família hla sorológico de classe i - Biometrix

FAMÍLIA HLA SOROLÓGICO DE CLASSE I
Instruções de Uso
APRESENTAÇÃO E COMPOSIÇÃO DA FAMÍLIA
Código
Descrição
LMB2701
Placa de Tipagem de Tecido Monoclonal Classe I HLA – 10 placas
LMB2703
Placa de Tipagem de Tecido Monoclonal Classe I HLA - 10 placas
LM 172
CABC5
Placa de Tipagem de Tecido Monoclonal Classe I HLA - 10 placas
Placa de Tipagem de Tecido Monoclonal Classe I Especial HLA SMT 144 A e SMT 144 B: 10 conjuntos de placas cada um com
um par de placas
Complemento de Coelho para HLA Classe I - 1 frasco com 5 mL
CABC-50
Complemento de Coelho para HLA Classe I - 1 frasco com 50 mL
CABC-1D
Complemento de Coelho para HLA Classe I Liofilizado - 1 frasco com 1 mL
AHG1
Soro Kappa de Cabra Anti-Humano - 1 frasco de 1 mL
ATSG
Reagente Controle Antilinfócito T IgG - 1 frasco para 1 mL
ATSM
Reagente Controle Antilinfócito T IgM - 1 frasco para 1 mL
ATSMX
Reagente Controle Anti-T IgM - 1 frasco para 1 mL
AMSM
Reagente Controle Antimonócitos IgM - 1 frasco para 1 mL
AGSM
Reagente Controle Antigranulócitos IgM - 1 frasco para 1 mL
ALSG
Reagente Controle Antilinfócito IgG - 1 frasco para 1 mL
ALSM
Reagente Controle Antilinfócito IgM - 1 frasco para 1 mL
NS
Reagente Controle Negativo NS: 1 frasco para 1 mL
FB1-100
Reagente de Isolamento (Separação) - 1 frasco para 10 mL
FB1-DEV
Reagente de Isolamento (Separação) - 1 frasco para 22 mL
LM144 A
LM144 B
USO PRETENDIDO
A Placa para tipagem HLA Terasaki é uma placa de poliestireno com
60, 72 ou 96 poços contendo anticorpos alo ou monoclonais conhecidos
contra o antígeno HLA. Cada poço contém 1 microlitro de um antissoro
específico ou anticorpo monoclonal e 5 microlitros de óleo mineral.
Cada placa contém um controle positivo e um negativo, para uso na
determinação de antígenos HLA classe I na superfície da célula através da
metodologia de microlinfocitotoxicidade dependente de complemento.
Material para uso em laboratório de imunologia na tipagem HLA,
através deste teste determina-se a compatibilidade HLA entre indivíduos.
Este exame é denominado de teste de histocompatibilidade.
1
PRINCÍPIO DE AÇÃO E REAÇÃO DO PRODUTO
As placas para tipagens monoclonais HLA de classe I contêm uma
mistura de reagentes conhecidos e complemento de coelho, os quais são
usados para determinar a presença de antígenos HLA de classe I em
linfócitos T. Cada poço contém 1 microlitro (1 µL) de um anticorpo específico
mais o complemento, bem como 5 microlitros (5 µL) de óleo mineral . Cada
placa contém um controle positivo e negativo.
Os linfócitos viáveis são incubados em uma mistura de anticorpos
ligados a complemento. Se o linfócito possuir um antígeno reconhecido por
um anticorpo específico, a porção FAB do anticorpo se liga ao antígeno,
formando um complexo antígeno-anticorpo. Após a formação destes
complexos, a fração C1q e o Ca++ do complemento ligam-se à porção FC do
anticorpo. Um anticorpo IgM é necessário para ligar uma molécula C1q ou
dois anticorpos IgG são necessários para ligar uma molécula C1q. A ligação
C1q inicia a cascata do sistema complemento a qual induz a uma lise da
célula com o complexo antígeno-anticorpo. Em uma reação negativa, os
linfócitos se mantêm viáveis. Em uma reação positiva, os linfócitos são
mortos.
