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Monoclonal Mouse Anti-Human CD64, Fc Gamma Receptor I/APC, Clone 10.1
Monoclonal Mouse Anti-Human CD64, Fc Gamma Receptor I/RPE, Clone 10.1
Monoclonal Mouse Anti-Human CD64, Fc Gamma Receptor I/RPE-Cy5, Clone 10.1
Utilização prevista
Referência C7278
Referência R7219
Referência C7220
Para utilização em diagnósticos in vitro.
C7278, R7219 e C7220 foram concebidos para utilização em citometria de fluxo. O Anti-CD64, 10.1, destina-se
a ser utilizado na identificação de células que expressam o CD64. A interpretação dos resultados deve ser
feita por um profissional qualificado, dentro do contexto dos antecedentes clínicos do doente e de outros testes
de diagnóstico.
Sinónimo de antigénio
FCRI, FCR I (1).
Introdução
CD64 é o receptor de alta afinidade de IgG Fc, que pertence à família de supergenes da imunoglobulina (1).
CD64 é uma glicoproteína de 72 kDa que liga IgG monomérica (IgG1>IgG3>>IgG4>>>IgG2 humana e
IgG3>IgG2a>>>IgG1, IgG2b de ratinho). Três genes, a saber FcR1A, FcR1B, e FcR1C, os quais têm >98
por cento de identidade ao nível do nucleotídeo, foram identificados e localizados no cromossoma 1, banda
q21.1 (2). O gene FcR1A, que especifica o receptor de IgG de alta afinidade, codifica três domínios
extracelulares de tipo C2, semelhantes à Ig, bem como uma região transmembranas de 21 aminoácidos e uma
cauda citoplasmática carregada de 61 aminoácidos (2, 3).
CD64 expressa-se de modo constitutivo em monócitos, macrófagos e células dendríticas no sangue e, a níveis
muito baixos, em neutrófilos. Pode induzir-se uma expressão mais elevada de CD64 em neutrófilos e
eosinófilos por meio de interferon (IFN)  e do factor estimulador de colónias de granulócitos (G-CSF) (2).
O CD64 expressa-se na leucemia mielóide aguda com diferenciação monocítica (M4 e M5) e na leucemia
promielocítica aguda (M3) (4, 5). CD64 actua como mediador nos processos de endocitose, fagocitose,
toxicidade celular dependente de anticorpos, libertação de citocina e geração de superóxidos (2).
Reagente fornecido
Os conjugados de Anti-CD64, C7278, R7219 e C7220, foram formulados a partir de um anticorpo monoclonal
de ratinho purificado. Os conjugados são fornecidos em forma líquida, em tampão contendo soroalbumina
bovina (BSA) a 1% e 15 mmol/L de NaN3, pH 7,2. Cada ampola contém 100 testes (10 µL de conjugado para
um máximo de 106 leucócitos de sangue periférico humano normal).
Isótipo: IgG1, kappa. Concentração do conjugado em mg/L: Ver o rótulo do frasco.
Referência
do Anticorpo
Fluorocromo
Referência Reagente
de Controlo
C7278
APC (Aloficocianina)
X0968
R7219
RPE (R-Ficoeritrina)
X0928
C7220
RPE-Cy5 (R-Ficoeritrina-Cianina 5)
X0955
Imunogénio
Células reumatóides humanas de fluido sinovial e monócitos (6).
Especificidade
O anti-CD64, 10.1, foi incluído no Fifth and Sixth International Workshops and Conferences on Human
Leucocyte Differentiation Antigens (Quinto e Sexto Workshops e Conferências Internacionais sobre Antigénios
de Diferenciação Leucocitária Humana). Estudos efectuados por uma série de laboratórios confirmaram a sua
reactividade com o antigénio de CD64 (2, 7).
O anti-CD64, 10.1, reage com monócitos e com as linhas celulares mielóides HL-60, U937, THP-1 e Mono Mac 6.
O anticorpo não demonstra ter qualquer reacção com células B, células T, células NK, eosinófilos, plaquetas,
fibroblastos, células endoteliais e células epiteliais, em descanso e activados (2, 6).
O anti-CD64, 10.1, reage com um epítopo em FcR1, perto do local de ligação da região Fc da IgG, e bloqueia
a ligação de IgG humana, de IgG de coelho e de IgG2a de ratinho para FcR1 (6).
Precauções
1. Para utilizadores profissionais.
2. Este produto contém azida sódica (NaN3), uma substância química altamente tóxica na forma pura. Em
concentrações de produto, mesmo não classificadas como perigosas, a azida sódica poderá reagir com as
canalizações de chumbo e de cobre, formando acumulações de azidas metálicas altamente explosivas. Ao
descartar, lavar com grandes quantidades de água a pressão, a fim de evitar a acumulação de azidas
metálicas na canalização.
3. Tal como no caso de qualquer produto derivado de fontes biológicas, devem empregar-se processos de
manuseamento apropriados.
Armazenamento
(104002-003)
Armazenar em local escuro, entre 2 e 8ºC. Não utilizar após a data de validade inscrita no frasco. Caso os
reagentes sejam armazenados noutras condições para além das que se encontram especificadas, o utilizador
deve verificar tais condições. Não há sinais óbvios que indiquem a instabilidade deste produto. Por
conseguinte, os controlos positivo e negativo devem ser processados em simultâneo com as amostras do
doente. Caso se observem colorações inesperadas que não possam ser explicadas por variações dos
procedimentos de laboratório e se suspeite de um problema com o anticorpo, contactar com o nosso Centro
de Assistência Técnica.
