Instruções de Uso - Biometrix

Instruções de Uso
1. Nome Comercial e marca da família de produtos
Família HLA Sorológico de Classe I
Marca: One Lambda
2. Formas de apresentação do produto e composição
2.1. Descrição de cada item que constitui a família
Número do Catálogo
LMB2701
LMB2703
LM 172
LM144 A
LM144 B
CABC5
CABC-50
CABC-1D
AHG1
ATSG
ATSM
ATSMX
AMSM
AGSM
ALSG
ALSM
NS
FB1-100
FB1-DEV
Nome Comercial
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - PLACA DE TIPAGEM
DE TECIDO MONOCLONAL CLASSE I HLA - LMB2701: 10 placas
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - PLACA DE
TIPAGEM DE TECIDO MONOCLONAL CLASSE I HLA - LMB 2703: 10
placas
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - PLACA DE TIPAGEM
DE TECIDO MONOCLONAL CLASSE I HLA - LM 172: 10 placas
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - PLACA DE TIPAGEM
DE TECIDO MONOCLONAL CLASSE I ESPECIAL HLA - SMT 144 A e SMT
144 B: 10 conjuntos de placas cada um com um par de placas
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - COMPLEMENTO DE
COELHO PARA HLA CLASSE I CABC5: 1 frasco com 5 ml
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - COMPLEMENTO DE
COELHO PARA HLA CLASSE I CABC50: 1 frasco com 50 ml
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - COMPLEMENTO DE
COELHO PARA HLA CLASSE I LIOFILIZADO CABC1D: 1 frasco com 1
ml
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - SORO KAPPA DE
CABRA ANTI-HUMANO AHG1: 1 frasco de 1 ml
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - REAGENTE
CONTROLE ANTI-LINFÓCITO T IgG ATSG: 1 frasco para 1 ml
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - REAGENTE
CONTROLE ANTI-LINFÓCITO T IgM ATSM: 1 frasco para 1 ml
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - REAGENTE
CONTROLE ANTI-T IgM ATSMX: 1 frasco para 1 ml
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - REAGENTE
CONTROLE ANTI-MONÓCITOS IgM AMSM: 1 frasco para 1 ml
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - REAGENTE
CONTROLE ANTI-GRANULÓCITOS IgM AGSM: 1 frasco para 1 ml
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - REAGENTE
CONTROLE ANTI-LINFÓCITO IgG ALSG: 1 frasco para 1 ml
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - REAGENTE
CONTROLE ANTI-LINFÓCITO IgM ALSM: 1 frasco para 1 ml
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - REAGENTE
CONTROLE NEGATIVO NS: 1 frasco para 1 ml
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - REAGENTE DE
ISOLAMENTO (SEPARAÇÃO) FB1-100: 1 frasco para 10 ml
Família HLA Sorológico de Classe I - BIOMETRIX - REAGENTE DE
ISOLAMENTO (SEPARAÇÃO) FB1-DEV: 1 frasco para 22 ml
1
3. Descrição da finalidade ou uso do produto
A Placa para tipagem HLA Terasaki é uma placa de poliestireno com 60, 72 ou 96
poços contendo anticorpos alo ou monoclonais conhecidos contra o antígeno HLA.
Cada poço contém 1 microlitro de um antissoro específico ou anticorpo monoclonal e
5 microlitros de óleo mineral. Cada placa contém um controle positivo e um
negativo.
Para uso na determinação de antígenos HLA classe I na superfície da célula
através da metodologia de microlinfocitotoxicidade dependente de complemento.
Material para uso em laboratório de imunologia na tipagem HLA, através deste
teste determina-se a compatibilidade HLA entre indivíduos. Este exame é
denominado de teste de histocompatibilidade.
4. Princípio de ação e reação do produto: base científica, explicação da
metodologia, técnicas e reações envolvidas
As placas para tipagens monoclonais HLA de classe I contêm uma mistura de
reagentes conhecidos e complemento de coelho os quais são usados para determinar
a presença de antígenos HLA de classe I em linfócitos T. Cada poço contém 1
microlitro (1ul) de um anticorpo específico mais o complemento, bem como 5
microlitros (5ul) de óleo mineral . Cada placa contém um controle positivo e
negativo.