COMPONENTES FORNECIDOS


Placa plástica de tipagem HLA classe I – 60, 72 ou 96 poços,
composta por material de origem sérica humana (alossoro ou
monoclonal),
com
determinadas
especificidades,
conforme
identificação em cada uma das folhas de leitura em anexo
(worksheets).
Folhas de leitura identificando a especificidade de cada anticorpo.
MATERIAIS E INSTRUMENTOS NECESSÁRIOS E NÃO FORNECIDOS
Materiais
 Microsseringas HLA (microdispensadores/dosadores)
 Lamínulas plásticas para cobrir as placas tipo Terasaki - Insta-Seal
(cat. # TIS250U da One Lambda) ou lamínulas de vidro, e vaselina
(petrolatum)
 Reagentes corantes e fixadores:
o Para teste de exclusão de corante: eosina-Y (base sódica) e
formaldeído, ou Stain-Fix (cat. SF-500 da One Lambda)
o Para teste fluorescente: FluoroQuench AO/EB (cat. # FQAE-500
da One Lambda)
 Extinção Hemoglobina
o De soro bovino liofilizado: EDTA PBS a 5%; azida sódica a 1%.
2
De células vermelhas totais: solução salina; EDTA PBS a 5%;
solução azida a 1%.
Solução a 1% de tinta: soro albumina bovino (BSA); EDTA PBS 5%;
azida sódica; tinta preta de caligrafia Higgins
Solução 5% EDTA (dissódico) PBS
Solução estoque de Brometo de etídio (EB): água destilada; PBS.
Diacetato de carboxifluoresceína (CFDA)
FluoroBeads e FluoroQuench
o





Instrumentos
 Microscópio de contraste de fase, que poderá ser invertido e com
fluorescência, dependendo da metodologia de separação de linfócitos
utilizada.
Consultar
o
representante
local
para
maiores
esclarecimentos.
CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO, TRANSPORTE, LIMITES DE TEMPERATURA,
UMIDADE OU PROTEÇÃO À LUZ
Validades e condições de armazenamento e transporte de cada um
dos produtos pertencentes a esta família estão indicados em tabela abaixo.
Código
LMB2701
LMB2703
LM 172
LM144 A
LM144 B
CABC-5
CABC-50
CABC-1D
AHG1
ATSG
ATSM
ATSMX
AMSM
AGSM
Temperatura de transporte
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo seco.
Os produtos devem ser transportados
refrigerados, acondicionados com gelo reciclável.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo seco.
Temperatura de
armazenamento
-65°C ou inferior
-65°C ou inferior
-65°C ou inferior
-65°C ou inferior
-65°C ou inferior
-65°C ou inferior
2°C-8°C
-65°C ou inferior
-20°C ou inferior
-20°C ou inferior
-20°C ou inferior
-20°C ou inferior
-20°C ou inferior
3
ALSG
ALSM
NS
FB1-100
FB1-DEV
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo seco.
Os produtos devem ser transportados
congelados, acondicionados com gelo seco.
Os produtos devem ser transportados
refrigerados, acondicionados com gelo reciclável.
Os produtos devem ser transportados
refrigerados, acondicionados com gelo reciclável.
-20°C ou inferior
-20°C ou inferior
-20°C ou inferior
2°C-8°C
2°C-8°C
Os produtos que necessitam de transporte em temperatura diferente
da ambiente deverão, durante o seu transporte, estar acondicionados em
caixas de isolamento térmico, não sendo expostas ao calor ou umidade.
No caso de material congelado, somente descongelar a placa que
será utilizada imediatamente, caso contrário, permanecer com as placas no
interior do freezer nas temperaturas indicadas acima. No caso dos
complementos e controles, alíquotas em tubos de menor volume são
recomendadas. Este volume deve ser determinado por cada laboratório,
pois é dependente da rotina individual de cada um.
PRECAUÇÕES
Somente para uso em diagnóstico in vitro.
Cuidados especiais: quando do manuseio do produto, utilizar luvas
descartáveis.
Descartar se houver descongelamento prematuro.
