecnologia, Embrapa Arroz e Feijão.
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Programa de Pós Graduação em Agronomia - Escola de Agronomia e Engenharia de Alimentos - Universidade Federal de Goiás.
[email protected]
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Palavras-chave: baru, cerrado, conservação, SSR, STR.
Os marcadores microssatélites são bastante utilizados em estudos genético-populacionais por apresentarem
padrão de herança codominante e se apresentarem potencialmente multialélicos. Dipteryx alata é uma das
espécies nativas com ampla distribuição no Cerrado e que apresenta potencial de utilização econômica,
necessitando o estabelecimento de estratégias de conservação e domesticação. Em estudo prévio foram obtidos
doze locos microssatélites para a espécie D. alata, sendo apenas dois polimórficos. Em função disto, este trabalho
teve como objetivo isolar e caracterizar novos iniciadores para a espécie D. alata, visando a obtenção de mais
locos polimórficos. O DNA foi extraído de folhas jovens de barueiro, quantificado e diluído para a fragmentação
em sonicador. Após o tratamento das extremidades dos fragmentos de qualidade e tamanho adequados, foram
realizadas reações de ligação ao vetor de clonagem. O sequenciamento foi realizado no sequenciador automático
ABI3100. Todas as sequências foram depositadas no Sistema Genoma BioFoco, que realizou a busca por regiões
microssatélites. Os iniciadores desenhados foram padronizados utilizando três indivíduos. A caracterização de
parte dos locos padronizados, quanto ao polimorfismo, foi realizada com 46 indivíduos, provenientes de populações
naturais e de uma coleção de germoplasma. Da análise de 1031 sequencias, foram encontradas 78 sequencias
repetitivas, das quais 56 possibilitaram o desenho de pares de iniciadores. Do total de locos desenhados e testados,
o resultado parcial implicou na exclusão de quatro locos, por nunca apresentarem produtos de amplificação, 15
que ainda estão sendo padronizados, por apresentarem muita inespecificidade na amplificação e os 36 restantes,
que foram padronizados com sucesso. Ao avaliar 16 locos, dos 37 padronizados, com todos indivíduos, apenas
quatro apresentaram polimorfismo, com no máximo três alelos cada. O teste de desequilíbrio de ligação entre estes
locos demonstrou que 12 segregam independentemente. As estimativas de He e Ho variaram entre 0,162 e 0,689
e entre 0,086 e 0,600, respectivamente, indicando que os locos apresentaram uma deficiência de heterozigotos
na população avaliada. A estratégia de desenvolvimento de marcadores microssatélites a partir de bibliotecas
“shotgun” é interessante por possibilitar a síntese relativamente rápida de iniciadores para regiões repetitivas com
diferentes composições de motivos. O número de iniciadores padronizados foi satisfatório, entretanto, a exemplo
do trabalho anterior foi encontrado baixo polimorfismo para os locos. Este resultado não é esperado, considerando
a natureza multialélica dos marcadores microssatélites, indicando que a espécie D. alata pode ter passado por
algum processo evolutivo que tenha ocasionado uma diminuição da diversidade genética, observado nas regiões
de DNA repetitivo. Estudos com outros tipos de regiões do genoma e de caracterização da estrutura do genoma da
espécie D. alata, poderão contribuir para o melhor entendimento do modo de evolução da espécie.
Apoio financeiro: CNPq/SECTEC/PRONEX (66.0015/2003-0), CNPq.