Linfócitos viáveis são incubados em uma mistura de anticorpos ligados a
complemento. Se o linfócito possuir um antígeno reconhecido por um anticorpo
específico, a porção FAB do anticorpo se liga ao antígeno, formando um complexo
antígeno-anticorpo. Após a formação destes complexos, a fração C1q e o Ca++ do
complemento ligam-se à porção FC do anticorpo. Um anticorpo IgM é necessário para
ligar uma molécula C1q ou dois anticorpos IgG são necessários para ligar uma
molécula C1q. A ligação C1q inicia a cascata do sistema complemento a qual induz a
uma lise da célula com o complexo antígeno-anticorpo. Em uma reação negativa, os
linfócitos se mantêm viáveis. Em uma reação positiva, os linfócitos são mortos.
5. Componentes fornecidos com o produto: especificações ou características
qualitativas ou quantitativas
-
Placa plástica de tipagem HLA classe I – 60, 72 ou 96 poços, composta por
material de origem sérica humana (alosoro ou monoclonal), com determinadas
2
especificidades, conforme identificação em cada uma das folhas de leitura em
anexo (worksheets).
-
Folhas de leitura (worksheets) identificando a especificidade de cada
anticorpo.
6. Relação de todos os materiais, artigos, acessórios, insumos ou equipamentos
necessários e não fornecidos, para uso com o produto, indicando as formas e
condições de aquisição
6.1. Materiais necessários, porém, não fornecidos
• Microsseringas HLA (microdispensadores/dosadores)
• Lamínulas plásticas para cobrir as placas tipo Terasaki - Insta-Seal (cat. #
TIS250U da One Lambda) ou lamínulas de vidro, e vaselina (petrolatum)
• Reagentes corantes e fixadores:
o Para teste de exclusão de corante: eosina-Y (base sódica) e
formaldeído, ou Stain-Fix (cat. SF-500 da One Lambda)
o Para teste fluorescente: FluoroQuench AO/EB (cat. # FQAE-500 da One
Lambda)
• Extinção Hemoglobina
o De soro bovino liofilizado: EDTA PBS a 5%; azida sódica a 1%.
o De células vermelhas totais: solução salina; EDTA PBS a 5%; solução
azida a 1%.
•
Solução a 1% de tinta: soro albumina bovino (BSA); EDTA PBS 5%; azida
sódica; tinta preta de caligrafia Higgins
•
Solução 5% EDTA (dissódico) PBS
•
Solução estoque de Brometo de etídio (EB): água destilada; PBS.
•
Diacetato de carboxifluoresceína (CFDA)
•
FluoroBeads e FluoroQuench
6.2. Instrumento Requerido, porém, não fornecido
•
Microscópio de contraste de fase, que poderá ser invertido e com
fluorescência, dependendo da metodologia de separação de linfócitos
utilizada. Consultar o representante local para maiores esclarecimentos.
3
7. Condições de armazenamento, transporte, limites de temperatura, umidade
ou proteção à luz
Validades e condições de armazenamento e transporte de cada um dos produtos
pertencentes a esta família estão indicados em tabela abaixo.
Número do
Catálogo
Temperatura de transporte
LMB2701
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo
seco.
LMB2703
LM 172
LM144 A
LM144 B
CABC-5
CABC-50
CABC-1D
AHG1
ATSG
ATSM
ATSMX
AMSM
AGSM
ALSG
ALSM
NS
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo
seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo
seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo
seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo
seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo
seco.
Os produtos devem ser transportados
refrigerados, acondicionados com gelo
reciclável.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo
seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo
seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo
seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo
seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo
seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo
seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo
seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo
seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo
seco.
Temperatura de
armazenamento
-65ºC ou inferior
-65ºC ou inferior
-65ºC ou inferior
-65ºC ou inferior
-65ºC ou inferior
-65ºC ou inferior
2ºC-8ºC
-65ºC ou inferior
-20ºC ou inferior
-20ºC ou inferior
-20ºC ou inferior
-20ºC ou inferior
-20ºC ou inferior
-20ºC ou inferior
-20ºC ou inferior
-20ºC ou inferior
4
FB1-100
FB1-DEV
Os produtos devem ser transportados
refrigerados, acondicionados com gelo
reciclável.
Os produtos devem ser transportados
refrigerados, acondicionados com gelo
reciclável.