IMPORTANTE: quando se tratar de material altamente perecível, o transporte
e armazenagem devem ser a -65°C, com gelo seco ou freezer.
CUIDADO: Todos os produtos de origem sanguínea devem ser tratados como
potencialmente infecciosos. A fonte de material do qual esse produto foi
derivado foi dada como negativa quando testada de acordo com os
requerimentos para testes pela FDA. Nenhum método de teste conhecido
pode assegurar que produtos derivados de sangue humano não transmitirão
agentes infecciosos.
Não existem
especificidade.
padrões
Americanos
que
indiquem
potência
ou
CUIDADOS COM A AMOSTRA BIOLÓGICA
Tratar como potencialmente infeccioso por ser material para teste
diagnóstico que envolve amostra de origem sanguínea humana.
4
PROCESSO DE MEDIÇÃO
Coleta e Preparo da Amostra
a. Sangue armazenado por menos de 24 horas: coloque 15-20 mL de
sangue total em heparina de sódio (1000 unidades/10 mL de
sangue) em “vacutainer” tampa verde.
b. Sangue armazenado por mais de 24 horas: coloque 15-20 mL de
sangue total em “Vacutainer” ACD ou CPDA.
c. Não use heparina de lítio. IMPORTANTE: o sangue deve ser
armazenado horizontalmente entre 22 e 25°C. Não refrigere.
Isolamento de Linfócito a Partir de Sangue Fresco
1. Centrifugue sangue citrificado ou heparinizado por 10 minutos a
400 x g.
2. Colete a camada tamponada e dilua em volume igual de PBS
(fosfato salino tamponado); misture bem.
3. Espalhe um máximo de 2 mL da mistura da camada
tamponada/PBS sobre 1,5 mL de Ficoll-Hypaque em tubos de 5 mL,
e centrifugue por 10 minutos a 1000 x g.
4. Colete aproximadamente 1 mL da interfase de cada tubo e transfira
para tubos tipo “Fisher”. Centrifugue por 1 a 1 ½ minutos a 3000 x
g em uma centrífuga tipo “Fisher”.
5. Descarte o sobrenadante e ressuspenda o grânulo em PBS.
Centrifugue por 1 min. a 1000 x g (isto remove a maioria das
plaquetas).
6. Descarte o sobrenadante, ressuspenda o grânulo em PBS, e então,
adicione 1 gota de trombina (100 unidades/mL). Misture.
7. Coloque os tubos para girar em uma roda vertical a 8 RPM ou
inverta os tubos por 2-5 minutos ou até que apareçam agregados
brancos.
8. Centrifugue por 3 minutos a 1000 x g em uma centrífuga tipo
“Fisher” e transfira o sobrenadante para limpar os tubos tipo
“Fisher”. Os agregados remanescentes podem ser poupados para o
procedimento de isolamento de monócitos. Centrifugue o
sobrenadante por 1 minuto a 1000 x g.
9. Descarte o sobrenadante e ressuspenda o grânulo por 1 minuto a
1000 x g. Repita.
10.Ressuspenda o grânulo em meio de McCoy e ajuste as células para
uma concentração de 2x106 células/mL de linfócitos totais para
tipagem.
Separando/Isolando Linfócitos T
Atualmente existem diferentes procedimentos para o isolamento de
linfócitos T, sendo que os mais utilizados são:
1. Através da observação empírica, notou-se que os linfócitos B tem a
tendência de se aderirem a superfícies sólidas, enquanto que os
linfócitos T são relativamente não aderentes. Com isso, o uso da
5
técnica de aderência em lã de nylon ainda pode ser usada por alguns
laboratórios, sendo que a viabilidade em células não frescas é bem
baixa, dificultando no processo de tipagem de classe II.
2. Através do processo onde pérolas imunomagnetizadas se ligam aos
linfócitos (T ou B) e, desta forma, através da atração magnética esses
linfócitos são isolados das demais células presentes na amostra.
(FluoroBeads específicas para linfócito T ou B).
