identificação de células da linhagem

IDENTIFICAÇÃO DE CÉLULAS DA
LINHAGEM ESPERMATOGÊNICA DE
CAMUNDONGO QUE EXPRESSAM A
NOVA VARIANTE DA ENZIMA
CONVERSORA DE ANGIOTENSINA
I: VAR-4
Freire.V.B., Carmona.R., Gomes.M.K.,
Krieger.J.E.
Laboratório de Genética e Cardiologia
Molecular – Instituto do Coração da
FMUSP, São Paulo.
Objetivo:
O Sistema Renina-Angiotensina é um
dos mais importantes sistemas de
controle e manutenção da pressão
arterial. O seu principal produto, a
Angiotensina II, é formado a partir da
Angiotensina I através da Enzima
Conversora de Angiotensina I (ECA) e
representa um potente vasoconstritor.
A ECA é um alvo terapêutico importante
e uma das principais classes de drogas
cardiovasculares é a dos inibidores da
ECA. Existem duas isoformas da ECA, a
somática e a testicular, que são
produtos de um mesmo gene e
possuem locais de ação e estrutura
protéica diferentes. Estudos em nosso
laboratório evidenciaram a existência
de duas novas isoformas desta enzima,
que denominamos Variante-3 (Var-3) e
Variante-4 (Var-4), localizadas no
mesmo locus gênico da ECA. A Var-4 é
altamente expressa em testículo e é
influenciada pela maturação sexual
sugerindo que esta isoforma tenha
papel na espermatogênese.
Assim o objetivo deste trabalho é
determinar quais as células da linhagem
espermatogênica de camundongo que
expressam a Var-4.
Materiais e Métodos:
Realizamos
experimentos
de
Imunohistoquímica e Hibridização in
situ. Como não há até o momento
anticorpos ou sondas específicas para
este fim, utilizamos anticorpos e sondas
específicas para o gene repórter da
luciferase, pois produzimos em nosso
laboratório camundongos transgênicos
que expressam a luciferase sob o
controle de 3 fragmentos do promotor
da Var-4.
Resultados:
A análise das amostras de testículos de
animais transgênicos que expressam a
luciferase
sob
controle
de
um
fragmento de 1.5 kb do promotor da
variante 4 da ECA, mostra que os sinais
apresentam localização predominante
na região mediana dos túbulos. Além
disto,
a
morfologia
das
células
marcadas sugere que as espermátides
são as que expressam o RNAm e a
proteína luciferase.
Conclusão:
Em conjunto, estes dados sugerem que
seqüências
regulatórias
localizadas
além do fragmento de 1.5 kbs e
contidas no fragmento de 4.5 kbs do
promotor
conferem
expressão
da
variante 4 em outros tecidos, embora
de baixa intensidade, como, por
exemplo, no coração. Finalmente, o
padrão de expressão da variante 4 nem
sempre se colocaliza com o da sonda
para a variante 2 sugerindo que as
duas variantes são controladas de
maneira
distinta
durante
a
espermatogênese na mesma célula ou
em células em diferentes estágios de
desenvolvimento.
Referências Bibliográficas:
[1]. VERNON, B. M. Fisiologia
Médica. Vol.2, 13ª ed., Editora
Guanabara Koogan, p. 1738-1742,
1978.
[2]. MORGAN, L.; PIPKIN, F.B.;
KALSHEKER, N. Angiotensinogen:
molecular biology, biochemistry and
physiology. Biochemistry Cell
biology, v.28, n.11, p. 1211-1222,
1996.