2ºC-8ºC
2ºC-8ºC
Os produtos que necessitam de transporte em temperatura diferente da
ambiente, deverão durante o seu transporte, estar acondicionados em caixas de
isolamento térmico, não sendo expostas ao calor ou umidade.
No caso de material congelado, somente descongelar a placa que será utilizada
imediatamente, caso contrário, permanecer com as placas no interior do freezer nas
temperaturas indicadas acima. No caso dos complementos e controles, alíquotas em
tubos de menor volume são recomendadas. Este volume deve ser determinado por
cada laboratório, pois é dependente da rotina individual de cada um.
8. Precauções e esclarecimentos sobre riscos com o uso do produto
Somente para uso em diagnóstico in vitro.
Cuidados especiais: quando do manuseio do produto, utilizar luvas descartáveis.
Descartar se houver descongelamento prematuro.
IMPORTANTE: quando se tratar de material altamente perecível, o transporte e
armazenagem devem ser a -65ºC, com gelo seco ou freezer ultra-low.
CUIDADO: Todos os produtos de origem sanguínea devem ser tratados como
potencialmente infecciosos. A fonte de material do qual esse produto foi derivado foi
dada como negativa quando testada de acordo com os requerimentos para testes
pela FDA. Nenhum método de teste conhecido pode assegurar que produtos derivados
de sangue humano não transmitirão agentes infecciosos.
Não existem padrões Americanos que indiquem potência ou especificidade.
9. Orientação sobre os cuidados com a amostra biológica objeto do diagnóstico
Tratar como potencialmente infeccioso por ser tratar de material para teste
diagnóstico que envolve amostra de origem sanguínea humana.
10. Descrição do Processo de Medição
10.1. Coleta e preparo da amostra
5
a. Sangue armazenado por menos de 24 horas: coloque 15-20ml de sangue
total em heparina de sódio (1000 unidades/10ml de sangue) em
“vacutainer” tampa verde
b. Sangue armazenado por mais de 24 horas: coloque 15-20ml de sangue total
em “Vacutainer” ACD ou CPDA.
c. Não use heparina de lítio. IMPORTANTE: o sangue deve ser armazenado
horizontalmente entre 22 e 25ºC. Não refrigere.
10.2. Isolamento de Linfócito a partir de Sangue Fresco
1. Centrifugue sangue citrificado ou heparinizado por 10 minutos a 400g
2. Colete a camada tamponada e dilua em volume igual de PBS (fosfato salino
tamponado); misture bem.
3. Espalhe um máximo de 2ml da mistura da camada tamponada/PBS sobre
1,5ml de Ficoll-Hypaque em tubos de 5ml, e centrifugue por 10 minutos a
1000g
4. Colete aproximadamente 1ml da interfase de cada tubo e transfira para
tubos “tipo” Fisher. centrifugue por 1 a 1 ½ minutos a 3000g em uma
centrífuga “tipo” Fisher
5. Descarte o sobrenadante e ressuspenda o grânulo em PBS. Centrifugue por 1
min. a 1000g (isto remove a maioria das plaquetas).
6. Descarte o sobrenadante, ressuspenda o grânulo em PBS, e então, adicione
1 gota de trombina (100 unidades/ml). Misture.
7. Coloque os tubos para girar em uma roda vertical a 8 rpm ou inverta os
tubos por 2-5 minutos ou até que apareçam agregados brancos.
8. Centrifugue por 3 minutos a 1000g em uma centrífuga “tipo” Fisher e
transfira o sobrenadante para limpar os tubos “tipo” Fisher. Os agregados
remanescentes podem ser poupados para o procedimento de isolamento de
monócitos. Centrifugue o sobrenadante por 1 minuto a 1000g.
9. Descarte o sobrenadante e ressuspenda o grânulo por 1 minuto a 1000g.
Repita.
10. Ressuspenda o grânulo em meio de McCoy e ajuste as células para uma
concentração de 2x106 células/ml de linfócitos totais para tipagem.
Separando/Isolando linfócitos T
Atualmente existem diferentes procedimentos para o isolamento de linfócitos T,
sendo que os mais utilizados são:
6
1. através da observação empírica, notou-se que os linfócitos B tem a tendência
de se aderirem a superfícies sólidas, enquanto que os linfócitos T são
relativamente não aderentes. Com isso, o uso da técnica de aderência em lã
de nylon ainda pode ser usada por alguns laboratórios, sendo que a
viabilidade em células não frescas é bem baixa, dificultando no processo de
tipagem de classe II.