Detalhes de Cada Técnica
1. Microtécnica do canudo com lã de nylon: As proporções dadas abaixo
são para coluna capaz de manusear até 10 x 106 células.
a. Feche uma das saídas de um canudo plástico, flexível e
transparente (0,6 x 12-14 cm) em ângulo de 45º.
b. Proceda com um bom retalho de 0,1 g de lã de nylon esfregado,
encharcando-o em HBSS ou PBS em uma placa de Petri.
c. Encha ¾ do canudo com HBSS ou PBS, então, usando a ponteira
de uma pipeta, gradualmente e uniformemente, coloque a lã de
nylon dentro do canudo para uma altura de aproximadamente 6
cm. Nesse estágio a coluna pode ser guardada a 4°C por até 2
semanas.
d. Corte ou perfure o lado selado do canudo fazendo uma abertura
de aproximadamente 2 mm.
e. Lave a lã de nylon com 5 mL HBSS ou PBS e então com 5 mL de
meio contendo HIFCS a 5%
f. Quando o meio cobrir a lã de nylon, gire o canudo para a posição
horizontal e incube por 30 min. a 37°C. Alternativamente, use
meio pré-aquecido (morno).
g. Adicione 0,5 mL de suspensão de linfócitos purificados
(procedimento descrito acima) em HIFCS a 5% ao topo da coluna
e permita ás células se moverem por todo o percurso dentro da
lã. Uma boa separação de célula T e B depende da pureza da
preparação de linfócitos inicial. Portanto, a suspensão deverá ser
isenta de granulócitos e plaquetas.
h. Adicione aproximadamente 0,2 mL de HIFCS a 5% ao topo da
coluna para prevenir ressecamento. Deixe a coluna deitada e
incube a 37°C por 30 min.
i. Para recuperar os linfócitos T, conceda duas lavagens (8 mL cada)
de HIFCS a 5% morno (37°C) gotejando através da coluna que
deverá estar na posição vertical. O eluente contém células T não
aderentes.
j. Para recuperar as células B aderentes, adicione 1,5 mL de HIFCS a
5% à coluna e repetidamente esprema o canudo. Continue esta
etapa até que 8 mL do meio tenha sido usado.
k. Centrifugue ambas as suspensões de células T e B por 5 min. a
1000 x g e lave-as uma vez com 1 mL de HIFCS a 5%.
6
l.
Resuspenda as células em quantidade mínima de meio (ex. 0,5
mL), verifique a viabilidade, conte as células e ajuste a
concentração para 2x106 células/mL.
m. Na média, esse procedimento deverá fornecer uma recuperação
de 80-90% das células.
2. Isolamento
de
linfócitos
T
puros
através
de
pérolas
imunomagnetizadas – Fluorobeads T (One Lambda, Inc.). Esse
procedimento leva menos de 10 minutos para ser completado, sendo
que o procedimento é realizado totalmente em temperatura
ambiente. Fluorobeads T é um reagente de separação composto de
partículas imunomagnéticas acopladas a anticorpo monoclonal (CD2)
específico para o linfócito T. Essas pérolas se ligam seletivamente aos
linfócitos T e são então isoladas com o auxílio de um magneto
(FBAMAG6 + 6 – One Lambda, Inc.).
3. Isolamento a partir de Sangue Total
a. Dispense 2 mL de sangue dentro de um tubo de 5 mL.
b. Resuspenda a solução FluoroBeads T completamente antes do
uso. Agite em aparelho agitador tipo Vortex por 10 segundos.
c. Adicione 100 µL de FluoroBeads T à amostra teste.
Imediatamente tampe o tubo e inverta-o por 2-3 minutos para
dispersar as pérolas magnéticas
d. Agite delicadamente o tubo através de rotação por 3 minutos à
temperatura de 22-25°C para permitir que as pérolas se liguem às
células B (não exceder 4 minutos). Pode ser usada rotação
manual ou mecânica.
e. Adicione 2 mL de developer (solução de trabalho). Tampe o tubo
e inverta-o 2 a 3 vezes para misturar. Esta etapa é essencial!
f. Destampe o tubo e coloque-o em separador magnético por 3
minutos.
g. Remova e descarte o sobrenadante com uma pipeta descartável.
