1 POSTULADOS DE KOCH

Diagnose
POSTULADOS DE KOCH
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Prof. Margarete Camargo
FCAV/UNESP
2013
Diagnose
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www.bioagro.ufv.br/
Novas doenças - ?
A determinação de um agente causal de doenças é feita
através de certos procedimentos – Postulados de Koch
Critérios propostos por Henle
Robert Koch (1880) – bactéria: agente causal do
carbúnculo
Morte súbita dos citros
Koch e sua equipe:
sintomas
Pesquisas e estudos
http://revistalaranja.centrodecitricultura.br/edicoes/
Ferrugem do cafeeiro
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- desenvolvimento da microbiologia
- meios de cultura (Batata, ágar)
- vidrarias (placas de Petri)
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- Bactéria (carbúnculo - antrax)
- Bactéria da tuberculose
Robert Koch (1843-1910)
(médico alemão)
- vibrião da cólera
POSTULADOS DE KOCH
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1. O microrganismo deve estar sempre presente nas
lesões das plantas doentes (ASSOCIAÇÃO CONSTANTE);
2. O microrganismo deve ser isolado e cultivado em
CULTURA PURA;
3. O microrganismo isolado, deve REPRODUZIR OS
SINTOMAS quando inoculado em uma planta sadia;
4. O microrganismo deve ser REISOLADO da planta
inoculada artificialmente e corresponder, em todas
as suas características, com o isolado das lesões.
1. ASSOCIAÇÃO CONSTANTE (sintoma/microrganismo)
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Observações de sintomas e sinais
Descrições de doenças em publicações específicas
Observações ao microscópio estereoscópico e
microscópio ótico
Diagnose:
• Sintomas bem conhecidos facilitam a identificação
Exemplo: ferrugens, oídios, carvões
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CARVÕES
Ferrugens
Ferrugem do cafeeiro
(Hemileia vastatrix)
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Ferrugem da goiabeira
(Puccinia psidii)
Carvão comum do milho
(Ustilago maydis)
Ferrugem do trigo
(Puccinia graminis f. sp. tritici)
Carvão do trigo
(Ustilago tritici)
Carvão da cana-de-açucar
(Ustilago scitaminea)
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www.apsnet.org/
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www.bioagro.ufv.br/
www.globalrust.org/rust
uredósporos
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teliósporos
www.coffee.uni-bonn.
nt.ars-grin.gov/taxadescriptions/
www.padil.gov.au/browsePestHosts
www.apsnet.org/.../CornSmut/text/fig13.htm
OÍDIOS
MANCHAS FOLIARES
Oídio das cucurbitáceas
(Sphaerotheca fuliginea)
Oídio do trigo
(Erysiphe tritici)
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Oídio da roseira
(Sphaerotheca fuliginea)
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www.yates.com.au/.../powdery-mildew-on-rose/
www.agroterra.com/foro/foros/forum_posts.asp
conídio
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conidióforo
Bipolaris maydis
Exserohilum turcicum
(Helminthosporium maydis)
(Helminthosporium)
Bipolaris zeicola
(Helminthosporium carbonum)
www.apsnet.org/.../PowderyMildew/Top.html
TESTE DE EXSUDAÇÃO BACTERIANA
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vegetablemdonline.ppath.cornell.edu
PEPINO - Antracnose
Colletotrichum orbiculare
PEPINO – mancha angular
Pseudomonas syringae pv. lachrymans
http://www.cpact.embrapa.br/publicacoes/catalogo/tipo/sistemas/sistema19_novo/cap7_doen%C3%A
Exsudação bacteriana do tecido de planta
com sintomas de bacteriose
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POSTULADOS DE KOCH
NOVAS DOENÇAS
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Soja: ferrugem
Citrus: cvc; morte súbita; greening;
Bananeira: sigatoka negra
Cana-de-açucar: ferrugens
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1. O microrganismo deve estar sempre presente nas
lesões das plantas doentes (ASSOCIAÇÃO CONSTANTE);
2. O microrganismo deve ser isolado e cultivado em
CULTURA PURA;
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ISOLAMENTO DE BACTÉRIAS
2. Isolamento do microrganismo (cultura pura)
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*meio de cultura – Batata-dextrose-ágar (BDA)
Maltose-peptona-ágar (MPA)
Ágar-água
Nutriente ágar (bactérias)
outros (seletivos)
*técnica de isolamento
- Direto
- Fragmentos de tecidos
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www.forestryimages.org/browse/detail.cfm?imgnum=1572853
Podridão negra das brássicas
(Xanthomonas campestris pv. campestris
Xanthomonas sp.