2. e através do processo onde pérolas imunomagnetizadas se ligam aos linfócitos
(T ou B) e desta forma através da atração magnética esses linfócitos são
isolados das demais células presentes na amostra. (FluoroBeads específicas
para linfócito T ou B)
Explicamos mais detalhadamente cada uma dessas técnicas a seguir
1. Microtécnica do canudo com lã de nylon: As proporções dadas abaixo são para
coluna capaz de manusear até 10 x 106 células.
a. Feche uma das saídas de um canudo plástico, flexível e transparente
(0,6 x 12-14cm) em ângulo de 45º
b. Proceda com um bom retalhamento de 0,1g de lã de nylon esfregado
encharcando-o em HBSS ou PBS em uma placa de Petri
c. Encha ¾ do canudo com HBSS ou PBS, então, usando a ponteira de
uma pipeta, gradualmente e emparelhadamente coloque a lã de nylon
dentro do canudo para uma altura de aproximadamente 6cm. Nesse
estágio a coluna pode ser guardada a 4ºC por até 2 semanas.
d. Corte ou perfure o lado selado do canudo fazendo uma abertura de
aproximadamente 2mm.
e. Lave a lã de nylon com 5ml HBSS ou PBS e então com 5ml de meio
contendo HIFCS a 5%
f. Quando o meio cobrir a lã de nylon, gire o canudo para a posição
horizontal e incube por 30 min. a 37ºC. Alternativamente, use meio
pré-aquecido (morno).
g. Adicione 0,5ml de suspensão de linfócitos purificados (procedimento
descrito acima) em HIFCS a 5% ao topo da coluna e permita ás células
se moverem por todo o percurso dentro da lã. Uma boa separação de
célula T e B depende da pureza da preparação de linfócitos inicial.
Portanto, a suspensão deverá ser isenta de granulócitos e plaquetas.
7
h. Adicione aproximadamente 0,2ml de HIFCS a 5% ao topo da coluna
para prevenir ressecamento. Deixe a coluna deitada e incube a 37ºC
por 30min.
i. Para recuperar os linfócitos T, conceda 2 lavagens (8ml cada) de HIFCS
a 5% morno (37ºC) gotejando através da coluna que deverá estar na
posição vertical. O eluente contém células T não aderentes.
j. Para recuperar as células B aderentes, adicione 1,5ml de HIFCS a 5% à
coluna e repetidamente esprema o canudo. Continue esta etapa até
que 8ml do meio tenha sido usado.
k. Centrifugue ambas as suspensões de células T e B por 5 min. a 1000g e
lave-as 1 vez com 1ml de HIFCS a 5%.
l. Resuspenda as células em quantidade mínima de meio (e.g. 0,5ml),
verifique a viabilidade, conte as células e ajuste a concentração para
2x106 células/ml.
m. Na média, esse procedimento deverá fornecer uma recuperação de 8090% das células.
2. Isolamento de linfócitos T puros através de pérolas imunomagnetizadas –
Fluorobeads T (One Lambda, Inc.). Esse procedimento leva menos de 10
minutos para ser completado, sendo que o procedimento é realizado
totalmente à temperatura ambiente. Fluorobeads T é um reagente de
separação composto de partículas imunomagnéticas acopladas a anticorpo
monoclonal (CD2) específico para o linfócito T. Essas pérolas seletivamente se
ligam aos linfócitos T e são então isoladas com o auxílio de um magneto
(FBAMAG6 + 6 – One Lambda, Inc.).
- Isolamento a partir de Sangue Total
a.
Dispense 2ml de sangue dentro de um tubo de 5ml
b.
Resuspenda FluoroBeads T completamente antes do uso. Agite em aparelho
agitador tipo Vortex por 10 segundos.
c.
Adicione 100 ul de FluoroBeads T à amostra teste. Imediatamente tampe o
tubo e inverta-o por 2-3 minutos para dispersar as pérolas magnéticas
d.