C7220/C7278/R7219/PT/SSA/06.10.04 p. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Processo de coloração
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Transferir 100 µL de sangue anticoagulado (EDTA) para um tubo de ensaio de polistireno de 12 mm x 75 mm.
Adicionar 10 µL de Anti-CD64 conjugado com fluorocromo e misturar suavemente com um agitador tipo
vortex. O valor 10 µL serve apenas de orientação; o volume ideal deve ser determinado por cada
laboratório.
Utilizar um anticorpo monoclonal não reactivo do mesmo isotipo e conjugado com o mesmo fluorocromo,
como controlo negativo (ver a tabela).
Incubar num local escuro a 4°C durante 30 minutos ou à temperatura ambiente (20–25°C) durante 15–30 minutos.
Adicionar 100 µL de Dako Uti-Lyse™ (referências S3325 ou S3350) Reagent A a cada amostra e
misturar suavemente com um agitador tipo vortex. Incubar durante 10 minutos à temperatura ambiente
num local escuro.
Adicionar 1 mL de Dako Uti-Lyse™ Reagent B a cada amostra e misturar suavemente com um agitador
tipo vortex. Incubar durante 10 minutos à temperatura ambiente num local escuro. Se for utilizado outro
reagente de lise nas etapas 5 e 6, é necessário seguir as recomendações para esse reagente.
Centrifugar a 300 x g durante 5 minutos. Aspirar com cuidado o sobrenadante e descartá-lo, deixando,
aproximadamente, 50 µL de fluido.
Adicionar 2 mL de PBS 0,01 mol/L com 2% de albumina de soro bovino e ressuspender as células,
utilizando um agitador tipo vortex.
Repetir a etapa 7.
Ressuspender o aglomerado num líquido adequado à citometria de fluxo como, por exemplo, 0,3 mL de
PBS. O PBS deve conter 1% de paraformaldeído (agente de fixação), se as amostras não forem
analisadas no mesmo dia.
Analisar num citómetro de fluxo ou armazenar a 2–8°C num local escuro até à data da análise. As
amostras podem ser utilizadas até 24 horas após a lise.
Recomenda-se a inclusão de uma amostra de controlo positiva e uma negativa adequadas com cada série
para controlo do reagente e da preparação. De salientar que os conjugados de fluorocromo são sensíveis à luz
e as amostras devem ser protegidas da luz durante o procedimento de coloração e até à análise.
Em algumas patologias, é possível observarem-se números anormais de células que expressam antigénios
alvo ou níveis aberrantes de expressão de antigénios. Isto pode resultar num padrão de coloração modificado.
É importante compreender o padrão normal de expressão de antigénios e a sua relação com a expressão de
outros antigénios relevantes para efectuar uma análise adequada.
É preferível utilizar reagentes de várias cores, em vez de uma única cor para a análise abrangente de células
neoplásicas de leucemia e linfomas.
Limitações específicas
do produto
Observou-se que os conjugados de RPE-Cy5 se podem ligar a monócitos, causando a coloração do fundo (8).
Referências
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Guyre P, Sun W. CD Guide. CD64. In: Mason D, André P, Bensussan A, Buckley C, Civin C, Clark E, et
al., editors. Leucocyte typing VII. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 7th International
Workshop and Conference; 2000 Jun 19-23; Harrogate, United Kingdom. New York: Oxford University
Press Inc.; 2002. p. 815.
Sun W, O’Shea JK, Guyre PM. MC9. CD64 Workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem
Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14;
Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 988-90.
van de Winkel JGJ, Capel PJA. Human IgG Fc receptor heterogeneity: molecular aspects and clinical
implications [review]. Immunol Today 1993;14:215-21.
Krasinskas AM, Wasik MA, Kamoun M, Schretzenmair R, Moore J, Salhany KE. The usefulness of
CD64, other monocyte-associated antigens, and CD45 gating in the subclassification of acute myeloid
leukemias with monocytic differentiation. Am J Clin Pathol 1998;110:797-805.
Repp R, Schaekel U, Helm G, Thiede C, Soucek S, Pascheberg U, et al. Immunophenotyping is an
independent factor for risk stratification in AML. Cytometry 2003:53B:11-9.
Dougherty GJ, Selvendran Y, Murdoch S, Palmer DG, Hogg N. The human mononuclear phagocyte highaffinity Fc receptor, FcRI, defined by a monoclonal antibody, 10.1. Eur J Immunol 1987;17:1453-9.
Guyre PM, Von dem Borne AEG. M12 CD64 cluster workshop report. In: Schlossman SF, Boumsell L,
Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7;
Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. Volume 1. p. 874-5.
van Vugt MJ, van den Herik-Oudijk IE, van de Winkle JGJ. Binding of PE-CY5 conjugates to the human
high-affinity receptor for IgG (CD64). Blood 1996;88:2358-61.
Explicação dos símbolos
(104002-003)
Número de catálogo
Limites de temperatura
Utilizar até
Dispositivo médico para
diagnóstico in vitro
Manter ao abrigo da luz solar
(consultar a secção de
armazenamento)
Fabricante
Consultar as instruções de
utilização
Código de lote
C7220/C7278/R7219/PT/SSA/06.10.04 p. 2/2
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