Regulação de expressão gênica pelo Ca2+ nuclear

51º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 51º Congresso Brasileiro de Genética • 7 a 10 de setembro de 2005
Hotel Monte Real • Águas de Lindóia • São Paulo • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 85-89109-05-4
Palavras chave: Cálcio nuclear, regulação gênica
Amaya, MJ1; Rodrigues, MA2; Gomes, DA2; Aguiar, CJ1; Góes, AM3; Leite, MF1
1:
Departamento de Fisiologia e Biofísica, ICB-UFMG, Brasil; 2: Department of Cell Biology, Yale School of Medicine, Estados Unidos;
3:
Departamento de Bioquímica e Imunologia, ICB-UFMG, Brasil.
Regulação de expressão
gênica pelo Ca2+ nuclear
Em células excitáveis como cardiomiócitos, o cálcio (Ca2+) citosólico regula funções importantes como
contração e secreção de hormônios. Recentemente, demonstramos a presença de uma nova organela no
núcleo celular que regula a sinalização de Ca2+, o Retículo Nucleoplasmático. No entanto, o papel dos
sinais de Ca2+ nuclear em células excitáveis ainda não é muito claro. Neste trabalho, investigamos o
efeito do Ca2+ nuclear versus citosólico na regulação da expressão gênica em cardiomiócitos. Para estes
estudos utilizamos culturas primárias de cardiomiócitos de ratos Wistar recém-natos. As células foram
plaqueadas a 1 x 105 cm2 em frascos de cultura T25, e os experimentos realizados entre o 5o e 7o dia de
cultura. O Ca2+ nuclear e citosólico foram seletivamente bloqueados infectando as células com 200 MOI
de adenovírus contendo a proteína quelante de Ca2+ parvalbumina (PV), seguido de uma seqüência de
localização nuclear (Ad-PV-NLS), ou de exportação nuclear (Ad‑PV-NES). A eficiência da infecção foi
avaliada após 48h por microscopia confocal, uma vez que as construções virais continham a proteína
fluorescente DsRed. PCR semi-quantitativo foi utilizado para verificar a expressão de um canal de
Ca2+ intracelular presente em cardiomiócitos, o receptor de rianodina. Como controle interno foi
usado GAPDH e análise densitométrica. Verificamos que aproximadamente 100% das células foram
infectadas e que a parvalbumina foi enviada adequadamente para o núcleo ou citosol dependendo do
vírus utilizado. Além disso, as amostras de cDNA das células infectadas com Ad‑PV- NES, revelaram
um padrão de expressão da rianodina muito similar ao das amostras controle. Já as células infectadas
Ad-PV-NLS revelaram menor expressão em relação às amostras controle. Estes resultados sugerem
que o Ca2+ nuclear, e não o citosólico, regula a expressão de genes como o da rianodina.
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