Agite delicadamente o tubo através de rotação por 3 minutos à temperatura
de 22-25ºC para permitir que as pérolas se liguem às células B (não exceder 4
minutos). Pode ser usado rotação manual ou mecânica.
8
e.
Adicione 2ml de developer (solução de trabalho). Tampe o tubo e inverta-o 2
a 3 vezes para misturar. Esta etapa é essencial!
f.
Destampe o tubo e coloque-o em separador magnético por 3 minutos
g.
Remova e descarte o sobrenadante com uma pipeta descartável. Remova
então o tubo do magneto.
h.
Lave as células (pérolas) com 1-2ml PBS/citrato. Delicadamente agite o tubo
para dispersar as pérolas. Recoloque o tubo no separador magnético por 1 minuto.
Remova e descarte os sobrenadantes. Repita esta operação duas vezes.
i.
Destampe o tubo e coloque-o em separador magnético por 1 minuto. Remova
o sobrenadante. Lave as células (pérolas) duas vezes com PBS.
j.
Adicione 0,5ml de CFDA (solução de trabalho pH 5.5) e agite.
k.
Incube o tubo horizontalmente no escuro por 10 minutos à temperatura de 22-
25ºC.
l.
Magneticamente faça a separação (como descrito acima) e lave as células
duas vezes com PBS.
m. Ressuspenda as células em 0,5ml de McCoy com 5% de HIFCS.
n.
Adicione 1 ul de célula ressuspendida em um poço de placa virgem “tipo”
Terasaki. Cheque a contagem de células através de um microscópio fluorescente.
Ajuste a concentração para 2 x 106/ml (2.000 células por poço)
o.
A amostra pode ser transferida para um tubo Fisher e armazenada
horizontalmente à temperatura de 2-5ºC por até 3 dias antes de ser testado.
Após este procedimento, teremos células T prontas para tipagem HLA classe I.
10.3. Procedendo com o teste
Devido à resistência de cada reagente, exercite os cuidados necessários quando
dispensando as células e os reagentes. Não toque o fundo dos poços com as agulhas
das seringas.
Descongele as placas à temperatura ambiente (20-25ºC) por 15 minutos, e use-a
em de 1 hora após a retirada do freezer.
1) Para cada poço adicione 1µl de uma suspensão de linfócitos T de 2 x 106 para
as placas de tipagem HLA, usando uma seringa de 50 µl conectada a um
dispensador de repetição.
2) Misture as microgotas, usando um misturador eletrostático ou um arame.
3) Incube as placas à temperatura ambiente (20 a 25ºC) por 60 minutos.
4) Após a incubação, core e fixe as células:
a. Para teste de exclusão de corante, adicione a cada poço:
9
• 5ul de corante eosina, seguido de, após 2 minutos, 5ul por poço de
formaldeído, ou
• 10ul de Stain-Fix (cat # SF-500 da One Lambda)
b. Para teste por fluorescência, adicione 5ul de FluoroQuench AO/EB (cat #
FQAE-500 da One Lambda) em cada poço.
5) Cubra as placas com lâmina de vidro e sele-as com petrolato derretido, ou com
lamínulas para placas tipo Terasaki Insta-Seal
TM
. Deixe as placas repousarem por 15
minutos (temperatura ambiente) para que os linfócitos possam assentar. A formação
de borbulhas nas placas podem ser reduzidas colocando as mesmas no refrigerador.
Elas podem ser lidas uma ou duas semanas após a selagem (somente pelo método de
exclusão de corante). As placas pelo método fluorescente podem ser armazenadas a
2-5ºC no escuro por até 2 dias.
Célula morta ocorrerá em qualquer poço teste onde o antígeno HLA na superfície da
célula é reconhecido pelo seu anticorpo anti-HLA conjugado. Quando a técnica de
exclusão de corante é usada, linfócitos negativos (vivos) aparecem pequenos,
brilhantes e não refrateis. Linfócitos positivos (mortos) aparecem escuros e nãorefráteis com corante eosina. As reações são marcadas (scores) pela estimativa de
percentual de células mortas, através de leitura microscópica.
Para teste fluorescente, os linfócitos negativos (vivos) aparecem verdes, e os
linfócitos
positivos
(mortos)
aparecem
vermelhos
(quando
usando
corante
fluorescente da One Lambda com laranja de acridina e brometo de etídio).