Remova então o tubo do magneto.
h. Lave as células (pérolas) com 1-2 mL PBS/citrato. Delicadamente
agite o tubo para dispersar as pérolas. Recoloque o tubo no
separador magnético por 1 minuto. Remova e descarte os
sobrenadantes. Repita esta operação duas vezes.
i. Destampe o tubo e coloque-o em separador magnético por 1
minuto. Remova o sobrenadante. Lave as células (pérolas) duas
vezes com PBS.
j. Adicione 0,5 mL de CFDA (solução de trabalho pH 5.5) e agite.
k. Incube o tubo horizontalmente no escuro por 10 minutos à
temperatura de 22-25°C.
l. Magneticamente faça a separação (como descrito acima) e lave
as células duas vezes com PBS.
m. Ressuspenda as células em 0,5 mL de McCoy com 5% de HIFCS.
7
n. Adicione 1 µL de célula ressuspendida em um poço de placa
Terasaki virgem. Verifique a contagem de células através de um
microscópio fluorescente. Ajuste a concentração para 2 x 10 6/mL
(2.000 células por poço)
o. A amostra pode ser transferida para um tubo Fisher e
armazenada horizontalmente à temperatura de 2-5°C por até 3
dias antes de ser testado.
Após este procedimento, teremos células T prontas para tipagem HLA
classe I.
Procedendo Com o Teste
Devido à resistência de cada reagente, adote os cuidados necessários
quando dispensando as células e os reagentes. Não toque o fundo dos
poços com as agulhas das seringas.
Descongele as placas em temperatura ambiente (20-25°C) por 15
minutos, e use-a em até uma hora após a retirada do freezer.
1. Para cada poço adicione 1µl de uma suspensão de linfócitos T de 2
x 106 para as placas de tipagem HLA, usando uma seringa de 50 µl
conectada a um dispensador de repetição.
2. Misture as microgotas usando um misturador eletrostático ou um
arame.
3. Incube as placas à temperatura ambiente (20 a 25°C) por 60
minutos.
4. Após a incubação, core e fixe as células:
a. Para teste de exclusão de corante, adicione a cada poço:
 5 µL de corante eosina, seguido de, após 2 minutos, 5 µL por
poço de formaldeído, ou
 10 µL de Stain-Fix (cat # SF-500 da One Lambda)
b. Para teste por fluorescência, adicione 5 µL de FluoroQuench
AO/EB (cat # FQAE-500 da One Lambda) em cada poço.
5. Cubra as placas com lâmina de vidro e sele-as com petrolato
derretido ou com lamínulas para placas Terasaki Insta-SealTM. Deixe
as placas repousarem por 15 minutos (temperatura ambiente) para
que os linfócitos possam assentar. A formação de borbulhas nas
placas pode ser reduzida colocando-as no refrigerador. Elas podem
ser lidas uma ou duas semanas após a selagem (somente pelo
método de exclusão de corante). As placas pelo método
fluorescente podem ser armazenadas a 2-5°C no escuro por até 2
dias.
Célula morta ocorrerá em qualquer poço teste onde o antígeno HLA
na superfície da célula é reconhecido pelo seu anticorpo anti-HLA
conjugado. Quando a técnica de exclusão de corante é usada, linfócitos
negativos (vivos) aparecem pequenos, brilhantes e não refrativos. Linfócitos
positivos (mortos) aparecem escuros e não refrativos com corante eosina.
8
As reações são marcadas (scores) pela estimativa de percentual de células
mortas, através de leitura microscópica.
Para teste fluorescente, os linfócitos negativos (vivos) aparecem
verdes, e os linfócitos positivos (mortos) aparecem vermelhos (quando
usando corante fluorescente da One Lambda com laranja de acridina e
brometo de etídio).
Avaliação Microscópica dos Testes
A contagem da reação é feita pela estimativa de percentual de
células mortas. Se houver linfócitos mortos no controle negativo, o
percentual de células mortas nos poços restantes tem que ser ajustado de
acordo. O padrão ASHI de leitura é:
Score
% de células mortas
Interpretação
1
0 - 10 %
Negativo
2
11 - 20 %
negativo duvidoso
4
21 - 50 %
Positivo fraco
6
51 - 80 %
Positivo
8
81 - 100 %
fortemente positivo
0
-------.
não legível
As frequências fenotípicas para HLA classe I variarão de modo
diferente nas diferentes populações (caucasoides, negroides, orientais,
etc.). Referência 4.