- Maceramento de tecidos (bactérias)
ISOLAMENTO DE BACTÉRIAS
Isolamento de bactérias fitopatogênicas
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Isolamento de bactérias a partir de tecido foliar
(REZENDE et al., 2011).
www.ufv.br/dfp/bac/uni4.pdf
RISCAS
ZIG-ZAG
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Isolamento de bactérias
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Isolamento de fungos
Cultura com contaminação de fungos
Cultura pura sem colônias isoladas
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MÉTODO: direto (estruturas visíveis)
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colônia isolada
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Escleródio: Sclerotium rolfsii
Esporangiósporos
(Rhizopus sp.)
Meio de cultura
Cultura pura
Isolamento de fungos
Isolamento de fungos
MÉTODO: fragmentos de tecido (AGRIOS, 2005)
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MÉTODO: fragmentos de tecido (REZENDE et al., 2011)
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planta
infectada
Fragmentos das margens
de lesões colocada em
solução de cloro 10%
Fragmentos colocados
em meio de cultura,
em diferentes tempo
de imersão na solução
de cloro
Fragmentos colocados
em placas de Petri
(nutriente-ágar)
Uma cultura pura do patógeno é
obtida por repicagem de um segmento
do patógeno desenvolvido em placa
anterior para uma nova placa com o
meio de cultura
MÉTODO: Fragmentos de tecidos
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cultura pura
No tempo de imersão correta
(90
segundos)
apenas
o
patógeno sobrevive no centro
do fragmento e desenvolve-se
fora do tecido
Fragmentos de tecido
colocados em papel
toalha esterilizado para
remover o excesso de
cloro
Isolamento de fungos
Resultado do isolamento de fungo fitopatogênico de tecido
de planta infectada (AGRIOS, 2005).
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Pinça esterilizada
usada para
transferir
fragmentos
fragmentos
Assepsia – álcool
(30 segundos)
www.forestryimages.org
Arroz (Helminthosporium sp.)
hipoclorito 1%
(até 1 minuto)
Meio de cultura
Cultura pura - BDA
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POSTULADOS DE KOCH
RESTRIÇÕES AO SEGUNDO POSTULADO
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Parasitas obrigatórios (biotróficos)
Míldios
Oídios
Agentes causais das doenças
Ferrugens
Carvões
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Viroses
3. Inoculação em hospedeiro sadio
(Reprodução dos sintomas)
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1. O microrganismo deve estar sempre presente nas
lesões das plantas doentes (ASSOCIAÇÃO CONSTANTE);
2. O microrganismo deve ser isolado e cultivado em
CULTURA PURA;
3. O microrganismo isolado, deve REPRODUZIR OS
SINTOMAS quando inoculado em uma planta sadia;
caixas de propagação
ágar com pseudotécios
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métodos
- pulverização de inóculo (esporos, bactérias)
- ferimentos (riscas com agulhas ou palitos)
- imersão em inóculo
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- inoculação por injeção
http://www.secure.rothamsted.ac.uk/images/ascoshower.jpg
ascósporos liberados
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- contaminação do solo
- uso de vetores
Exemplo: Técnica de inoculação com ascósporos
Folhas
maceradas
Filtro
pistilo
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tampão
Beker
Planta infectada
com vírus
Folhas jovens
infectadas
Folhas infectadas
e água ou tampão
em almofazriz
Folhas em tampão
maceradas com
pistilo
Filtragem da seiva
infectada
Seiva
infectada
Seiva infectada usada para
inoculação com dedos, gaze,
bastão de vidro, pincel
Cotilédones
abrasivo
Sol ou luz
Folhas
primárias
Sintomas
sistêmicos
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Folhas
regulares
Cotilédones, folhas primárias
ou folhas regulares são
pulverizadas com abrasivo
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Seiva infectada aplicada
em plantas sadias com
os dedos, gaze, bastão
de vidro ou pincel
Em alguns casos,
plantas inoculadas
devem ser lavadas
com água logo após
a inoculação
Plantas inoculadas são
colocadas em casa de
vegetação ou câmara de
crescimento
Lesões locais aparecem
de 2 a 21 dias
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www.apsnet.org
Etapas de inoculação mecânica de vírus vegetal (AGRIOS, 2005)
Inoculação mecânica de vírus usando pistilo ou gaze
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POSTULADOS DE KOCH
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1. O microrganismo deve estar sempre presente nas
lesões das plantas doentes (ASSOCIAÇÃO CONSTANTE);
2. O microrganismo deve ser isolado e cultivado em
CULTURA PURA;
3. O microrganismo isolado, deve REPRODUZIR OS
SINTOMAS quando inoculado em uma planta sadia;
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4. Reisolamento da planta inoculada artificialmente.
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4. O microrganismo deve ser REISOLADO da planta
inoculada artificialmente e corresponder, em todas
as suas características, com o isolado das lesões.
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= segundo postulado
Isolar o microrganismo da planta inoculada e comparar
as características com o obtido no isolamento na
aplicação do segundo postulado
- Armazenamento da cultura:
- novos estudos
- Entidades responsáveis - Depósito e manutenção das
culturas
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