Avaliação Microscópica dos Testes
- É feito o “score” da reação pela estimativa de percentual de células mortas. Se
houver linfócitos mortos no controle negativo, o percentual de células mortas nos
poços restantes tem que ser ajustado de acordo. O padrão ASHI de leitura é:
Score
1
2
4
6
8
0
% de células mortas
0 - 10 %
11 - 20 %
21 - 50 %
51 - 80 %
81 - 100 %
------- .
Interpretação
Negativo
negativo duvidoso
Positivo fraco
Positivo
fortemente positivo
não legível
As frequências fenotípicas para HLA classe I variarão de modo diferente nas
diferentes populações (i.e., caucasóides, negróides, orientais, etc.). Referência 4.
10
11. Procedimentos de calibração do processo de medição
Não existe procedimento de calibração para a metodologia em questão.
12. Procedimentos de cálculos e obtenção dos resultados da medição
Não existe cálculo para a obtenção dos resultados da medição. O resultado é feito
pelo “score” da reação pela estimativa de percentual de células mortas realizada
pela leitura microscópica.
13. Limitações do processo de medição (utilização de testes adicionais mais
específicos ou sensíveis, quando os resultados obtidos assim o sugerirem)
Dificuldades na separação celular e contaminação da preparação de linfócitos
com células vermelhas, levedura, monócitos, plaquetas ou granulócitos podem causar
resultados errôneos. Ainda cabe salientar, resultados errôneos podem ocorrer quando
concentrações de células estão acima ou abaixo do nível aceitável. Contaminação
bacteriológica ou mudança no pH de reagentes monoclonais podem causar reações
falso negativas. Certos antígenos HLA frequentemente exibem especificidades fracas.
Estes são chamados antígenos de reação cruzada e são detalhados por antígenos e
anticorpos de cada placa na folha guia de reação modelo que acompanha a placa.
14. Controle interno de qualidade a ser adotado pelo usuário para assegurar o
desempenho adequado do processo de medição
Uma amostra de um painel previamente conhecido deverá ser tipado anterior ao
início dos testes de rotina para averiguar a confiabilidade do novo lote de placa
recebido no laboratório. Somente utilizar as placas dentro de seu prazo de validade.
Caso o laboratório deseje testar a pureza de suas preparações celulares ou ainda
em combinação identificar a contaminação da preparação de células, os Controles da
One Lambda poderão ser utilizados conforme explicados abaixo:
NS = soro controle normal é usado para determinar o background de células mortas.
Este soro é proveniente de soro humano do sexo masculino que não tenha sofrido
transfusão com sangue AB negativo.
ABSM, ABSG, ABSMD = Controles antilinfócitos B são usados para determinar a pureza
dos linfócitos B. Os controles anti linfócitos B são anticorpos monoclonais os quais são
fortemente citotóxicos aos linfócitos B sem reatividade contra granulócitos, linfócitos
T, plaquetas, monócitos e células vermelhas do sangue teste. (OBS.: ABSG na diluição
11
de trabalho fornecida, não é recomendado para o teste de células com leucemia
crônica linfocitária, nas placas LCT30D da One Lambda).
AGSM, AGSMD = Controles antigranulócitos são utilizados para determinar a pureza
dos granulócitos. Estes controles são anticorpos monoclonais os quais são fortemente
citotóxicos aos granulócitos, mas sem reatividade contra linfócitos B, linfócitos T,
plaquetas, monócitos e células vermelhas do sangue teste.
AMSM, AMSMD = Controles antimonócitos são usados para determinar a pureza de
monócitos. Os controles antimonócitos são anticorpos monoclonais os quais são
fortemente citotóxicos a monócitos, mas sem reatividade contra granulócitos,
linfócitos B, linfócitos T, plaquetas e células vermelhas do sangue teste.
ATSG, ATSM, ATSMX, ATSMD = Controles antilinfócitos T que são utilizados para
determinar a pureza de linfócitos T. Os controles antilinfócitos T são anticorpos
monoclonais os quais são fortemente citotóxicos a linfócitos T, mas sem reatividade
contra granulócitos, linfócitos B, plaquetas, monócitos e células vermelhas do sangue
teste. OBS.: ATSMX é o único controle anti-T para ser utilizado com células isoladas
com FluoroBeads T.