CALIBRAÇÃO DO PROCESSO
Não existe procedimento de calibração para a metodologia em
questão.
CÁLCULOS E OBTENÇÃO DOS RESULTADOS
Não existe cálculo para a obtenção dos resultados da medição. O
resultado é feito pela contagem da reação pela estimativa de percentual de
células mortas realizada pela leitura microscópica.
LIMITAÇÕES DO PROCESSO
Dificuldades na separação celular e contaminação da preparação de
linfócitos com células vermelhas, levedura, monócitos, plaquetas ou
granulócitos podem causar resultados errôneos.
Cabe ainda salientar que resultados errôneos podem ocorrer quando
concentrações de células estão acima ou abaixo do nível aceitável.
Contaminação bacteriológica ou mudança no pH de reagentes monoclonais
podem causar reações falso negativas. Certos antígenos HLA
9
frequentemente exibem especificidades fracas. Estes são chamados
antígenos de reação cruzada e são detalhados por antígenos e anticorpos
de cada placa na folha guia de reação modelo que acompanha a placa.
CONTROLE INTERNO DE QUALIDADE
Uma amostra de um painel previamente conhecido deverá ser tipado
anterior ao início dos testes de rotina para averiguar a confiabilidade do
novo lote de placa recebido no laboratório. Somente utilizar as placas
dentro de seu prazo de validade.
Caso o laboratório queira testar a pureza de suas preparações
celulares ou ainda em combinação identificar a contaminação da
preparação de células, os Controles da One Lambda poderão ser utilizados
conforme explicados abaixo:






NS = Soro de controle normal que é usado para determinar o fundo
de células mortas. Esse soro é proveniente de soro humano do sexo
masculino que não tenha sofrido transfusão com sangue AB negativo.
ABSM, ABSG, ABSMD = Controles antilinfócitos B que são usados para
determinar a pureza dos linfócitos B. Os controles antilinfócitos B são
anticorpos monoclonais os quais são fortemente citotóxicos aos
linfócitos B sem reatividade contra granulócitos, linfócitos T,
plaquetas, monócitos e células vermelhas do sangue teste. (OBS.:
ABSG na diluição de trabalho fornecida, não é recomendado para o
teste de células com leucemia crônica linfocitária, nas placas LCT30D
da One Lambda).
AGSM, AGSMD = Controles antigranulócitos que são utilizados para
determinar a pureza dos granulócitos. Esses controles são anticorpos
monoclonais os quais são fortemente citotóxicos aos granulócitos,
mas sem reatividade contra linfócitos B, linfócitos T, plaquetas,
monócitos e células vermelhas do sangue teste.
AMSM, AMSMD = Controles antimonócitos que são usados para
determinar a pureza de monócitos. Os controles antimonócitos são
anticorpos monoclonais os quais são fortemente citotóxicos a
monócitos, mas sem reatividade contra granulócitos, linfócitos B,
linfócitos T, plaquetas e células vermelhas do sangue teste.
ATSG, ATSM, ATSMX, ATSMD = Controles antilinfócitos T que são
utilizados para determinar a pureza de linfócitos T. Os controles
antilinfócitos T são anticorpos monoclonais os quais são fortemente
citotóxicos a linfócitos T, mas sem reatividade contra granulócitos,
linfócitos B, plaquetas, monócitos e células vermelhas do sangue
teste. OBS.: ATSMX é o único controle anti-T para ser utilizado com
células isoladas com FluoroBeads T.
ALSG, ALSM = Controles antilinfócitos totais que são usados para
determinar a reatividade do complemento. Esse controle é feito com
anticorpos monoclonais os quais são fortemente citotóxicos aos
10
linfócitos humanos. OBS.: não utilize ALSG como controle para teste
com DTT (Ditiotreitol) pois o DTT irá degradá-lo.
VALORES DE REFERÊNCIA OBTIDOS EM POPULAÇÕES SADIAS OU VALORES
DEMOGRÁFICOS,
EPIDEMIOLÓGICOS,
ESTATÍSTICOS,
DESEJÁVEIS,
TERAPÊUTICOS OU TÓXICOS
Não existe este tipo de dado para a metodologia em questão.
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO
A. Potência e Especificidade
Os reagentes-teste foram precisamente caracterizados por triagens
sequenciais sorológicas separados. Painéis de referência de amostras de
linfócitos congelados foram usados em duas triagens separadas.
Dois terços de todos os reagentes selecionados são fortes, com
reatividade HLA específica claramente definida (com 70% de índice de
força), permitindo não mais que 10% de reações falso positivas e 15% de
reações falso negativas. O restante (um terço dos reagentes) não foram de
encontro a esse critério, mas foram exaustivamente investigados quanto à
sua utilidade quando usados para sustentar outros anticorpos bem
definidos.
Anticorpos multiespecíficos são usados somente se anticorpos não
monoespecíficos são disponíveis para uma especificidade em particular.
Anticorpos multiespecíficos foram escolhidos com o mesmo desempenho
característico para todas as especificidades como o anticorpo
monoespecífico. Para confirmar e validar a força e especificidade do soro,
foram feitas triagens contra um painel de linfócitos frescos preparados. As
análises foram feitas usando técnicas de computadas do Eighth
International Histocompatibility Workshop em 1980. (referência 4).
B. Controle Negativo
O antissoro do controle negativo é originário de um sangue saudável
humano masculino do tipo AB, o qual não possui reatividade citotóxica em
testes com doadores de linfócitos selecionados ao acaso. Este controle é
usado para determinar a viabilidade do linfócito.
C. Controle Positivo
O controle positivo é um anticorpo monoclonal e é fortemente
citotóxico aos linfócitos humanos. Este controle é usado para determinar a
atividade de complemento.
11
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
TERASAKI PI, BERNOCO F, PARK MS, OZTURK G, IWAKI Y. Microdroplet testing for
HLA A, B, C and D antigens. Am J. Clin Pathol 69:103-120, 1978.
DANILOVS J, TERASAKI PI, PARK MS, AYOUB G. B lymphocyte isolation by thrombin
nylon wool. In Histocompatibility Testing. Terasaki PI, Ed., UCLA Tissue Typing
Laboratory, Los Angeles, CA 287-288, 1980.
ASHI Laboratory Manual, 2nd ed. Edited by Zachary, Andrea A. and Teresi, Gary, p.
199, 1990.
TERASAKI PI, Ed., Histocompatibility Testing. Los Angeles, CA, 1980.
NIKAEIN A, Ed., ASHI Procedure Manual, 3rd Edition, ASHI, Lenexa, KS.
IDENTIFICAÇÃO DO DISTRIBUIDOR
Biometrix Diagnóstica Ltda.
Estrada da Graciosa, 1081 - Curitiba – PR - CEP: 82840-360
Tel.: (41) 2108-5250
Fax: (41) 2108-5252
DDG: 0800-7260504
E-mail: [email protected]
Website: www.biometrix.com.br
CNPJ: 06.145.976/0001-39
INFORMAÇÕES DO FABRICANTE
One Lambda, Inc.
21001 Kittridge Street
Canoga Park – CA – EUA
REGISTRO ANVISA
80298490007
RESPONSÁVEL TÉCNICA
Edna Cristina Kurokawa Guimarães Ferreira
CRQ/PR: 09302336
12
REVISÕES
Revisão
Descrição da Alteração
Data
00
Elaboração
Formatação, layout, produtos
descontinuados, alteração nas condições de
armazenagem e transporte, inclusão das
denominações comerciais de cada item da
família, inclusão de número de registro e
alteração de Responsável Técnica
Correção das temperaturas de
armazenamento do CABC-1D e AHG1
Alteração do DDG
Revisão gramatical e ortográfica, layout,
alteração de Responsável Técnica
10/2006
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