ALSG, ALSM = Controle antilinfócitos totais são usados para determinar a reatividade
do complemento. Este controle é feito com anticorpos monoclonais os quais são
fortemente citotóxicos aos linfócitos humanos. OBS.: não utilize ALSG como controle
para teste com DTT (Ditiotreitol) pois o DTT irá degradá-lo.
15. Valores de referência obtidos em populações sadias ou valores demográficos,
epidemiológicos, estatísticos, desejáveis, terapêuticos ou tóxicos
Não existe este tipo de dado para a metodologia em questão.
16. Características de desempenho do produto
A. Potência e especificidade:
Reagentes teste foram precisamente caracterizados por screenings separados
sequenciais sorológicos. Painéis de referência de amostras de linfócitos
congelados foram usados em dois screenings separados.
12
Dois terços de todos os reagentes selecionados são fortes com reatividade HLA
específica claramente definida (com 70% de índice de força), permitindo não
mais que 10% de reações falso positivas e 15% de reações falso negativas. O
restante um terço de reagentes não vão de encontro com esse critério, mas
são exaustivamente investigados quanto à sua utilidade quando usados para
sustentar outros anticorpos bem definidos. Anticorpos multiespecíficos são
usados somente se anticorpos não monoespecíficos são disponíveis para uma
especificidade em particular. Anticorpos multiespecíficos foram escolhidos
com o mesmo desempenho característico para todas as especificidades como
o anticorpo monoespecífico. Screening contra um painel de linfócitos frescos
preparados é usado para confirmar e validar a força do soro e especificidade.
As análises são feitas usando técnicas de computadas do Eighth International
Histocompatibility Workshop em 1980. (referência 4).
B. Controle Negativo
O antissoro do controle negativo é originário de um sangue saudável humano
masculino do tipo AB, o qual não possui reatividade citotóxica em testes com
doadores de linfócitos selecionados ao acaso. Este controle é usado para
determinar a viabilidade do linfócito.
C. Controle Positivo:
O controle positivo é um anticorpo monoclonal e é fortemente citotóxico aos
linfócitos humanos. Este controle é usado para determinar a atividade de
complemento.
17. Referências Bibliográficas que comprovem ou fundamentem as informações
fornecidas
1. Terasaki PI, Bernoco F, Park MS, Ozturk G, and Iwaki Y. Microdroplet testing
for HLA A, B, C and D antigens. Am J. Clin Pathol 69:103-120, 1978.
2. Danilovs J, Terasaki PI, Park MS, Ayoub G. B lymphocyte isolation by thrombin
nylon wool. In Histocompatibility Testing. Terasaki PI, Ed., UCLA Tissue
Typing Laboratory, Los Angeles, CA 287-288, 1980.
3. ASHI Laboratory Manual, 2nd ed. Edited by Zachary, Andrea A. and Teresi,
Gary, p. 199, 1990.
4. Terasaki PI, Ed., Histocompatibility Testing. Los Angeles, CA, 1980.
5. Nikaein A, Ed., ASHI Procedure Manual, 3rd Edition, ASHI, Lenexa, KS.
13
18. Indicação do Distribuidor do produto
Biometrix Diagnóstica Ltda.
Estrada da Graciosa, 1081 - Curitiba - PR
CEP: 82840-360
Tel.: (41) 2108-5250
Fax: (41) 2108-5252
DDG: 0800-7260504
E-mail: [email protected]
www.biometrix.com.br
CNPJ: 06.145.976/0001-39
19. Indicação do Fabricante do produto
País de Origem: Estados Unidos da América
Fabricante: One Lambda, Inc.
21001 Kittridge Street
Canoga Park – CA
EUA
20. Registro ANVISA número
80298490007
21. Responsável Técnica
Ana Carolina Martins
CRF/PR: 12700
22. Revisões
Revisão
Descrição da Alteração
Data
00
Elaboração
10/2006
01
02
03
Revisão: Formação, layout, produtos
descontinuados, alteração nas condições de
armazenagem e transporte, inclusão das
denominações comerciais de cada item da
família, inclusão de número de registro e
alteração de Responsável Técnica.
Correção das temperaturas de
armazenamento do CABC-1D e AHG1.
Alteração do DDG.
01/2011
07/2012
09/2012
14